避免這個問題就能提高高效液相色譜柱其使用壽命
色譜柱用久后常出現(xiàn)柱壓升高,柱效降低,峰形畸變, 保留時間改變等變化,如不采取適當(dāng)措施,色譜柱將無法再使用,縮短色譜柱的使用壽命。在高效液相色譜儀的使用中,保持高效液相色譜柱的柱效、容量和滲透特性,延長柱子的使用壽命非常重要。
1.流動相對色譜柱的損害因素
顆粒雜質(zhì):目前廣泛使用的柱填料直徑多在10um以下,微小的顆粒雜質(zhì)很容易使柱子發(fā)生堵塞,因此使用的溶劑應(yīng)當(dāng)過濾,柱子上端接頭應(yīng)當(dāng)裝微孔過濾片以阻擋顆粒物進入柱中。
水溶液中的微生物:以水溶液為流動相時,應(yīng)防止細菌的生長,五氯酚、疊氮化鈉、辛酸等能防止細菌生長。當(dāng)用水溶液或有機酸緩沖液保護柱子時,一些厭氧霉菌可能在色譜柱中滋生,堵塞固定相顆粒間的空隙。
pH值:對硅膠基鍵合相填料,水溶液pH值不可超過2-7.5這一范圍,當(dāng)pH>8時,硅膠會釋出
生成絮狀物堵塞柱子,且難以復(fù)原,柱效很快降低,甚至完全失效。
鹽類析出:當(dāng)在流動相緩沖液中加入和水混溶的有機溶劑時,其中的鹽類溶解度下降,可析出鹽類沉淀,堵塞柱子;加入粘度不同的樣品溶液也可能發(fā)生類似現(xiàn)象。所以緩沖液中鹽的濃度宜低,樣品提取液的組成應(yīng)和流動相匹配。
2.樣品對色譜柱的損害因素
雜質(zhì)堵塞:樣品中的微粒同樣會使柱子堵塞,樣品也應(yīng)進行過濾處理。
樣品組分的不可逆吸附:通常被吸附的組分有蛋白質(zhì)、醣等,可以采取加裝保護柱,或使用適應(yīng)的溶劑反沖來處理。常用溶劑有四氫呋喃(適用于溶解有機高聚物和工業(yè)樣品中的焦油)、高濃度的脲或鹽酸胍溶液(使蛋白質(zhì)改性而洗脫)、高離子強度的磷酸鹽緩沖液(pH=7,適合反相柱和離子交換柱,可除去蛋白質(zhì)和醣等)。
樣品組分與固定相反應(yīng):這種反應(yīng)對NH2柱的影響較嚴重,NH2易和酐、酮形成希夫(Schiff)縮合而減少活性點,使保留時間縮短,因此羰基化合物樣品和流動相(如丙酮、乙酸乙酯等)不宜使用NH2柱。
活性點被覆蓋:由于固定相吸附樣品中的組成或雜質(zhì)而使活性點被覆蓋,在柱壓升高的同時保留時間減少,將樣品過濾或使用萃取分離柱(對大分子有機物如蛋白質(zhì)、白細胞等)效果較好。
3.色譜柱固定相的化學(xué)變化
色譜柱固定相分解、活性基團變性以及鍵合相基團脫落會使保留時間顯著變化。
1)鍵合相基團脫落
絕大多數(shù)鍵合相都是通過硅氧硅鍵(Si-O-Si)連接在硅基質(zhì)上,形成帶有機基團的固定相Si-O-Si-R(R為 G18H37、C8H17、CnH2n+1)。硅氧硅鍵可在水溶液中水解而斷裂,使鍵合相基團脫落,對C2和NH2柱鍵合相基團脫落不可忽視。為減少或防止基團脫落,可增加流動相的有機溶劑量,降低離子強度和pH值,對基團已脫落的固定相,可用合適的硅烷試劑再生。
2)固定相分解或活性基團變性
例如氰基柱的保留時間顯著縮短,但鍵合相中C、H、N的百分含量并無大變化,證明未發(fā)生—CN水解成-COOH反應(yīng),而是形成了衍生物。在硅上增加烷基可減少水解。
4.高效液相色譜柱的保養(yǎng)
色譜柱在使用一段時間后,常遇到柱子受污染,柱效下降的問題,采用適當(dāng)?shù)姆椒▽ιV加以保護和再生,能夠延長色譜柱的使用壽命。
液相色譜柱是實驗室一種常用的色譜配件，也是液相色譜儀的必不可缺的一部分，那么，我們在做樣品分析的時候，如果色譜柱出現(xiàn)柱子柱流失怎么辦呢？下面為大家講講。
首先明白液相色譜柱柱流失是不可避免的。柱流失程度與什么因素有關(guān)?
1、柱流失程度與固定相種類和色譜柱規(guī)格有關(guān)，一般固定相的量越多，柱流失則相對較高。
2、柱流失與柱溫以及載氣中氧氣的濃度有關(guān)。高溫下，固定相的分解會加快，因此，高溫時的流失會比低溫時高。氧氣是許多固定相分解的催化劑，特別是在高溫時段，強調(diào)載氣的純度和液相色譜柱安裝的氣密性，一方面就是出于氧氣會加劇柱流失的考慮。
3、此外，液相色譜柱隨著使用次數(shù)和時間的增加，固定相的穩(wěn)定性最終也會發(fā)生不可逆的變化，導(dǎo)致柱流失的增加。液相色譜柱柱流失嚴重情況多出現(xiàn)在進樣的溶液類型，5MS的柱子是非極性的，當(dāng)使用極性溶劑時，就會發(fā)生反應(yīng)而導(dǎo)致大量柱流失，在做測試時一定要留意樣品的性質(zhì)。
1.漂移
漂移是指儀器穩(wěn)定后一段時間內(nèi)基線漂離原點的距離，通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢。高品質(zhì)的儀器能在較短的時間內(nèi)達到穩(wěn)定，從而在一定程度上提高了分析效率。
2.系統(tǒng)的，整體開發(fā)
這里指的是儀器的整體開發(fā)，是一個完整的系統(tǒng)。目前市場上有這個現(xiàn)象，說我的泵是進口的，或者是檢測器怎么好，用了什么很多的進口件組裝等等。其實這是個誤區(qū)。液相色譜是個復(fù)雜的系統(tǒng)，不是整體開發(fā)的，各項指標(biāo)之間、軟件和硬件、硬件和硬件等都不匹配，整體水平不會高到哪里去，而且在售后服務(wù)方面對用戶也是不負責(zé)任的。
整體開發(fā)的主要優(yōu)點有：各項技術(shù)指標(biāo)統(tǒng)一、儀器各單元的通信協(xié)調(diào)、能夠建立一個整體的數(shù)字化評價系統(tǒng)、體現(xiàn)了企業(yè)的科技及開發(fā)實力。
3.操作方便
操作方便性無論是對新手還是成熟的用戶都是很重要的。液相色譜儀的操作越簡單，有利于提高分析效率，也為以后分析方法的拓展提供有力的幫助。上海伍豐科學(xué)儀器有限公司的WS-100工作站軟件實現(xiàn)了真正的智能化操作。它摒棄了以往工作站軟件只能起到數(shù)據(jù)處理的理念，率先在國內(nèi)推出了集控制與后處理于一身的軟件，在操作使用上給用戶帶來了極大的方便。是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。CL=2×Nd×C/H(CL ：最小檢測濃度 Nd:噪音 C：樣品濃度最小檢測濃度 H：樣品峰高)由上式可見，最小檢測濃度是和噪音成正比的，噪音越大，最小檢測濃度就越大，靈敏度就越低。某些山東液相色譜儀廠家回避了這個指標(biāo)，說明他們不愿在最小檢測濃度的基礎(chǔ)上去比較噪音.
4.噪音
噪音是指由儀器的電器元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動。噪音的大小直接關(guān)系到儀器的檢測靈敏度，噪音越大，檢測的靈敏度就越低。對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好，否則噪音過大將會導(dǎo)致基線不穩(wěn)，甚至影響分析結(jié)果。
5.定性定量重復(fù)性
國產(chǎn)液相色譜儀廠家認為主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標(biāo)，這對于分析樣品來說是非常重要的。好的儀器其穩(wěn)定性應(yīng)該是十分優(yōu)秀的，這就要求多次進樣保留時間及含量的一致性，這樣做出來的結(jié)果才能使人信服。
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