色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等,色譜柱效受柱內(nèi)外因素影響,為使色譜柱達到較佳效率,除柱外死體積要小外,還要有合理的柱結(jié)構(gòu)及裝填技術(shù)。
1、高效液相色譜柱的保養(yǎng)
色譜柱在使用前,可以進行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是較佳條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。我們在對色譜柱使用前進行測試以后,我們要根據(jù)不同的情況對色譜柱進行保養(yǎng):
①反相色譜柱每天實驗后的保養(yǎng):使用緩沖液或含鹽的流動相,實驗完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應(yīng)該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。
②長期保存色譜柱:如色譜柱要長時間保存,必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞)中,并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度可以是室溫.
2、高效液相色譜柱的維護
我們在使用新的色譜柱應(yīng)該在我們自己的液相色譜儀上進行性能測試,即使用色譜柱附帶的檢驗報告上測試條件和樣品來測定該色譜柱的柱效。并且,在以后的使用中,應(yīng)時常對色譜柱進行測試。而且在使用的過程中常常有堵塞的現(xiàn)象,造成這種現(xiàn)象的主要原因是
①溶劑中的不溶物;
②樣品中的不溶物;
③泵進樣器等中的不溶物;
④柱內(nèi)不溶物的形成等。
如果當(dāng)色譜柱堵塞以后我們可以對色譜柱進行修復(fù),首先,使用含鹽緩沖液后(如離子對試劑)應(yīng)用溶解性強的溶劑(如水)進行沖洗。其次,先斷開檢測器,然后用對來自樣品中的物質(zhì)有強溶解性的溶劑進行沖洗,對于反相色譜柱,可使用甲醇、乙睛、四氫呋喃、氯仿、庚烷等,在此條件下,應(yīng)避免溶劑的pH低于2或高于8。最后如果經(jīng)過上述還是沒有修復(fù),色譜柱壓力還是沒有下降,則要斷開檢測器,將色譜柱反方向放置,然后檢查柱壓,若壓力穩(wěn)定下降,則保持色譜柱反方向連接,用低于0.5ml/min流速沖洗一小時。如果壓力不下降,則要看內(nèi)置過濾器是否被堵塞,如果被堵塞應(yīng)沖洗或更換,若進口端的填料發(fā)生堵塞,柱子將不可能被徹底恢復(fù),只能通過去掉進口端的部分填料,重新填充進行有限的柱效恢復(fù)。而且修復(fù)的厚度是2-5mm
通過本文希望大家對高效液相色譜柱的保養(yǎng)和維護方法有所了解。
液相色譜柱是一種用于液體色譜分析儀器。
液相色譜柱的日常維護:
1、每次開機時,流速和柱壓要逐漸增加,突然迅速增加,會使柱床受到?jīng)_擊,引起紊亂,產(chǎn)生空隙
2、在進樣前使色譜系統(tǒng)充分平衡,是否平衡可由基線加以判斷
3、在進樣前,檢查色譜系統(tǒng)的各個接頭,通常由此能發(fā)現(xiàn)是否有漏液現(xiàn)象。如有漏液,空氣會從漏縫進入系統(tǒng)引起基線漂移,影響峰高和峰面積的重復(fù)性
4、不要把柱接頭上得太緊,否則易損壞接頭螺紋,引起滲漏
5、不要把柱子放在有氣流的地方或直接放到陽光下,氣流和陽光都會使柱子產(chǎn)生溫度梯度造成基線漂移;如果懷疑基線漂移是由溫度梯度引起的,可以設(shè)法使柱子恒溫
6、若儀器用做常規(guī)分析,樣品種類有限,但分析次數(shù)很多,則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱,這樣有助于延長柱壽命
7、如果懷疑樣品會污染色譜柱,可以用合適的溶劑幾百毫升、慢慢沖洗柱子過夜,第二天早晨再用流動相重新平衡柱子約3min、
8、在因裝卸、更換、貯存等而挪動柱子時,動作要輕,不要使其受到碰撞,以免柱床因震動產(chǎn)生空隙或通道
9、柱要加標(biāo)簽,新舊分開,不要放在溫度變化很大的地方
10、液相色譜柱柱子不用或貯藏時,應(yīng)封閉并貯存在惰性溶劑中
1、液相色譜儀整機保養(yǎng)
(1)短期停機
在完成一天工作以后,都要停機等第二天再繼續(xù)工作,則可按以下步驟停機。
A)關(guān)閉二次儀表(記錄儀、積分儀或色譜工作站)。
B)關(guān)閉檢測器電源(同時切斷柱箱溫度檢測器的電源)。
C)停止恒流泵工作,然后切斷其電源。
D)用二次蒸餾水沖洗進樣閥的進樣孔(在“LOAD”和“INJECT”兩個位置)。
E)切斷實驗室工作電源,加滿盛液瓶中的流動相,待第二天使用。
F)將儀器罩上防塵罩。
?。?)長期停機
液相色譜儀數(shù)周或數(shù)月暫不使用,這時除按《短期停機》的A)~D)步驟處理外,還須完成以下步驟:
A)拆下恒流泵的流動相盛液瓶,換上色譜柱指定的保護試劑(例:甲醇、去離子水等),開啟泵數(shù)分鐘(流速0.5mL/min~1.5mL/min)后停泵。
B)從系統(tǒng)中拆下色譜柱,用專用的密封螺帽將柱管兩端密封后保存。
C)用普通φ1.6導(dǎo)管替代分離柱聯(lián)結(jié)。
D)用二次蒸餾水或去離子水輸入輸液泵,開啟泵,流量1mL/min~2mL/min,沖洗泵體、進樣閥、檢測器流通池數(shù)分鐘,在沖洗過程切換六通閥數(shù)次,使定量管得到清洗。
E)拆除替代柱的導(dǎo)管、泵輸入端和出口的導(dǎo)管和流通池輸入、輸出口導(dǎo)管,分別用螺帽密封輸液泵出口和流通池輸入、輸出口。
F)撥下總電源接線板的插頭,貯存好專用的流動相和樣品,用干布擦洗儀器,罩上防塵罩。
G)檢測器存放地點應(yīng)干燥
2、液相色譜儀輸液泵的保養(yǎng)
輸液泵是液相色譜儀的心臟部件,品質(zhì)再好的泵,若不注意日常保養(yǎng),其損壞的幾率是極高的,將大大降低儀器的使用價值。
a)使用甲醇作流動相,請注意自身保護和環(huán)境保護,廢液注入空瓶內(nèi),集中處理,不得倒入下水道內(nèi)。
b)輸液泵使用前,先注意探漏檢查,視各密封點和泵體有否漏液。
c)在無流動相通入的情況下,嚴(yán)禁啟動泵體電機,以免柱塞密封環(huán)磨損。
d)測試泵流量性能時,用于收集液體的容器,應(yīng)選用小口瓶頸的容器,防止收集過程中,溶液蒸發(fā),影響測量精度。,必要時應(yīng)將其密封存放在干燥容器內(nèi),以預(yù)防光學(xué)系統(tǒng)霉變。
e)金屬泵體的輸液泵,應(yīng)盡量避免使用含有鹵離子(如KCL、NaCL、NH4CL)的流動相或能產(chǎn)生鹵離子的流動相,若必須使用此類流動相,建議使用泵體用非金屬材料制造的輸液泵。方則使用后,應(yīng)立即使用去離子水清洗泵體和整個色譜系統(tǒng)的管路。
f)使用的流動相必須是HPLC級或分析純級,特別是配置的流動相,在使用前,必須過濾掉其中的顆粒狀雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45μm的濾膜過濾)
g)長期不使用輸液泵,應(yīng)在最后分析結(jié)束時,用注射器吸取去離子水通過專用的泵頭清洗孔清洗泵體和柱塞桿。以延長密封圈和寶石柱塞桿的壽命。
h)輸液泵液路在維修或保養(yǎng)時,應(yīng)切斷儀器電源。非專業(yè)維修人員請不要打開機箱罩。