定量分析和定性分析是分光光度計的兩大主要功能，特別是定量分析。其它的分析都應該是從這兩大種功能中發(fā)展出來的。下面來詳細介紹介紹：
(1)定量分析
根據(jù)瑯伯-比爾定律，樣品的濃度和吸光度是成正比關系的，濃度越大，吸收值越高，所以分光光度計用的較多的還是定量分析，定量分析的種類有很多，這里介紹常用的幾種定量分析方法：
A、絕對法：絕對法是紫外可見分光光度計諸多分析方法中使用較多的一種方法。這是一種以瑯伯-比爾定律A=εbC為基礎的分析方法，某一物質(zhì)在一定波長下ε值是一個常數(shù)，石英比色皿的光程是已知的，也是一個常數(shù)。因此，可用紫外可見分光光度計在λmax波長處，測定樣品溶液的吸光度值A。然后，根據(jù)瑯伯比爾定律求出C=A/εb，則可求出該樣品溶液的含量或濃度。
B、標準法：在選定的波長處，在相同的測試條件下，分別測試標準樣品溶液C標和被測試樣品溶液C樣的吸光度A標和A樣。然后，按下式求得樣品溶液的濃度或含量。
C樣=A樣/A標×C標
C、標準曲線法
紫外可見分光光度計常用的定量分析方法是標準曲線法。即先用標準物質(zhì)配制一定濃度的溶液，再將該溶液配制成一系列的標準溶液。在一定波長下，測試每個標準溶液的吸光度，以吸光度值為縱坐標，標準溶液對應得濃度為橫坐標，繪制標準曲線。最后，將樣品溶液按標準曲線繪制程序測得吸光度值，在標準曲線上查出樣品溶液對應的濃度或含量。
A、其它分析方法
除上述幾個分析方法外經(jīng)常使用的分析方法外，還有比吸收系數(shù)法、最小二乘法、解聯(lián)立方程法和示差分光光度法。
(2)定性分析
如果未知物的紫外吸收光譜的最大吸收峰波長λmax、最小吸收峰波長λmin、最大摩爾吸光系數(shù)εmax，以及吸收峰的數(shù)目、位置、拐點與標準光譜數(shù)據(jù)完全一致，就可以認為是同一種化合物。定性分析的主要目的是知道分析樣品中是什么物質(zhì)。
熒光分光光度計與紫外分光光度計屬一類產(chǎn)品，結構均由激發(fā)光源、單色器、樣品室、光電倍 增管和讀出（記錄）裝置所組成。但是它們光源是不同的，熒光分光光度計多采用高壓汞燈、氙燈和激光光源。同時，熒光測量多采用激發(fā)光和發(fā)射光成直角的光路，儀器組件的布置有所不同。 下圖為某型號熒光分光光度計的光學系統(tǒng)圖，其主要工作原理是：當光源光束經(jīng)入射單色器色散，提取所需波長單色光照射于樣品上，由樣品發(fā)出的熒光經(jīng)發(fā) 射單色器色散后照射于光電倍增管，光電倍增管把熒光強度信號轉化成電信號并經(jīng)放器放大后記錄或讀出信號。
熒光分光光度計的光學系統(tǒng)圖
1.氙燈（150W）；2.透鏡；3.光束分裂器；4.水平狹縫；5.激發(fā)單色器光柵；6.參考放電管；7.關閘；8.樣品室關閘；10.發(fā)射單色器光柵；12.光電倍增管 (1)激發(fā)光源：要比吸收法中光源強度大。 汞燈：發(fā)射強度大、穩(wěn)定，不需復雜電源，但譜線不連續(xù)，數(shù)目少，主要用于濾片熒光計。 碘鎢燈：提供連續(xù)光譜300~700mn。 氙燈：發(fā)出射線的強度大，譜線連續(xù)，分布于200~700 nm光域內(nèi)，且在300~400nm 波段內(nèi)射線強度幾乎相等，但該燈的電源功率要求大，且電源穩(wěn)定，因此電源結構復雜。 激光：發(fā)光強度大，能極大地提高熒光分析的靈敏度。 (2)樣品池：通常由石英池（液體樣品用）或固體樣品架（粉末或片狀樣品）組成。測量液體時，光源與檢測器成直角安排；測量固體時，光源與檢測器成銳角安排。低溫熒光測定時在一樣品池外套一個液氮的透明石英真空瓶。 (3)單色器：熒光分光計通常具有兩個濾光片：第一濾光片在光源與樣品池之間，濾去不需要的光，讓需要的激發(fā)光通過。第二濾光片在樣品池與檢測器之間，濾去溶劑散射 光、容器表面散射光、雜質(zhì)發(fā)出的光等，讓待測物質(zhì)發(fā)射的熒光通過。 熒光分光光度計通常具有兩個光柵，位置同濾光片，單色性好。 (4)檢測器：因熒光通常較弱，采用光電倍增管作檢測器，靈敏度高。選擇光電倍增管要考慮：響應波長、靈敏度和嗓聲水平。 藍敏管對蛋白質(zhì)、核酸的測量適用，而紅敏管則適用于熒光染料檢測。 (5)顯示系統(tǒng)：光度表、計算機操作系統(tǒng)等。 補充說明：與紫外分光光度計的結構區(qū)別： 1.熒光分光光度計采用的是垂直的測量方式，以消除透射光的影響。 2.檢測器前面有無單色器，熒光分光光度計有兩個單色器又上圖可以看出，能夠獲得單色性較好的激發(fā)光并消除其他雜散光干擾。
正確了解熒光分光光度計的結構，也是能夠幫助我們更好使用和操作，一定要仔細閱讀哈~
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