微量分光光度計(jì)能夠快速準(zhǔn)確的定量檢測核酸、蛋白質(zhì)等溶液。具有使用方便、消耗樣品少(僅2μl)、不用預(yù)熱、能迅速清理殘留樣品、不需要比色皿或其它樣品定位裝置、樣品不需要稀釋等特點(diǎn)，常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量，目前已成為眾多實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器。
工作原理
超微量分光光度計(jì)進(jìn)行濃度測定的原理是根據(jù)朗伯-比爾（Lamber-Beer）定律，A＝K·C·L 式中，A為吸光度；K為吸（消）光系數(shù)；C為溶液的濃度；L為液層厚度。此公式說明：在入射光一定時(shí)，溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度成正比。此式就是光的吸收定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式，又叫朗伯-比爾定律。
核酸定量
核酸的定量是超微量分光光度計(jì)使用頻率最大的功能。可以定量測定溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA以及RNA含量。這是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵，具有紫外吸收的特性，最大的吸收波長在260nm，吸收波谷在230nm。
除了核酸濃度，分光光度計(jì)同時(shí)顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nm。純凈的樣品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
蛋白質(zhì)直接定量
這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快，操作簡單；但是容易受到平行物質(zhì)的干擾，如DNA的干擾；另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。
比色法蛋白質(zhì)定量
蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物，比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分：氨基酸（如酪氨酸，絲氨酸）與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān)，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。
比色方法一般有BCA，Bradford，Lowry 等幾種方法。
與傳統(tǒng)分光光度計(jì)相比，超微量分光光度計(jì)要求的樣品體積小，不需要比色皿，比色杯清洗方便，只需用干凈的吸水紙將樣品從檢測平臺上擦拭干凈即可。除此之外，實(shí)驗(yàn)過程也更為簡單，不需預(yù)熱，可隨時(shí)檢測，檢測結(jié)果顯示吸光度值的同時(shí)，程序直接給出濃度值。超微量分光光度計(jì)與傳統(tǒng)相比，體積更小，更方便使用。
紫外可見分光光度計(jì)是一種光學(xué)儀器，型號很多，按其光學(xué)系統(tǒng)可分為單光束分光光度計(jì)，雙光束分光光度計(jì)和雙波長分光光度計(jì)三種類型。
一、單光束分光光度計(jì)
從光源觸發(fā)，經(jīng)過單色器分光得到一束平行單色光，從進(jìn)入吸收池到最后照在檢測器上，始終為一束光。下圖為工作原理圖，單光束分光儀器有四大特點(diǎn)：
1.價(jià)格較為便宜且產(chǎn)品操作簡單
2.任一波長的光均要用參比調(diào)T=100％后，再測量樣品
3.不能進(jìn)行吸收光譜的自動掃描
4.光源不穩(wěn)定性影響測量準(zhǔn)確度
二、雙光束分光光度計(jì)（工作原理如下圖）
從光源中發(fā)出的光經(jīng)單色器分光后被切光器分成兩束強(qiáng)度相等的單色光，一束通過參比溶液，一束通過被測溶液。光度計(jì)能自動比較兩束光的強(qiáng)度，此比值即為被測液的透射比，經(jīng)對數(shù)交換將它轉(zhuǎn)換為吸光度并作為波長的函數(shù)記錄下來，主要有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)：
1）不需要更換吸收池，而且測量方便
2）補(bǔ)償了光源不穩(wěn)定性的影響
3）實(shí)現(xiàn)了快速自動吸收光譜掃描
4）不能消除試液的背景干擾
三、雙波長分光光度計(jì)
同一光源發(fā)出的光被分成兩束，跟別經(jīng)過兩個(gè)單色器，得到兩束不同波長的單色光，利用切光器使兩束光以一定頻率膠體照射到同一吸收池，然后經(jīng)過光電倍管和電子控制系統(tǒng)，最后由顯示器顯示出兩個(gè)波長處的吸收光度差值，具體的原理請看下圖。
關(guān)于雙波長分光光度計(jì)有哪些特點(diǎn)，請接著往下看：
1）不需要參比溶液
2）可以消除背景吸收干擾，包括待測溶液與參比溶液組成的不同及洗手液厚度差異的影響，提高了測量的準(zhǔn)確度。
3）適合多組分混合物，渾濁試樣的定量分*析，看進(jìn)行導(dǎo)數(shù)光譜分析
4）價(jià)格比較貴
紫外可見光光度計(jì)的除了以類別，還有很多的型號，不同的產(chǎn)品測量是不一樣的，在選擇產(chǎn)品的時(shí)候，還是要多參考一下資料，或者跟廠家進(jìn)行詳細(xì)的咨詢。
原子吸收光譜儀是試驗(yàn)中常見的儀器，因此實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)該好好的去維護(hù)它，以免發(fā)生不必要的故障，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確
故障排除首先應(yīng)分析原因。儀器故障產(chǎn)生的原因和出現(xiàn)的現(xiàn)象是錯(cuò)綜復(fù)雜的。必須小心觀察故障現(xiàn)象，認(rèn)真檢測和細(xì)致的分析比較，才能找到故障的所在。下面介紹幾種常見故障的排除方法
1、光源系統(tǒng)故障
A、空心陰極燈點(diǎn)不亮故障原因：燈電源出問題或未接通；燈頭與燈座接觸不良；燈頭接線斷路；燈漏氣。
查處方法：分別檢查電源、連線和插接件；若不是電路問題，再進(jìn)行換燈檢查。
B、燈陰極輝光顏色異常故障原因：燈內(nèi)惰性氣體不純。
查處方法：在工作電流或大電流(80Ma,150mA)下反向通電處理。
C、燈陰極口外發(fā)光或陰極內(nèi)發(fā)生跳動的火花狀放電故障原因：燈內(nèi)惰性氣體壓力降低不能維持正常放電，后者由陰極表面氧化物或雜質(zhì)所致。
查處方法：前中情況需換新燈；后種情況通過十幾毫安的電流直到火花放電停止，若無效則換新燈。
2、能量輸出方面的故障
A、空心陰極燈亮而高壓開啟后無能量輸出故障原因：無負(fù)高壓；空心陰極燈發(fā)光異?；蛭恢貌粚Γ徊ㄩL不準(zhǔn)；燃燒器擋光；單色器故障；主機(jī)電路故障。
查處方法：第二、三、四種情況易查，第一、五、六種情況需按說明書或維修手冊的規(guī)定逐一處理或聯(lián)系廠家。
B、輸出能量過低故障原因：燈能量弱；光路調(diào)整不佳；透鏡或單色器內(nèi)光學(xué)元件被污染；波長不準(zhǔn)；放大電路增益下降；光電倍增管衰老。
查處方法：如果是全波段內(nèi)能量普遍偏低，應(yīng)檢測光電倍增管是否衰老和負(fù)高壓是否正常；如果能量低與波長有關(guān)，除查看光學(xué)元件有無污染外，還應(yīng)檢查單色器光學(xué)系統(tǒng)有無機(jī)械位置變化；如果是因波長示值錯(cuò)亂，應(yīng)重新校正波長；如果是線路增益問題，需檢查放大板和光電倍增管查處原因。或直接聯(lián)系廠家。
C、工作時(shí)能量顯示不變化故障原因：主機(jī)電路中前置放大器連接問題；主放大器異常。
查處方法：檢查前置放大器和運(yùn)算放大器。
D、擋光時(shí)能量不為零故障原因：前置放大器組件或主放大器組件失調(diào)或損壞。
查處方法：用萬用表監(jiān)測前置放大器輸出，或更換主放大器上的運(yùn)算放大器。
3、吸收信號方面的故障
A、零點(diǎn)不對故障原因：空心陰極燈衰老，強(qiáng)度太弱；波長調(diào)節(jié)不準(zhǔn)；石英窗口和聚光鏡表面污染。
查處方法：針對具體原因相應(yīng)處理
B、靜態(tài)基線漂移故障原因：光源系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)故障。
查處方法：首先查明儀器是否受潮，放置吸潮硅膠儀器通電去潮，一段時(shí)間后儀器穩(wěn)定性會逐漸正常。查明儀器單獨(dú)“地線”是否良好。任何電磁感應(yīng)都會使儀器產(chǎn)生漂移。元素?zé)艉蜔綦娫吹姆€(wěn)定性負(fù)高壓電源的穩(wěn)定性等都可能導(dǎo)致基線漂移。
C、點(diǎn)火基線漂移故障原因：靜態(tài)基線漂移；原子化系統(tǒng)故障。
查處方法：排除靜態(tài)基線漂移；檢查吸液毛細(xì)管有無堵塞和氣泡，廢液排泄是否暢通和霧化室內(nèi)有無積水。氣源壓力不穩(wěn)和燃燒器預(yù)熱不夠均會引起漂移。當(dāng)然波長不準(zhǔn)也會導(dǎo)致漂移。針對具體情況分別加以處理。
D、噪聲大、讀數(shù)不穩(wěn)故障原因：光源系統(tǒng)、原子化系統(tǒng)、分光系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)發(fā)生故障。
查處方法：首先區(qū)分故障是來源于原子化系統(tǒng)還是電檢測系統(tǒng)。通過點(diǎn)燃火焰吸噴純水和不點(diǎn)火的情況比較，據(jù)基線穩(wěn)定度就和判斷。
如果判斷故障來源于原子化系統(tǒng)，還要進(jìn)而判斷是來自火焰還是噴霧裝罩，可通過吸噴純水和調(diào)節(jié)噴霧器偉觀察噪聲電平是否明顯減小或消失判斷，否則噪聲可能主要來自火焰?？烧{(diào)整燃助比、燃燒器高度和穩(wěn)定氣源壓力來觀察噪聲電平的變化情況。噴霧器是火焰原子化系統(tǒng)噪聲的主要來源。
如果判斷故障主要來自電檢測系統(tǒng)，需先區(qū)分出來自燈電源還是檢測系統(tǒng)?？墒褂煤细竦你~燈讓儀器和燈充分預(yù)熱，切斷入射光，考察此時(shí)的噪聲電平。若正常則故障來自燈電源或元素?zé)簟Ｔ龠M(jìn)一步檢測燈電源或更換新燈檢查。
如果否定來自燈或燈電源，則需進(jìn)一步檢查單色器系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)。故障現(xiàn)象隨波長而變化，則可判斷故障主要來自單色器系統(tǒng)。單色器內(nèi)部的雜散光、光柵及其他光學(xué)元件表面積聚灰塵、污穢均能使噪聲電平增大。檢測系統(tǒng)是噪聲主要來源之一。需用萬用表和示波器先查清是來自電源供電還是光電倍增管或電路。讀數(shù)不穩(wěn)定表示吸收信號上疊加較大的噪聲。這對測量是不利的。導(dǎo)致讀數(shù)不穩(wěn)定的原因主要來自原子化系統(tǒng)，吸液毛細(xì)管堵塞，霧化器霧口腐蝕，霧化室內(nèi)積液，空氣和乙炔不純或壓力不穩(wěn)，試液基體濃度過大，有沉淀和夾雜物，燃燒器縫口沉積有碳和無機(jī)鹽或縫口堵塞而使火焰呈鋸齒形，所有這些情況均影響讀數(shù)穩(wěn)定性。應(yīng)針對具體問題加以檢查排除。
4、靈敏度和檢出限方面的故障
A、靈敏度低的故障原因：儀器工作條件不是較佳；毛細(xì)管和節(jié)流嘴相對位置和同心度不佳；撞擊球位置不佳；霧化室內(nèi)積廢液；元素?zé)糍|(zhì)劣；線路增益下降；光學(xué)元件積灰塵。
查處方法：需逐一根據(jù)不同問題查處處理。
B、檢出限偏離故障原因：導(dǎo)致靈敏度低的諸項(xiàng)故障；造成噪聲過大和讀數(shù)不穩(wěn)的各項(xiàng)故障。
查處方法：根據(jù)上述有關(guān)方法查處故障。
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