酶標儀(MicroplateReader)是對酶聯(lián)免疫檢測(EIA)實驗結(jié)果進行讀取和分析的專業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應通過偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進行的,反應結(jié)果以顏色顯示,通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標本中待測抗體或抗原的濃度。
酶標儀廣泛地應用在臨床檢驗、生物學研究、農(nóng)業(yè)科學、食品和環(huán)境科學中,特別在近幾年中,由于大量的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的應用,使得酶標儀在生殖保健領(lǐng)域中應用越來越廣泛,同時促進了生殖健康技術(shù)水平提高。
目前國內(nèi)許多計生站系統(tǒng)開展了酶免檢測項目,如:乙肝五項、艾滋病檢測、優(yōu)生優(yōu)育系列檢測、激素檢測等。過去多數(shù)采用目測方法,報出的結(jié)果缺乏科學的依據(jù)。例如:某弓形蟲檢測試劑盒中,臨界值規(guī)定為:陰性對照品的OD值×2.5,通過目測無法判斷標本孔的反應顏色是否超過臨界值。肉眼進行兩孔之間的顏色比較可能還行,但比較一孔的顏色是否超過另一孔顏色的2.5倍就不可能。
國內(nèi)多家權(quán)威機構(gòu),如衛(wèi)生部臨床檢驗中心和計劃生育系統(tǒng)等多次強調(diào)酶標儀的重要性,并要求酶聯(lián)免疫檢測試劑應使用酶標儀判讀,酶免試劑的質(zhì)控也應使用酶標儀,并提供酶標儀測定的原始數(shù)據(jù),而各廠家的試劑盒說明書沒有是讓用目測的。同時酶免檢測的項目往往是一些實質(zhì)性的感染和病變(如:肝炎、艾滋病、優(yōu)生優(yōu)育等),判讀更要求嚴謹,由誤診引起的糾紛很難處理。另外,住院手術(shù)病人術(shù)前的丙肝、艾滋等EIA試劑檢測是避免因輸血引起感染引發(fā)的醫(yī)療事故糾紛的必要手段,正逐漸被許多單位所采用。
酶標儀是酶聯(lián)免疫吸附試驗的專用儀器,酶聯(lián)免疫技術(shù)是在免疫學和細胞工程學基礎(chǔ)上發(fā)展的一種微量檢測技術(shù),具有操作簡便、靈敏性高等優(yōu)點,已在食品農(nóng)藥殘留、重金屬污染、食品添加劑檢測等諸多方面表現(xiàn)出了獨特的優(yōu)勢,在食品安全檢測領(lǐng)域有著廣闊的應用前景。
酶標儀產(chǎn)品性能優(yōu)越,檢測精度高,操作簡單靈活輕便,已在生物毒素、藥物殘留、獸藥殘留、致病微生物、重金屬污染和食品安全等方面得到用戶的認可。酶標儀即酶聯(lián)免疫檢測儀是酶聯(lián)免疫吸附試驗的專用儀器又稱微孔板檢測器,一般來說在使用過程中分為半自動和全自動兩種,不過這兩者的工作原理基本上是一致的,核心都是比色計,也就是用比色法來進行分析。測定一般要求測試液的最終體積在250μL以下,用一般光電比色計無法完成測試,因此對酶標儀中的光電比色計有特殊要求。
光是電磁波,波長100nm~400nm稱為紫外光,400nm~780nm之間的光可被人眼觀察到,大于780nm稱為紅外光。人們之所以能夠看到色彩,是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色,是因為植物吸收的大部分為紅橙光和藍紫光,但對綠色不吸收,反射出來,所以植物呈現(xiàn)為綠色。酶標儀測定的原理是在特定波長下,檢測被測物的吸光值。
隨著檢測方式的發(fā)展,擁有多種檢測模式的單體臺式酶標儀叫做多功能酶標儀,可檢測吸光度(Abs)、熒光強度(FI)、時間分辨熒光(TRF)、熒光偏振(FP)、和化學發(fā)光(Lum)。
酶標儀在臨床實驗方面應用廣泛,用于鑒別乙肝兩對半,HIV,鑒定DNA等許多方面,可以說它是臨床及醫(yī)學實驗不可或缺的基礎(chǔ)設(shè)備。
故障一:測量的結(jié)果重現(xiàn)性不好,即使用空板測量誤差也在允許的范圍之外。
故障分析:檢查試劑發(fā)現(xiàn)沒有問題,檢查判定公式也沒有問題,檢查光路也沒有污染。幾經(jīng)周折終于發(fā)現(xiàn)卡微板的卡簧在伸縮后沒有卡到位,造成微板在測量時在機內(nèi)晃動影響測量結(jié)果不準。
故障二:測量結(jié)果OD值偏低。
故障分析:排除完燈的能量值偏低后,檢查發(fā)現(xiàn)濾光片上有灰塵,用蒸餾水和擦鏡紙擦洗干凈晾干后故障排除。
測試方法:酶標儀的儀器指標在蕞佳狀態(tài),就儀器的精度測試和儀器的線性度介紹幾種測試方法。
精度測試:該過程可被用于檢測不同微板之間的測量精度。
使用新制備的在0.1% TWEEN20中的橘黃色甲基填充微孔,在每個微孔中使用不同稀釋度的溶劑以便獲得一個光密度范圍,首先確保每孔注入200mL液體,使用492nm慮光片測量至少3次,對每一微孔進行下列計算:
(1)平均OD值;(2)蕞高和蕞低值;(3)平均值。蕞高和蕞低值之間的差值和百分比。讀數(shù)范圍在0.000到2.000Abs。同一孔平均值,蕞高值和蕞低值之間的差值應該在+/一1.0%和+/一0.010OD范圍內(nèi)。
讀數(shù)范圍在2.000到3.000Abs同一孔平均值,蕞高和蕞低值之間的差值應在+/一1.0% 和+/一0.005OD值范圍內(nèi)。讀數(shù)范圍在3.000Abs以上時準確度不符合要求。
酶標儀儀器線性度:儀器的線性度可使用一種溶劑的稀釋系列得到。如可在492 nIn處測量在0.1%TWEEN20中的橘黃色甲基的稀釋系列。
具體方法如下:在參考光密度計上測量被稀釋的溶劑,畫出OD值對已知濃度的點圖,并畫出通過這些點的蕞好的直線。將從系列稀釋中測得的吸光度值與該圖比較從而計算出各稀釋度的濃度。微板中每種稀釋度加入250t,-L,對每種稀釋至少使用兩個樣本,以便降低因加樣引起的誤差。 測量微板使用精確測量模式,利用測量得到的平均OD值和每個樣本的已知濃度畫一條OD濃度的曲線,從系列稀釋中測得的吸光值與該曲線比較從而計算出各稀釋度的濃度。
對光度記和本儀器,比較計算的濃度,不準確度不應大于以下,使用標準濾光片492nm時吸光度在0.000~2.000Abs+/一1%、2.000~3.000Abs+/一1.5%。使用梯度濾光片492nm時,吸光度在0.000~2.500Abs+/一2%。
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