紫外可見分光光度計具有靈敏度高、準確度高、選擇性好、適用濃度范圍廣等優(yōu)點,廣泛地應用于化工、冶金、地質、醫(yī)學、食品、 制藥等部門及環(huán)境監(jiān)測系統(tǒng)。
紫外可見分光光度計的原理:
物質的吸收光譜本質上就是物質中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量,相應地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。
由于各種物質具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構,其吸收光能量的情況也就不會相同;
因此,每種物質就有其特有的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎。
紫外可見分光光度計的使用方法:
(1)接好線路后,先檢查各開關是否在“關”處,光路閘門放在黑點處,再將電源插頭插入220V交流電源上,打開電源開關和光源開關,將光路閘門放在紅點處。
(2)取出比色皿,將其中一只裝空白溶液,其余三只裝待測溶液,放在定位盒內,蓋上暗箱蓋,裝溶液前比色皿用蒸餾水洗凈;
并用溶液蕩洗數(shù)次后,再盛至體積,池外應趕緊,若有水滴,應用鏡頭紙吸干,取用時用手捏住比色皿的毛玻璃面。
(3)用波長調節(jié)器調到所需的波長,將空白溶液正對光路,調光量調節(jié)器,使檢流計上光點準線對準透光率為100的位置;
拉動拉桿,使待測溶液進入光路,讀取微電計標尺上的透光率,測定完畢,及時關閉光路閘門,檢查電計的零點位置,保護硒光電池。
(4)紫外可見分光光度計應安放在清潔、干燥、無腐蝕氣體和較暗的室內;
儀器使用完畢后應擦拭干凈,各開關關閉,紫外可見分光光度計連續(xù)使用時間不應超過4h。
超微量分光光度計是一類很重要的分析儀器,常用于定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器,常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。無論在物理學、化學、生物學、醫(yī)學、材料學、環(huán)境科學等科學研究領域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測、冶金等現(xiàn)代生產與管理部門 ,紫外可見分光光度計督有廣泛而重要的應用。
超微量分光光度計是精密光學儀器,正確安裝、使用和保養(yǎng)對保持儀器良好的性能和保證測試的準確度有重要作用。
超微量分光光度計的日常維護和保養(yǎng):
1.光源的壽命有限,為了延長光源使用壽命,在不使用儀器時不要開光源燈,應盡量減少開關次數(shù)。
2.單色器是儀器的核心部分,裝在密封盒內,不能拆開。選擇波長應平衡地轉動,不可用力過猛。為防止色散元件受潮生霉,必須定期更換單色器盒干燥劑(硅膠)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色,應立即更換。
3.必須正確使用吸收池,應特別注意保護吸收池的兩個光學面。
4.光電轉換元件不能長時間曝光,且應避免強光照射或受潮積塵。
5.儀器若暫時不用要定期通電,每次不少于20~30min,以保持整機呈干燥狀態(tài),并且維持電子元器件的性能。
紫外分光光度法是根據(jù)物質的吸收光譜,來研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。
物質的吸收光譜就是物質中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量,相應地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。
由于各種物質具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構,其吸收光能量的情況也就不會相同;
因此,每種物質就有其特有的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質的含量。
一般地,紫外可見分光光度計主要由光源系統(tǒng)、單色器系統(tǒng)、樣品室、檢測系統(tǒng)組成。
光源發(fā)出的復合光通過單色器被分解成單色光,當單色光通過樣品室時;
一部分被樣品吸收,其余未被吸收的光到達檢測器,被轉變?yōu)殡娦盘?,經電子電路的放大和?shù)據(jù)處理后,通過顯示系統(tǒng)給出測量結果。
光源:發(fā)出所需波長范圍內的連續(xù)光譜,有足夠的光強度,穩(wěn)定。
可見光區(qū):鎢燈,碘鎢燈(320~2500nm)紫外區(qū):氫燈,氘燈(180~375nm);氙燈:紫外、可見光區(qū)均可用作光源。
單色器:將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。
棱鏡:依據(jù)不同波長光通過棱鏡時折射率不同。
光柵:在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。利用光通過光柵時發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光。
吸收池:用于盛待測及參比溶液。可見光區(qū):光學玻璃池;紫外區(qū):石英池。
檢測器:利用光電效應,將光能轉換成電流訊號。光電池,光電管,光電倍增管。
檢流計(指示器):刻度顯示或數(shù)字顯示、自動掃描記錄。