紫外可見分光光度計法從問世以來，在應用方面有了很大的發(fā)展，尤其是在相關(guān)學科發(fā)展的基礎(chǔ)上，促使分光光度計儀器的不斷創(chuàng)新，功能更加齊全，使得光度法的應用更拓寬了范圍。
1.原理
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量， 相應地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質(zhì)就有其 特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或 測 定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸 收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
紫外可見分光光度法的定量分析基礎(chǔ)是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。即物質(zhì)在一定濃度 的吸光度與它的吸收介質(zhì)的厚度呈正比。
2.應用
2.1 檢定物質(zhì)
根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是最大吸收波長雖ax和摩爾吸收系數(shù)是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù)。這在藥物分析上就有著很廣泛的應用。在國內(nèi)外的藥典中，已將眾多的藥物紫外吸收光譜的最大吸收波長和吸收系數(shù)載入其中，為藥物分析提供了很好的手段。
2.2 與標準物及標準圖譜對照
將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應完全一致。如果沒有標樣，也可以和現(xiàn)成的標 準譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準確，精密度高，且測定條件要相同。
2.3 比較最大吸收波長吸收系數(shù)的一致性
2.4 純度檢驗
2.5 推測化合物的分子結(jié)構(gòu)
2.6 氫鍵強度的測定
實驗證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不 同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑 。
2.7 絡合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定
2.8 反應動力學研究
2.9 在有機分析中的應用
有機分析是一門研究有機化合物的分離、鑒別及組成結(jié)構(gòu)測定的科學，它是在有機化學和分析化學的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的綜合性學科。
分光光度計在進行紫外測量時，吸光度值不準具有有以下原因： 1、儀器調(diào)零后跳動大的話那可能是儀器有問題?！ ?、調(diào)零穩(wěn)定的話，看樣品濃度是否過高，可以控制在0-1個吸光度之間?！ ?、濃度合適的話，看是否比色皿沒擦干凈，一般可用蒸餾水沖洗一下，擦干后用鏡頭紙擦干凈。 4、檢查樣品是否穩(wěn)定，如果零點不變而放上樣品變化，那么是樣品有變化，檢查樣品是否有問題。
分光光度計是一種常用的分析儀器產(chǎn)品，在運行過程中可能會由于種種原因?qū)е路止夤舛扔嫯a(chǎn)生故障問題，對于分光光度計的正常使用會造成一定影響。那么分光光度計怎樣維護呢?下面小編就來具體介紹一下分光光度計維護方法。
1)若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點。然后再測量。
2)指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進行機械調(diào)零。
3)比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4)操作人員不應輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5)1900型等分光光度計，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測微弱光電信號，而不能用來檢測強光。否則容易產(chǎn)生信號漂移，靈敏度下降。針對其上述特點，在維修、使用此類儀器時應注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下，因此在預熱時，應打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長時間照射使其性能漂移而導致工作不穩(wěn)。
6)放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。
7)比色杯的配套性問題。比色杯必須配套使用，否則將使測試結(jié)果失去意義。在進行每次測試前均應進行比較。具體方法如下;分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長處，石英比色杯;220nm、700nm裝蒸餾水，玻璃比色杯：700nm處裝蒸餾水，將某一個池的透射比值調(diào)至100%，測量其他各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍應考慮其對測試結(jié)果的影響。
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