1、色譜柱的使用說明：
（1）色譜柱使用前注意事項(xiàng)：色譜柱的儲存液無特殊說明，均為評價報告所示的流動相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應(yīng)先用10％左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，堵塞色譜柱。
（2）流動相：流動相中所使用的各種有機(jī)溶劑要盡可能使用色譜純，配流動相的水可以是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經(jīng)過0.45μm的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動相。另外，裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0，BDSC18適合于堿性化合物，PH值適用范圍為2.0-10.0。當(dāng)必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時，每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗，并完全置換掉原來所使用的流動相。
（3）樣品：樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理柱（SPE）對樣品進(jìn)行預(yù)處理；若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。在用正相色譜法分析樣品時，所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。
2、色譜柱的保存：
（1）反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)：使用緩沖液或含鹽的流動相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。
（2）長期保存色譜柱：如色譜柱要長時間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度可以是室溫。
3、色譜柱的再生：
因?yàn)樯V柱是消耗品，隨著使用時間或進(jìn)樣次數(shù)的增加，會出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一般來說可能是柱效下降。
（1）反相柱的再生：依次采用20-30倍的色譜柱體積的甲醇：水=10：90（V/V），乙腈，異丙醇作為流動相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。
（2）正相柱的再生：依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴(yán)格脫水。
4、色譜柱在使用過程中易出現(xiàn)的問題和解決辦法：
色譜柱在使用中常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加，屬于正?，F(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外），以下列舉了部分常見原因及解決辦法：
（1）色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染；
解決方法：如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10％的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱。
（2）色譜柱頭的填料被樣品污染；
解決方法：如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內(nèi)前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細(xì)修復(fù)后，重新安裝上柱頭螺絲。
（3）色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑，形成結(jié)晶析出；解決方法：如確定定是鹽結(jié)晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。
（4）流動相PH值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。解決方法：如果因PH值使用不當(dāng)，很難恢復(fù)
通常影響色譜柱使用壽命的主要因素有以下幾點(diǎn)。
?、偕V柱破損
石英毛細(xì)管柱的聚酰亞胺層，如有少許破損就很難再保護(hù)脆弱的石英毛細(xì)管。當(dāng)柱箱連續(xù)地加熱和冷卻、柱箱風(fēng)扇的震動和柱架等都會對毛細(xì)管造成應(yīng)力，最終在色譜柱有弱點(diǎn)處破裂。大內(nèi)徑柱更容易破裂，也就是說，在操作0.45～0.53mm內(nèi)徑柱時，要比0.18～0.32mm內(nèi)徑柱更要小心。
如果已經(jīng)斷裂的色譜柱，仍在高溫下連續(xù)運(yùn)行或是作多階溫度程序運(yùn)行，很可能損壞色譜柱，因破裂的后半段暴露在高溫的氧氣中，這樣會很快地破壞固定相；而斷裂的前半段，由于有載氣流過，氧的影響會小些。如斷裂的色譜柱沒有再加熱或只暴露在高溫或空氣中很短時間，斷裂的后半部分不會受到明顯損壞，可考慮作為它用。
?、跓釗p傷
超過色譜柱溫度上限，會造成色譜柱固定相和管表面加速損壞，色譜柱的過量流失會使活性組分拖尾，降低柱效。一般熱損壞是一個很慢的過程，但有氧存在時，會大大加速熱損壞。另外在有漏氣情況下，色譜柱過熱也會加速損壞或永久性損壞色譜柱。
?、垩鯎p傷
氧是毛細(xì)管柱的大敵，在接近室溫下，不會對色譜柱有太大損害，柱溫升高時會嚴(yán)重?fù)p壞色譜柱。對于極性固定相，即使溫度和氧濃度很低時，也會發(fā)生嚴(yán)重?fù)p壞。雖然，短時間地暴露在空氣中，如注射空氣或更換隔墊不會有太大問題，但也應(yīng)避免。
在氣路上有漏氣的地方(如氣路、接頭和進(jìn)樣器)，往往是進(jìn)入氧氣的源頭，當(dāng)色譜柱加熱時，就會很快地?fù)p壞固定相，會過早地引起固定液的過度流失，至使活性化合物有拖尾，降低柱效。在不太嚴(yán)重的情況下，色譜柱還會有一定的分離功能，但柱效已經(jīng)下降。在嚴(yán)重的情況下，色譜柱就會完全失效。
④化學(xué)損傷
有少數(shù)化合物會使固定相遭到破壞。不揮發(fā)性化合物，進(jìn)入色譜柱常常會降低色譜柱的性能，但是不會破壞固定相，有條件時這些沉積的殘留物可以用溶劑沖洗而除去，能恢復(fù)色譜柱的性能。
要避免進(jìn)入色譜柱的主要化合物是無機(jī)和礦物堿和酸，這些礦物堿和酸不會揮發(fā)，通常積累在色譜柱的前端，如果使其停留在那里就會破壞固定相，使色譜柱過早的大量流失，使活性化合物拖尾，以及使柱效下降，其征兆和熱損壞及氧損壞類似。
由于化學(xué)損壞多發(fā)生在色譜柱的前端，所以可把色譜柱的前端切掉0.5～1m，在比較嚴(yán)重的情況下，可以截去5m或更長的一段。如果使用保護(hù)柱就會減小色譜柱被損害的長度，但是需要經(jīng)常處理或更換保護(hù)柱。酸或堿還常常會破壞石英管內(nèi)的去活表面，因而會引起活性化合物的峰形變壞。
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氣相色譜中，毛細(xì)管色譜柱被污染是很普遍的問題，不幸的是，它和各種各樣常見的故障相似，常常被錯誤的判斷為其它的故障，雖然被污染了的色譜柱并沒有損壞，但已失去效能。通常有兩種基本類型的污染物，不揮發(fā)性污染物和半揮發(fā)性污染物。不揮發(fā)性污染殘留物不能從色譜柱里洗脫出來，而是累計(jì)在色譜柱里，這樣它就成為涂漬了殘留物的色譜柱，因而影響溶質(zhì)的分配。而且殘留物還會和活性化合物相互作用，甚至造成峰的拖尾，減少峰面積。
活性溶質(zhì)是指那些含有羥基或氨基(一些硫醇基)及醛的物質(zhì)；半揮發(fā)性污染物最后會洗脫出去，但需要幾個小時或幾天時間，半揮發(fā)性污染物和不揮發(fā)性殘留物一樣，他們也會引起峰形變壞和峰面積減小。此外，還常常引起基線不穩(wěn)定(漂移、噪音增加)或出鬼峰等。
污染物的來源有許多，其中進(jìn)樣是最主要的來源。生物液體和組織、土壤、廢水、地下水和類似的含有大量半揮發(fā)的和不揮發(fā)物質(zhì)的基體，甚至使用凈化方法，樣品也會含有少許這些物質(zhì)并帶到注射樣品中，幾次到幾百次進(jìn)樣就會造成殘留物的積累故障。柱上進(jìn)樣、不分流進(jìn)樣和大口徑柱直接進(jìn)樣等進(jìn)樣方法常常會造成上述色譜柱的嚴(yán)重污染。
污染物還會來源于氣體管路、凈化器、密封墊、隔墊的碎屑或其他與樣品可能接觸的物質(zhì)，如樣品瓶、溶劑、注射器、移液管等，這些類型的污染物可能會突然性的引起故障。
液相色譜柱是一種用于液體色譜分析儀器,其結(jié)構(gòu)主要有：
a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。
柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端是3/16英寸的內(nèi)螺紋(國內(nèi)外已規(guī)范化)。7/16英寸外螺紋與1/4英寸柱管(Φ6.35mm)連接，中間放置壓壞用于密封。3/16英寸的內(nèi)螺紋與1/16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積，在安裝色譜柱時，用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應(yīng)嚴(yán)格控制在2.5mm長或其他固定尺寸)。
在兩端柱接頭內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或?yàn)V網(wǎng))，用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失。空柱各組件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑，以避免腐蝕。
b、柱填料：
液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進(jìn)行的，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定。
正相柱：多以硅膠為柱填料。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種，其顆粒直徑在3—10 ?m的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。
反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。
常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒粒徑在3—10 ?m之間。
安裝方法：
a、拆開柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。
b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
c、 按柱管上標(biāo)示的流動相流向，將色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如條件允許，建議在柱前使用保護(hù)柱);柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時一定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時針擰緊空心螺釘，直到擰不動為止，再用扳手繼續(xù)順時針擰1/4-1/2圈，切記不要用力過大。如色譜柱通過流動相加壓后有漏液現(xiàn)象，請用扳手繼續(xù)順時針擰1/4圈，直至不漏液為止。
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