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激光共聚焦顯微鏡的原理是怎樣的 顯微鏡工作原理

時(shí)間:2020-05-15    來(lái)源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     

    激光共聚焦顯微鏡是在熒光顯微鏡成像基礎(chǔ)上加裝了激光掃描裝置,利用計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖像處理;

    把光學(xué)成像的分辨率提高了30%--40%,使用紫外或可見(jiàn)光激發(fā)熒光探針,從而得到細(xì)胞或組織內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)的熒光圖像;

    在亞細(xì)胞水平上觀察諸如Ca2+ 、PH值,膜電位等生理信號(hào)及細(xì)胞形態(tài)的變化,成為形態(tài)學(xué),分子生物學(xué),神經(jīng)科學(xué),藥理學(xué),遺傳學(xué)等領(lǐng)域中新一代強(qiáng)有力的研究工具。

    激光共聚焦成像系統(tǒng)能夠用于觀察各種染色、非染色和熒光標(biāo)記的組織和細(xì)胞等,觀察研究組織切片,細(xì)胞活體的生長(zhǎng)發(fā)育特征,研究測(cè)定細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸和能量轉(zhuǎn)換。

    能夠進(jìn)行活體細(xì)胞中離子和PH值變化研究(RATIO),神經(jīng)遞質(zhì)研究,微分干涉及熒光的斷層掃描,多重?zé)晒獾臄鄬訏呙杓爸丿B;

    熒光光譜分析熒光各項(xiàng)指標(biāo)定量分析熒光樣品的時(shí)間延遲掃描及動(dòng)態(tài)構(gòu)件組織與細(xì)胞的三維動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)構(gòu)件;

    熒光共振能量的轉(zhuǎn)移的分析,熒光原位雜交研究(FISH),細(xì)胞骨架研究,基因定位研究,原位實(shí)時(shí)PCR產(chǎn)物分析,熒光漂白恢復(fù)研究(FRAP),胞間通訊研究,蛋白質(zhì)間研究,膜電位與膜流動(dòng)性等研究,完成圖像分析和三維重建等分析。

    基本原理

    傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡使用的是場(chǎng)光源,標(biāo)本上每一點(diǎn)的圖像都會(huì)受到鄰近點(diǎn)的衍射或散射光的干擾;

    激光共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點(diǎn)光源對(duì)標(biāo)本內(nèi)焦平面的每一點(diǎn)掃描,標(biāo)本上的被照射點(diǎn);

    在探測(cè)針孔處成像,由探測(cè)針孔后的光點(diǎn)倍增管(PMT)或冷電耦器件(cCCD)逐點(diǎn)或逐線接收,迅速在計(jì)算機(jī)監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像。

    照明針孔與探測(cè)針孔相對(duì)于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點(diǎn)同時(shí)聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔;

    焦平面以外的點(diǎn)不會(huì)在探測(cè)針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖像是標(biāo)本的光學(xué)橫斷面,克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點(diǎn)。

熒光顯微鏡的獨(dú)特功能

  熒光顯微鏡是熒光顯微檢測(cè)的專用工具,它是光學(xué)顯微鏡的一種。它除了具有光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)和光學(xué)放大作用外,基于熒光的特性,還具備以下獨(dú)特的功能要求:  1、提供足夠能量的能激發(fā)出熒光的光源?! ?、有著適應(yīng)不同物質(zhì)所需的激發(fā)光譜一組濾色片,從光源中選擇合適的激發(fā)光譜,使析出的光譜與該物質(zhì)的吸收光譜重合,以期望獲得最大的熒光。  3、為獲得較弱的熒光圖像,還要建立一套截止濾色片,它使所需觀察的熒光進(jìn)入系統(tǒng)成像,而將其余的光波,包括發(fā)射光阻擋在外,用來(lái)提高圖像的襯度?! ?、放大的光學(xué)系統(tǒng)應(yīng)適應(yīng)熒光的特性,最終獲得既能觀察又能攝影的高亮度、高分辨力的良好襯度的熒光圖像。  5、儀器的安全性。應(yīng)用汞燈要防止紫外線的泄漏和汞燈的爆炸,保證電器安全。

標(biāo)簽: 熒光顯微鏡
熒光顯微鏡 熒光顯微鏡的獨(dú)特功能_熒光顯微鏡

倒置顯微鏡操作及日常維護(hù)

  倒置顯微鏡和放大鏡起著同樣的作用,就是把近處的微小物體成一放大的像,以供人眼觀察。只是顯微鏡比放大鏡可以具有更高的放大率而已。

  物體位于物鏡前方,離開(kāi)物鏡的距離大于物鏡的焦距,但小于兩倍物鏡焦距。所以,它經(jīng)物鏡以后,必然形成一個(gè)倒立的放大的實(shí)像A'B'。A'B'靠近F2的位置上。再經(jīng)目鏡放大為虛像A''B''后供眼睛觀察。目鏡的作用與放大鏡一樣。所不同的只是眼睛通過(guò)目鏡所看到的不是物體本身,而是物體被物鏡所成的已經(jīng)放大了一次的像。

  倒置顯微鏡中常用的觀察方法就是相差。由于這種方法不要求染色,是觀察活細(xì)胞和微生物的理想方法。在此提供各種聚光器來(lái)滿足需要,這種方法提供帶有自然背景色的、高對(duì)比度的、高清晰度的圖像。

    操作使用:

  1.開(kāi)機(jī)。接連電源。打開(kāi)鏡體下端的電控開(kāi)關(guān)。

  2.使用

 ?。?)準(zhǔn)備:將待觀察對(duì)象置于載物臺(tái)上。旋轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器,選擇較小的物鏡。觀察,并調(diào)節(jié)鉸鏈?zhǔn)诫p目目鏡,舒適為宜。

  (2)調(diào)節(jié)光源:推拉調(diào)節(jié)鏡體下端的亮度調(diào)節(jié)器至適宜。通過(guò)調(diào)節(jié)聚光鏡下面的光柵來(lái)調(diào)節(jié)光源的大小。

 ?。?)調(diào)節(jié)像距:轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器,選擇合適倍數(shù)的物鏡;更換并選擇合適的目鏡;同時(shí)調(diào)節(jié)升降,以消除或減小圖像周圍的光暈,提高了圖像的襯度。

  (4)觀察:通過(guò)目鏡進(jìn)行觀察結(jié)果;調(diào)整載物臺(tái),選擇觀察視野。

  3.關(guān)機(jī)

  取下觀察對(duì)象,推拉光源亮度調(diào)節(jié)器至最暗。關(guān)閉鏡體下端的開(kāi)關(guān),并斷開(kāi)電源。旋轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器,使物鏡鏡片置于載物臺(tái)下側(cè),防止灰塵的沉降。

  日常維護(hù)及注意事項(xiàng):

  1.所有鏡頭表面必須保持清潔,落在鏡頭表面的灰塵,可用吸耳球吹去,也可用軟毛刷輕輕的撣去掉。

  2.當(dāng)鏡頭表面沾有油污或指紋時(shí),可用脫脂棉蘸少許無(wú)水乙醇和yi醚的混合液(3:7)輕輕擦拭。

  3.不能用有機(jī)溶液清擦其它部件表面,特別是塑料零件,可用軟布蘸少量中性洗滌劑清擦。

  4.在任何情況下操作人員不能用棉團(tuán)、干布?jí)K或干鏡頭紙擦試鏡頭表面,否則會(huì)刮傷鏡頭表面,嚴(yán)重?fù)p壞鏡頭,也不要用水擦試鏡頭,這樣會(huì)在鏡頭表面殘留一些水跡,因而可能滋生霉菌,嚴(yán)重?fù)p壞顯微鏡。

  5.儀器工作的間歇期間,為了防止灰塵進(jìn)入鏡筒或透鏡表面,可將目鏡留在鏡筒上,或蓋上防塵塞,或用防塵罩將儀器罩住。

  6.微鏡盡可能不移動(dòng),若需移動(dòng)應(yīng)輕拿輕放,避免碰撞。

  7.不允許隨意拆卸儀器,特別是中間光學(xué)系統(tǒng)或重要的機(jī)械部件,以免降低儀器的使用性能。

標(biāo)簽: 倒置顯微鏡
倒置顯微鏡 倒置顯微鏡操作及日常維護(hù)_倒置顯微鏡

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