液相色譜柱是一種用于液體色譜分析儀器。
液相色譜柱的日常維護(hù)：
1、每次開機(jī)時(shí)，流速和柱壓要逐漸增加，突然迅速增加，會(huì)使柱床受到?jīng)_擊，引起紊亂，產(chǎn)生空隙
2、在進(jìn)樣前使色譜系統(tǒng)充分平衡，是否平衡可由基線加以判斷
3、在進(jìn)樣前，檢查色譜系統(tǒng)的各個(gè)接頭，通常由此能發(fā)現(xiàn)是否有漏液現(xiàn)象。如有漏液，空氣會(huì)從漏縫進(jìn)入系統(tǒng)引起基線漂移，影響峰高和峰面積的重復(fù)性
4、不要把柱接頭上得太緊，否則易損壞接頭螺紋，引起滲漏
5、不要把柱子放在有氣流的地方或直接放到陽(yáng)光下，氣流和陽(yáng)光都會(huì)使柱子產(chǎn)生溫度梯度造成基線漂移；如果懷疑基線漂移是由溫度梯度引起的，可以設(shè)法使柱子恒溫
6、若儀器用做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)很多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長(zhǎng)柱壽命
7、如果懷疑樣品會(huì)污染色譜柱，可以用合適的溶劑幾百毫升、慢慢沖洗柱子過(guò)夜，第二天早晨再用流動(dòng)相重新平衡柱子約3min、
8、在因裝卸、更換、貯存等而挪動(dòng)柱子時(shí)，動(dòng)作要輕，不要使其受到碰撞，以免柱床因震動(dòng)產(chǎn)生空隙或通道
9、柱要加標(biāo)簽，新舊分開，不要放在溫度變化很大的地方
10、液相色譜柱柱子不用或貯藏時(shí)，應(yīng)封閉并貯存在惰性溶劑中
反相高效液相色譜柱是基于溶質(zhì)、極性流動(dòng)相和非極性固定相表面間的疏水效應(yīng)建立的一種色譜模式，任何一種有機(jī)分子的結(jié)構(gòu)中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高。
在高效液相色譜中這是應(yīng)用面較廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色譜條件下，流動(dòng)相多采用酸性的、低離子強(qiáng)度的水溶液，并加一定比例的能與水互溶的異丙醇、乙腈或甲醇等有機(jī)改性劑，大量使用的填料為孔徑在30納米以上的硅膠烷基鍵合相，除此之外，也有少量高聚物微球。
反相高效液相色譜柱的使用和維護(hù)
在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問(wèn)題，以維護(hù)色譜柱。
(1)柱子在裝卸、更換時(shí)，動(dòng)作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng)，以免柱床產(chǎn)生空隙。
(2)如果儀器用來(lái)做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長(zhǎng)柱子的壽命。
(3)避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。
溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。
(4)應(yīng)逐
漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>
(5)如使用柱溫控制裝置時(shí)，應(yīng)注意在通人流動(dòng)相后才能升溫。
(6)一般說(shuō)來(lái)反相高效液相色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
(7)選擇使用適宜的流動(dòng)相，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
(8)避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個(gè)保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
(9)經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75mL。
(10)保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對(duì)禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間。
(11)反相高效液相色譜柱使用過(guò)程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)人柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
(12)在完成分離分析工作之后，不應(yīng)立即停機(jī)，需及時(shí)對(duì)色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗，一般0.5h以上，以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。
在日常分離分析工作中，反相高效液相色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，色譜柱使用是否得當(dāng)，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
1、一般定性
用已知物和直接對(duì)照法定性，這是一種相對(duì)可靠的方法，主要可以分為以下四種：
1）保留時(shí)間和保留體積
2）相對(duì)保留值
3）已知物增加峰高法
4）雙柱貨雙體系
實(shí)驗(yàn)表明，各類同系物在兩根不同柱上的Vg值有如下關(guān)系：
式中：VgI表示在柱I上的比保留體積；VGII表示在柱II上的比保留體積；A1與C1為常數(shù)。
從上式可以看出，同系物在兩個(gè)性質(zhì)不同的色譜柱上，比保留體積Vg的對(duì)數(shù)有線性關(guān)系，下圖就是根據(jù)某些化合物和領(lǐng)苯二甲酸二異葵酯柱上的比保留體積的對(duì)數(shù)制作出的。
經(jīng)過(guò)領(lǐng)苯二甲酸二異葵酯柱分離后，在lgvgII為1.8的位置上有一個(gè)未知峰，由圖可看出有兩種可能性，即酮與伯醇；此時(shí)，將樣品在柱上I上進(jìn)行分離，得到lgVgII為1.62的色譜峰，從而可確定該峰是酮而不是醇。
在液相色譜中，可用雙體系定性，通過(guò)改變流動(dòng)相和固定相，從而改善分離的選擇性，通常改用與原色譜體系有較大差別的其他色譜體系來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。
2、保留值分隨份子結(jié)構(gòu)或性質(zhì)變化的規(guī)律
1）GC中的碳數(shù)規(guī)律：同系物間，在一定溫度下，保留值變化遵循如下規(guī)律：
2）GC中的沸點(diǎn)規(guī)律：同族具有相同碳原子數(shù)目的同分異構(gòu)體間存在如下關(guān)系：
3)LC中的保留值規(guī)則：對(duì)于份子中存在不同數(shù)目的重復(fù)官能團(tuán)的化合物，有如下的經(jīng)驗(yàn)公式：
3、反向液譜的定性
在氣譜中廣泛使用的Kovats指數(shù)定性，在夜譜中，由于組分的保留行為不僅與固定相有關(guān)，還與流動(dòng)相的種類及濃度有關(guān)，所以不能直接用同系物間，在一定溫度下，保留值變化遵循如下規(guī)律指數(shù)定性。
4、計(jì)算機(jī)檢索
計(jì)算機(jī)不僅都能貯存大量保留指數(shù)，而且還可以將庫(kù)中標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為用戶色譜條件下保留指數(shù)和tR值，靠檢索功能定性。
5、色譜中的輔助技術(shù)
液相色譜，對(duì)于未知物結(jié)構(gòu)的確定，也常常使用一些輔助技術(shù)，常用的有質(zhì)譜，紅外，核磁等。
使用非在線聯(lián)用技術(shù)時(shí)，首先將色譜分離后的純樣品收集。
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