超微量紫外可見分光光度計(jì)操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好。波長(zhǎng)長(zhǎng)的光線能量小,波長(zhǎng)短的光線能量大。分光光度測(cè)量是關(guān)于物質(zhì)分子對(duì)不同波長(zhǎng)和特定波長(zhǎng)處的輻射吸收程度的測(cè)量。物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了人射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量,相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。
超微量紫外分光光度計(jì)的使用方法
1、打開儀器電源開關(guān),開啟比色皿暗箱蓋,調(diào)節(jié)“0”電位器旋紐,使電表指針處于透光率(T)“0”位,預(yù)熱約20分鐘。
2、調(diào)節(jié)波長(zhǎng)(λ)調(diào)節(jié)旋紐,選擇需用的單色光波長(zhǎng)。
3、調(diào)節(jié)靈敏度開關(guān),選擇適當(dāng)?shù)撵`敏度。再用調(diào)“0”旋紐復(fù)校電表透光率“0”位。
4、將比色皿暗箱蓋合上,將參比溶液(空白)推入光路,順時(shí)針旋轉(zhuǎn)“100%”電位器調(diào)節(jié)旋紐使電表指針處于透光率“100%”處。
5、按上述方式連續(xù)幾次調(diào)整透光率“0”及“100”,直至不變,即可進(jìn)行測(cè)定工作。
6、將校準(zhǔn)溶液和待測(cè)溶液推入光路,讀取校準(zhǔn)溶液吸光度(A)值。
7、將待測(cè)溶液推入光路,讀取待測(cè)溶液吸光度值。
8、根據(jù)校準(zhǔn)溶液和待測(cè)溶液吸光度值及校準(zhǔn)溶液濃度計(jì)算待測(cè)物濃度。
超微量紫外分光光度計(jì)主要適于DNA、RNA、蛋白樣品無稀釋的快速檢測(cè),在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域獲得了日益廣泛的應(yīng)用。
日常維護(hù)和保養(yǎng)
①光源。光源的壽命有限,為了延長(zhǎng)光源使用壽命,在不使用儀器時(shí)不要開光源燈,應(yīng)盡量減少開關(guān)次數(shù)。在短時(shí)問的工作間隔內(nèi)可以不關(guān)燈。剛關(guān)閉的光源燈不能立即重新開啟。儀器連續(xù)使用時(shí)間不應(yīng)超過3h。若需長(zhǎng)時(shí)間使用,可以間歇30min。如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定,應(yīng)及時(shí)更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置,不要用手直接接觸窗口或燈泡,避免油污沾附。若不小心接觸過,要用無水乙醇擦拭。
②單色器。單色器是儀器的核心部分,裝在密封盒內(nèi),不能拆開。選擇波長(zhǎng)應(yīng)平衡地轉(zhuǎn)動(dòng),不可用力過猛。為防止色散元件受潮生霉,必須定期更換單色器盒干燥劑(硅膠)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色,應(yīng)立即更換。
③吸收池。必須正確使用吸收池,應(yīng)特別注意保護(hù)吸收池的兩個(gè)光學(xué)面。
④檢測(cè)器。光電轉(zhuǎn)換元件不能長(zhǎng)時(shí)間曝光,且應(yīng)避免強(qiáng)光照射或受潮積塵。
⑤當(dāng)儀器停止工作時(shí),必須切斷電源。
⑥為了避免儀器積灰和沾污,在停止工作時(shí),應(yīng)蓋上防塵罩。
⑦儀器若暫時(shí)不用要定期通電,每次不少于20~30min,以保持整機(jī)呈干燥狀態(tài),并且維持電子元器件的性能。
超微量分光光度計(jì)屬于高靈敏度分析儀器,雖然操作簡(jiǎn)單,但我們還是要注意一些細(xì)節(jié)方面的影響,不然會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精準(zhǔn)度。關(guān)于超微量分光光度計(jì)的使用和維護(hù)就給大家介紹到這里了,更多資訊請(qǐng)繼續(xù)關(guān)注捷配儀器儀表網(wǎng)。
熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。
熒光分光光度計(jì)的基本原理:
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中,激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,熒光經(jīng)過濾過和反射后,被光電倍增管所接受,然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。 物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子 吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,從而產(chǎn)生熒光。
不同物質(zhì)由于分子 結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級(jí)的分布具有各自不同的特征,這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;,因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。
熒光分光光度計(jì)的優(yōu)缺點(diǎn):
優(yōu)點(diǎn):靈敏度高,可以用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜,不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化, 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。
缺點(diǎn):
1、熒光的光強(qiáng)并不高,所以呈線性情況有時(shí)不很理想;
2、某些反應(yīng)熒光持續(xù)的時(shí)間較短;
3、熒光的發(fā)散方向不集中,不像透射光那樣集中,強(qiáng)度高;
4、受某些離子的干擾影響,熒光會(huì)湮滅,試驗(yàn)速度必須要快。
有一些人把原子熒光光度計(jì)與X射線熒光光譜儀誤認(rèn)為是同一種儀器,其實(shí)它們是有區(qū)別的。首先我們分別了解下它們的定義。
1、原子熒光光度計(jì)是利用硼氫化鉀或硼氫化鈉作為還原劑,將樣品溶液中的待分析元素還原為揮發(fā)性共價(jià)氣態(tài)氫化物(或原子蒸汽),然后借助載氣將其導(dǎo)入原子化器,在氬—?dú)浠鹧嬷性踊纬苫鶓B(tài)原子?;鶓B(tài)原子吸收光源的能量而變成激發(fā)態(tài),激發(fā)態(tài)原子在去活化過程中將吸收的能量以熒光的形式釋放出來,此熒光信號(hào)的強(qiáng)弱與樣品中待測(cè)元素的含量成線性關(guān)系,因此通過測(cè)量熒光強(qiáng)度就可以確定樣品中被測(cè)元素的含量。
2、X射線熒光光譜儀用X射線照射試樣時(shí),試樣可以被激發(fā)出各種波長(zhǎng)的熒光X射線,需要把混合的X射線按波長(zhǎng)(或能量)分開,分別測(cè)量不同波長(zhǎng)(或能量)的X射線的強(qiáng)度,以進(jìn)行定性和定量分析,為此使用的儀器叫X射線熒光光譜儀。由于X光具有一定波長(zhǎng),同時(shí)又有一定能量,因此,X射線熒光光譜儀有兩種基本類型:波長(zhǎng)色散型和能量色散型。
盡管二者都是把物質(zhì)激發(fā)后檢測(cè)其熒光,但二者的區(qū)別很大,從大的方面看主要有兩點(diǎn):
1、激發(fā)光源不同。
原子熒光用的光源很多,如各種激光等,但很少見有用X-射線的;而X-射線熒光則是用X-射線作激發(fā)光源。
2、用途不同。
原熒主要用來作定量分析,尤其是金屬元素的定量分析;而X熒主要用來作定性分析和結(jié)構(gòu)分析。當(dāng)然二者的儀器構(gòu)造、使用方法、檢測(cè)范圍、樣品制備等等都不一樣。