分光光度計(jì)中zui簡單的和應(yīng)用zui普遍的一種。它的特點(diǎn)是只有一條光束。通過交換參比和樣品的位置,使其分別進(jìn)入光路。
在參比(溶劑)進(jìn)入光路時(shí),調(diào)零。然后將樣品進(jìn)入光路的信號和參比信號進(jìn)行比較,就可在顯示器上讀出樣品的透過率和吸光度。
分光光度計(jì)的保養(yǎng)方法
1.若大幅度改變測試波長,需稍等片刻,等燈熱平衡后,重新校正“0”和“100%”點(diǎn)。然后再測量。
2.指針式儀器在未接通電源時(shí),電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況,需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。
3.比色皿使用完畢后,請立即用蒸餾水沖洗干凈,并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,以防止表面光潔度被破壞,影響比色皿的透光率。
4.操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈,以免影響光效率。
5.1900型等分光光度計(jì),由于其光電接收裝置為光電倍增管,它本身的特點(diǎn)是放大倍數(shù)大,因而可以用于檢測微弱光電信號,而不能用來檢測強(qiáng)光。
否則容易產(chǎn)生信號漂移,靈敏度下降。針對其上述特點(diǎn),在維修、使用此類儀器時(shí)應(yīng)注意不讓光電倍增管長時(shí)間暴露于光下;
因此在預(yù)熱時(shí),應(yīng)打開比色皿蓋或使用擋光桿,避免長時(shí)間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。
6.放大器靈敏度換擋后,必須重新調(diào)零。
7.比色杯的配套性問題。比色杯必須配套使用,否則將使測試結(jié)果失去意義。在進(jìn)行每次測試前均應(yīng)進(jìn)行比較。
具體方法如下;分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液,把儀器置于某一波長處,石英比色杯;220nm、700nm裝蒸餾水,玻璃比色杯:
700nm處裝蒸餾水,將某一個(gè)池的透射比值調(diào)至100%,測量其他各池的透射比值,記錄其示值之差及通光方向;
如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用,若超出此范圍應(yīng)考慮其對測試結(jié)果的影響。
分光光度計(jì)由于在每個(gè)波長都需要變換參比和樣品的位置,所以只能手動,不能掃描吸收光譜。
它的結(jié)構(gòu)比較簡單,使用也有一定限制,但如配置程序控制和打印裝置,則對一些常規(guī)的定量測定還是比較適用的。
紫外及可見光分光光度計(jì)的可測波長范圍為200一1000 nm,也有波長范圍為200- 400 nm的紫外分光光度計(jì),但前者較為普遍。紫外及可見光分光光度計(jì)的構(gòu)造原理與可見光分光光度計(jì)(如721型分光光度計(jì))相似。由于玻璃吸收紫外光,因此單色器要用石英棱鏡或光柵。
(一)光(light source)
有鎢絲燈及氫燈(或氛燈)兩種??梢姽鈪^(qū)(360一1000 nm)使用鎢絲燈;紫外光區(qū) (200一360 nm)則用氫燈或氛燈。
(二)吸收池(absorption cell)
由于玻璃吸收紫外光.吸收池要用石英材質(zhì)。
(三)檢瀏器(detector)
檢側(cè)器使用兩只光電管,一為氧化艷光電管,用于625一1000 nm波長范圍;另一只是銻艷光電管,用于200一625 nm波長范圍。光電倍增管亦為常用的檢測器,其靈敏度比一般的光電管高2個(gè)數(shù)量級。
紫外及可見光分光光度計(jì)分單光束和雙光束型。單光束型儀器使用前一般需要預(yù)熱以使儀器穩(wěn)定,缺點(diǎn)是難以消除與補(bǔ)償由于光源與電子測量系統(tǒng)不穩(wěn)定等所引致的誤差。雙光束型儀器能夠消除與補(bǔ)償由于光源、電子測量系統(tǒng)不穩(wěn)定等所引致的誤差,所以其測盤的精確度就提高了。
其工作原理可描述為:由光源(鎢絲燈氘燈,根據(jù)波長而變換使用)發(fā)出的光經(jīng)人口狹縫及反射鏡反射至石英棱鏡或光柵,色散后經(jīng)過出口狹縫而得到所需波長的單色光束。然后由反射鏡反射至由馬達(dá)轉(zhuǎn)動的調(diào)制板及扇形鏡上。當(dāng)調(diào)制板以一定轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)時(shí),時(shí)而使光束通過,時(shí)而擋住光束,因而調(diào)制成一定頻率的交變光束。之后扇形鏡在旋轉(zhuǎn)時(shí),將此交變光束交替地投射到參比溶液(空白溶液)及試樣溶液上,后面的光電倍增管接受通過參比溶液及為試樣溶液所減弱的交變光通量,并使之轉(zhuǎn)變?yōu)闇y量信號。此信號經(jīng)放大并用解調(diào)器分離及整流,然后以電位器自動平衡此兩直流信號的比率,并依照記錄器記錄得到吸收曲線。
1、紫外可見分光光度計(jì)噪音較大
原因:
光源燈泡使用時(shí)間超過壽命期
處理方法:
更換光源燈泡
2、在使用過程中,出現(xiàn)數(shù)字顯示不能歸零,同時(shí)伴有圖線記錄基線位置偏高
原因:
?、俟怆姳对龅壤匣?,性能降低
?、谛盘柼幚戆蹇赡馨l(fā)生故障
③前置放大版出現(xiàn)故障,引起反饋量增大
處理方法:
①開機(jī)通電,先做記錄故障曲線,再與原始記錄的標(biāo)準(zhǔn)曲線對照,找出異同點(diǎn),并作一下定性定能分析。然后用一只同型號規(guī)格的新光電倍增管替換機(jī)上的光電管,再開機(jī)實(shí)驗(yàn),結(jié)果記錄出來的圖線并沒有什么變化,由此證明光電倍增管沒有老化變質(zhì)。
②進(jìn)一步檢查信號處理板,未發(fā)現(xiàn)信號處理板各元器件損壞,對影響靈敏度有關(guān)的電位器檢測,結(jié)果測得數(shù)據(jù)正常,這說明信號處理板沒有故障。
3、紫外可見分光光度計(jì)自檢時(shí)提示波長自檢出錯(cuò)
原因:
自檢過程中可能打開過儀器樣品室的蓋子
處理方法:
關(guān)上儀器樣品室蓋子,重新自檢
4、儀器自檢時(shí)提示通訊錯(cuò)誤
原因:
儀器與電腦之間的數(shù)據(jù)線沒有連接好
處理方法:
連接好數(shù)據(jù)線,重新打開儀器和軟件,重新自檢
5、測試過程中提示能量太低
原因:
?、俟庠礋襞菔褂脮r(shí)間超過壽命期
②樣池中有不透光的東西擋住了光
處理方法:
紫外可見分光光度計(jì)更換光源燈泡;拿走擋光的物品