由光源發(fā)出的光，被分為能量均等對稱的兩束，一束為樣品光通過樣品，另一束為參考光作為基準(zhǔn)。這兩束光通過樣品室進入光度計后，被扇形鏡以一定的頻率所調(diào)制，形成交變信號。
由光源發(fā)出的光，被分為能量均等對稱的兩束，一束為樣品光通過樣品，另一束為參考光作為基準(zhǔn)。這兩束光通過樣品室進入光度計后，被扇形鏡以一定的頻率所調(diào)制，形成交變信號，然后兩束光和為一束，并交替通過入射狹縫進入單色器中，經(jīng)離軸拋物鏡將光束平行地投射在光柵上，色散并通過出射狹縫之后，被濾光片濾除高級次光譜，再經(jīng)橢球鏡聚焦在探測器的接收面上。探測器將上述交變的信號轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的電信號，經(jīng)放大器進行電壓放大后，轉(zhuǎn)入A/D轉(zhuǎn)換單位，計算機處理后得到從高波數(shù)到低波數(shù)的紅外吸收光譜圖。
紅外分光光度計特點：
一般的紅外光譜是指2.5-50微米(對應(yīng)波數(shù)4000--200厘米-1)之間的中紅外光譜，這是研究研究有機化合物常用的光譜區(qū)域。紅外光譜法的特點是：快速、樣品量少(幾微克-幾毫克)，特征性強(各種物質(zhì)有其特定的紅外光譜圖)、能分析各種狀態(tài)(氣、液、固)的試樣以及不破壞樣品。紅外光譜儀是化學(xué)、物理、地質(zhì)、生物、醫(yī)學(xué)、紡織、環(huán)保及材料科學(xué)等的重要研究工具和測試手段，而遠紅光譜更是研究金屬配位化合物的重要手段。
紅外分光光度計基本原理
用一定頻率的紅外線聚焦照射被分析的試樣，如果分子中某個基團的振動頻率與照射紅外線相同就會產(chǎn)生共振，這個基團就吸收一定頻率的紅外線，把分子吸收的紅外線的情況用儀器記錄下來，便能得到全面反映試樣成份特征的光譜，從而推測化合物的類型和結(jié)構(gòu)。IR光譜主要是定性技術(shù)，但是隨著比例記錄電子裝置的出現(xiàn)，也能迅速而準(zhǔn)確地進行定量分析。
進入光度計后，被扇形鏡以一定的頻率所調(diào)制，形成交變信號，然后兩束光和為一束，并交替通過入射狹縫進入單色器中，經(jīng)離軸拋物鏡將光束平行地投射在光柵上，色散并通過出射狹縫之后，被濾光片濾除高級次光譜，再經(jīng)橢球鏡聚焦在探測器的接收面上。探測器將上述交變的信號轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的電信號，經(jīng)放大器進行電壓放大后，轉(zhuǎn)入A/D轉(zhuǎn)換單位，計算機處理后得到從高波數(shù)到低波數(shù)的紅外吸收光譜圖。
紫外可見分光光度計引用新型技術(shù)，其功能強大，采用單色器技術(shù)，波長范圍190-1100nm，是各種涉及水和廢水分析領(lǐng)域的通用儀器，應(yīng)用范圍包括市政和工業(yè)廢水，飲用水，加工過程用水，地表水，冷卻水和鍋爐補給水等。 1、單光束UV：最傳統(tǒng)的紫外，單光源發(fā)射單光束，全程密閉，通過光柵，照射樣品，最后由光電倍增管監(jiān)測器檢測。 缺點：測完空白再測試樣品，全波段分析時間較長（一般2min）。 2、比例雙光束UV：單光源單光束，全程密閉，通過光柵，加入棱鏡，把光分為兩束，分別照射樣品與空白，再合并光，進入光電倍增管檢測器，通過差減法計算結(jié)果。 好處：空白樣品同時檢測。 缺點：靈敏度下降，全波段分析時間較長。 3、雙光束UV：單光源單光束，全程密閉，通過棱鏡分出兩道光，分別通過一光柵，分別進入各自的光點倍增管檢測器。 好處：加強靈敏度，同時測量空白與樣品。 缺點：全波段分析時間較長。 4、全波段UV：單光源單光束，樣品與空白暴露在空氣中，照射樣品，開始進入密閉箱，通過光柵，進入DAD檢測器。 好處：空白只需要檢測一次，如果你愿意一輩子檢測這一次都可以。檢測樣品不密閉，外界光線對其無影響，使用方便且精確。分析任何波段或全波段不到1s。 缺點：貴（25W）。
微量分光光度計能夠快速準(zhǔn)確的定量檢測核酸、蛋白質(zhì)等溶液。具有使用方便、消耗樣品少(僅2μl)、不用預(yù)熱、能迅速清理殘留樣品、不需要比色皿或其它樣品定位裝置、樣品不需要稀釋等特點，常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量，目前已成為眾多實驗室的常規(guī)儀器。
工作原理
超微量分光光度計進行濃度測定的原理是根據(jù)朗伯-比爾（Lamber-Beer）定律，A＝K·C·L 式中，A為吸光度；K為吸（消）光系數(shù)；C為溶液的濃度；L為液層厚度。此公式說明：在入射光一定時，溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度成正比。此式就是光的吸收定律的數(shù)學(xué)表達式，又叫朗伯-比爾定律。
核酸定量
核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率最大的功能?？梢远繙y定溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA以及RNA含量。這是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵，具有紫外吸收的特性，最大的吸收波長在260nm，吸收波谷在230nm。
除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
蛋白質(zhì)直接定量
這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快，操作簡單；但是容易受到平行物質(zhì)的干擾，如DNA的干擾；另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。
比色法蛋白質(zhì)定量
蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物，比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分：氨基酸（如酪氨酸，絲氨酸）與外加的顯色基團或者染料反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān)，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。
比色方法一般有BCA，Bradford，Lowry 等幾種方法。
與傳統(tǒng)分光光度計相比，超微量分光光度計要求的樣品體積小，不需要比色皿，比色杯清洗方便，只需用干凈的吸水紙將樣品從檢測平臺上擦拭干凈即可。除此之外，實驗過程也更為簡單，不需預(yù)熱，可隨時檢測，檢測結(jié)果顯示吸光度值的同時，程序直接給出濃度值。超微量分光光度計與傳統(tǒng)相比，體積更小，更方便使用。
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