超微量分光光度計是一類很重要的分析儀器，常用于定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。利用分光光度法對物質(zhì)進行定量定性分析的儀器，常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。無論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門 ,紫外可見分光光度計督有廣泛而重要的應(yīng)用。
超微量分光光度計是精密光學(xué)儀器，正確安裝、使用和保養(yǎng)對保持儀器良好的性能和保證測試的準(zhǔn)確度有重要作用。
超微量分光光度計的日常維護和保養(yǎng)：
1.光源的壽命有限，為了延長光源使用壽命，在不使用儀器時不要開光源燈，應(yīng)盡量減少開關(guān)次數(shù)。
2.單色器是儀器的核心部分，裝在密封盒內(nèi)，不能拆開。選擇波長應(yīng)平衡地轉(zhuǎn)動，不可用力過猛。為防止色散元件受潮生霉，必須定期更換單色器盒干燥劑(硅膠)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色，應(yīng)立即更換。
3.必須正確使用吸收池，應(yīng)特別注意保護吸收池的兩個光學(xué)面。
4.光電轉(zhuǎn)換元件不能長時間曝光，且應(yīng)避免強光照射或受潮積塵。
5.儀器若暫時不用要定期通電，每次不少于20～30min，以保持整機呈干燥狀態(tài)，并且維持電子元器件的性能。
紫外可見分光光度計的日常維護和對主要技術(shù)指標(biāo)的簡易測試方法，經(jīng)常對儀器進行維護和測試，以保證儀器工作在較佳狀態(tài)。
一、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。他們可以引起機械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機械部分的誤差或性能下降；造成光學(xué)部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護保養(yǎng)時應(yīng)定期加以校正。應(yīng)具備四季恒濕的儀器室，配置恒溫設(shè)備，特別是地處南方地區(qū)的實驗室。
二、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體也會影響機械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關(guān)、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此必須定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵等。
三、儀器使用一定周期后，內(nèi)部會積累一定量的塵埃，可以由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開啟儀器外罩對內(nèi)部進行除塵工作，同時將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對光學(xué)盒的密封窗口進行清潔，必要時對光路進行校準(zhǔn)，對機械部分進行清潔和必要的潤滑，最后，恢復(fù)原狀，再進行一些必要的檢測、調(diào)校與記錄。
紫外可見分光光度計注意事項和問題處理
1.開機前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出，儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。
2.比色皿內(nèi)溶液以皿高的2/3～4/5為宜，不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器。測定時應(yīng)保持比色皿清潔，池壁上液滴應(yīng)用擦鏡紙擦干，切勿用手捏透光面。測定紫外波長時，需選用石英比色皿。
3.測定時，禁止將試劑或液體物質(zhì)放在儀器的表面上，如有溶液溢出或其它原因?qū)悠凡叟K，要盡可能及時清理干凈。
4.實驗結(jié)束后將比色皿中的溶液倒盡，然后用蒸餾水或有機溶劑沖洗比色皿至干凈，倒立晾干。關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi)，蓋上防塵罩，做好使用登記，得到管理老師認(rèn)可方可離開。
紫外可見分光光度計問題處理：
1、如果儀器不能初始化，關(guān)機重啟。
2、如果吸收值異常，依次檢查：波長設(shè)置是否正確（重新調(diào)整波長，并重新調(diào)零）、測量時是否調(diào)零（如被誤操作，重新調(diào)零）、比色皿是否用錯（測定紫外波段時，要用石英比色皿）、樣品準(zhǔn)備是否有誤（如有誤，重新準(zhǔn)備樣品）。
紫外可見分光光度計法從問世以來，在應(yīng)用方面有了很大的發(fā)展，尤其是在相關(guān)學(xué)科發(fā)展的基礎(chǔ)上，促使分光光度計儀器的不斷創(chuàng)新，功能更加齊全，使得光度法的應(yīng)用更拓寬了范圍。
1.原理
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量， 相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質(zhì)就有其 特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或 測 定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸 收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
紫外可見分光光度法的定量分析基礎(chǔ)是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。即物質(zhì)在一定濃度 的吸光度與它的吸收介質(zhì)的厚度呈正比。
2.應(yīng)用
2.1 檢定物質(zhì)
根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是最大吸收波長雖ax和摩爾吸收系數(shù)是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù)。這在藥物分析上就有著很廣泛的應(yīng)用。在國內(nèi)外的藥典中，已將眾多的藥物紫外吸收光譜的最大吸收波長和吸收系數(shù)載入其中，為藥物分析提供了很好的手段。
2.2 與標(biāo)準(zhǔn)物及標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo) 準(zhǔn)譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高，且測定條件要相同。
2.3 比較最大吸收波長吸收系數(shù)的一致性
2.4 純度檢驗
2.5 推測化合物的分子結(jié)構(gòu)
2.6 氫鍵強度的測定
實驗證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不 同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑 。
2.7 絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定
2.8 反應(yīng)動力學(xué)研究
2.9 在有機分析中的應(yīng)用
有機分析是一門研究有機化合物的分離、鑒別及組成結(jié)構(gòu)測定的科學(xué)，它是在有機化學(xué)和分析化學(xué)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的綜合性學(xué)科。
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