尺寸排阻色譜柱通過優(yōu)化填料的粒徑和細孔容積，實現(xiàn)了色譜柱性能的提升，和色譜柱操作壓強的降低。特別是對單克隆抗體三聚體/二聚體/單體的分離性能有很大的提高，對單體/片段也有很好的分離效果。
尺寸排阻色譜柱采用單分散、球形、表面鍵合了一層納米厚度中性親水性薄膜的3m硅膠作為填料。3μm的粒徑結(jié)合大的孔體積使其成為目前國際上分辨率優(yōu)良的體積排阻柱。
獨有的表面鍵合技術(shù)保證了填料表面鍵合的很大化，使其具有高的化學(xué)穩(wěn)定性及小的非特異性吸附。尺寸排阻色譜柱體積排阻柱有100、150及300三種孔徑選擇，廣泛的應(yīng)用于生物分子及水溶性聚合物的分離與分析。
尺寸排阻色譜柱的保存：日常使用中，SepaxSEC色譜柱建議保存在150mM磷酸鹽緩沖液中(pH7.0)。如長期不用時，可將色譜柱保存至20%乙醇中，以防止菌體污染。
(注：可根據(jù)具體使用條件選擇保存方式，如實驗條件為緩沖鹽體系，建議保存在150mM磷酸鹽緩沖液中，pH7.0。若實驗條件為有機溶劑體系，建議保存在20%乙醇中。)
尺寸排阻色譜柱的清洗：多次使用后某些樣品可能會吸附到入口篩板或填料上，當(dāng)積累至一定程度時會出現(xiàn)壓力升高并伴隨峰型展寬的現(xiàn)象，此時需要清洗色譜柱。
一般流程為：斷開檢測器，反接色譜柱，在低于50%較大推薦流速下用清洗液沖洗10-15倍柱體積。
尺寸排阻色譜柱是7.8mmIDX30cm通用尺寸的高性能SEC色譜柱。采用以親水性乙烯基聚合物為基材的高親水性填料充填，因此適合用于分析水溶性聚合物。
對于分子量較小的肽、蛋白質(zhì)聚合物、DNA片段和病毒的分析，TSKgelPL色譜柱具有很好的分離效果。
尺寸排阻色譜柱由親水性球形聚甲基丙烯酸酯顆粒填充。尺寸排阻色譜柱的主要應(yīng)用范圍在于分析水溶性聚合物，如纖維素、丙烯酰胺、二醇、葡聚糖、聚乙烯醇和低聚糖等?；瘜W(xué)修飾的尺寸排阻色譜柱提高了陽離子型聚合物的回收率。
色譜柱在使用中常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加，屬于正?，F(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外），以下列舉了部分常見原因及解決辦法：
?。?）色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染；
解決方法：如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10％的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱。
?。?）色譜柱頭的填料被樣品污染；
解決方法：如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內(nèi)前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細修復(fù)后，重新安裝上柱頭螺絲。
?。?）色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑，形成結(jié)晶析出；解決方法：如確定定是鹽結(jié)晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。
?。?）流動相PH值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。解決方法：如果因PH值使用不當(dāng)，很難恢復(fù)。
色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。
?、佟”苊鈮毫蜏囟鹊募眲∽兓叭魏螜C械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩（如前所述）。
?、凇?yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>
?、邸∫话阏f來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。
?、堋∵x擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時，預(yù)柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
?、荨”苊鈱⒒|(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進行預(yù)處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
?、蕖〗?jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml。
下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：硅膠柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質(zhì)，已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯fang）依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動相不含緩沖液，那么可以省略最后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質(zhì)，在甲醇（乙腈）沖洗時重復(fù)注射100~200?l四氫呋喃數(shù)次有助于除去強疏水性雜質(zhì)。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞砜數(shù)次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染。
陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強的鹽，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有機物）、甲醇、水依次沖洗。
?、摺”４嫔V柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過晚上或更長時間。
?、唷∩V柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M行清洗；另一種可能是大分子進入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
在后兩種情況發(fā)生時，小心擰開柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當(dāng)溶劑濕潤的固定相（與柱內(nèi)相同）填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復(fù)到新柱的水平。
柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱（5~30mm），可以起到保護、延長柱壽命的作用。采用保護柱會損失一定的柱效，這是值得的。
通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時間后，可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙稀Ｐ碌纳V柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時也可補加填料使柱效恢復(fù)。
每次工作完后，可以用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應(yīng)用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4~5天開機沖洗15分鐘。
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