紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。
由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同；
因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團的信息。可以用標(biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律說明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響，即得朗伯-比耳定律。
即A=εbc，(A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，b為液池厚度，c為溶液濃度)就可以對溶液進行定量分析。
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。
若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高，且測定條件要相同。
實驗證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。
應(yīng)用：
在水和廢水監(jiān)測中的應(yīng)用，對于一個水系的監(jiān)測分析和綜合評價，一般包括水相(溶液本身)、固相(懸浮物、底質(zhì))、生物相(水生生物)。
在水質(zhì)的常規(guī)監(jiān)測中，紫外可見分光光度法占有較大的比重。由于水和廢水的成分復(fù)雜多變，待測物的濃度和干擾物的濃度差別很大，在具體分析時必須選擇好分析方法。
在農(nóng)產(chǎn)品和食品分析中可用于檢測的組分或成分有蛋白質(zhì)、賴氨酸、葡萄糖、維生素C、硝酸鹽、亞硝酸鹽、砷、汞等；
在植物生化分析中可用于檢測葉綠素、全氮和酶的活力等；
在飼料分析中可用于檢測煙酸、棉酚、磷化氫和甲酯等。
紫外分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜，來研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。
由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同；
因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量。
一般地，紫外可見分光光度計主要由光源系統(tǒng)、單色器系統(tǒng)、樣品室、檢測系統(tǒng)組成。
光源發(fā)出的復(fù)合光通過單色器被分解成單色光，當(dāng)單色光通過樣品室時，一部分被樣品吸收，其余未被吸收的光到達(dá)檢測器，被轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?，?jīng)電子電路的放大和數(shù)據(jù)處理后，通過顯示系統(tǒng)給出測量結(jié)果。
光源：發(fā)出所需波長范圍內(nèi)的連續(xù)光譜，有足夠的光強度，穩(wěn)定。
可見光區(qū)：鎢燈，碘鎢燈(320～2500nm)紫外區(qū)：氫燈，氘燈(180～375nm)；氙燈：紫外、可見光區(qū)均可用作光源。
單色器：將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。
棱鏡：依據(jù)不同波長光通過棱鏡時折射率不同。
光柵：在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。
利用光通過光柵時發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光。
吸收池：用于盛待測及參比溶液。
可見光區(qū)：光學(xué)玻璃池；紫外區(qū)：石英池。
檢測器：利用光電效應(yīng)，將光能轉(zhuǎn)換成電流訊號。光電池，光電管，光電倍增管。
檢流計（指示器）：刻度顯示或數(shù)字顯示、自動掃描記錄。
另外一種說法，紫外可見分光光度計還主要由電光系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)、光電系統(tǒng)、電子系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理、輸出打印系統(tǒng)等幾個部分組成。
紫外可見分光光度計屬于精密光學(xué)儀器，出廠前經(jīng)過精細(xì)的裝配和調(diào)試；
如果能對儀器進行恰當(dāng)?shù)木S修與保養(yǎng)，不僅能保證儀器的可靠性和穩(wěn)定性，也可以延長儀器的使用壽命。
1、工作環(huán)境檢查：
1）放置要求：
儀器應(yīng)平穩(wěn)的擺放在水平固定的桌面上。
(因為分光光度計為精密光學(xué)儀器,在運行的過程中如果桌面不穩(wěn)；
會影響其工作狀態(tài),且儀器處在工作狀態(tài)時，燈絲處于高溫狀態(tài),此時如果有劇烈的震動會導(dǎo)致燈絲折斷。)
2）溫度要求：工作環(huán)境的溫度在5-35度之間。
(儀器在工作狀態(tài)時內(nèi)部較熱需要用儀器自身的散熱風(fēng)扇與外界空氣進行熱交換散熱；
如果外界溫度過高,會導(dǎo)致儀器內(nèi)部溫度過高,從而加速儀器電器件與燈的老化速度,從而影響儀器的使用壽命。)
3）濕度要求：
工作環(huán)境的相對濕度不超過85%。
（儀器內(nèi)部有很多電器元件與光學(xué)件，在濕度太高的情況下，電器件容易老化或燒壞， 光學(xué)件表面的鍍鋁膜也容易發(fā)霉。）
4）空氣狀況：
空氣中不應(yīng)有足以引起腐蝕的有害氣體和過多的塵土存在。
2、樣品室檢查：
1）在開機之前，先要檢查樣品室中是否有比色皿或其他物品；
因為儀器在開機后要進行一系列的功能自檢，如果有物品放在樣品室中會導(dǎo)致自檢出錯。
2）每次使用后應(yīng)檢查樣品室是否積存有溢出溶液，須經(jīng)常擦拭樣品室，以防止廢液對部件或光路系統(tǒng)的腐蝕。
3）在測試完成后，請及時將樣品從樣品室中取出，否則，液體揮發(fā)會導(dǎo)致鏡片發(fā)霉。
對易揮發(fā)和腐蝕性的液體，尤其要注意！
如果樣品室中有漏液，請及時擦拭干凈，否則會引起樣品室內(nèi)的部件腐蝕和螺釘生銹。
3、儀器的表面清潔：
儀器外殼表面經(jīng)過噴漆工藝處理過，如果不小心將溶液漏灑在外殼上，請立即用濕毛巾擦拭干凈，杜絕使用有機溶液擦拭。如果長時間不用時，請注意及時清理儀器表面的灰塵。
4、比色皿清洗：
在每次測量結(jié)束或溶液更換時，您需要對比色皿進行及時清洗；
然后放在低濃度酸性溶液里浸泡，浸泡后用蒸餾水沖洗比色皿的內(nèi)外壁，否則比色皿壁上的殘留溶液會引起測量誤差。
5、電源檢查：
1）插電源插座時，請檢查當(dāng)前電壓是否與儀器標(biāo)識的電壓一致。
2）因為各個地區(qū)電網(wǎng)的質(zhì)量差異很大，所以為了使儀器運行得更穩(wěn)定和更可靠，建議給儀器外配一個穩(wěn)壓器。
3）儀器不用時請關(guān)機，并拔掉電源插頭，以防止實驗室的電源地線不好，而導(dǎo)致在雷雨天氣時損壞儀器。
6、提示：
為縮短自檢時間，儀器在開機時所進行的自檢只是對一些常規(guī)的項目進行檢查。
而儀器在運輸、搬運與使用一段時間后（一般一個月）會導(dǎo)致結(jié)構(gòu)件累計誤差的產(chǎn)生；
所以我們建議用戶在出現(xiàn)上述情況或感覺儀器測試數(shù)據(jù)與經(jīng)驗值相差較大時，應(yīng)對儀器進行一次波長校正和暗電流校正。（具體操作方法見本手冊中的“系統(tǒng)應(yīng)用”一節(jié)）
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