色譜柱是高效液相的心臟，在液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效、容量和滲透性，延長柱子的使用壽命是非常重要。色譜柱壓力過高、過低都屬于柱壓問題。色譜柱壓升高一般是由于柱床內(nèi)產(chǎn)生了雜質(zhì)，造成流體阻力加大所致。下面大致總結(jié)為以下幾個(gè)方面： 1、流動相的前處理： 流動相或楊平中雜質(zhì)堵塞色譜柱進(jìn)口濾片，導(dǎo)致壓力升高。這是由于流動相可能沒有過濾，或過濾不徹底，使固體雜質(zhì)滯留于濾板上所致。另一個(gè)方面也可能沒有使用預(yù)保護(hù)柱所致?！ ?、樣品的沉淀： 當(dāng)流動相與溶解樣品的溶劑不一致時(shí)，樣品進(jìn)入色譜柱時(shí)，可能因溶解度降低而沉淀出來吸附于柱內(nèi)，造成壓力升高?！ ?、晶體的析出： 使用含有緩沖液的流動相時(shí)，緩沖液中的無機(jī)鹽可能會殘留在體系之中，它們會因在新流動相中的溶解度降低而析出阻塞而壓力升高。 4、細(xì)菌或霉菌滋生： 流動相中、管路中或柱子進(jìn)口處繁殖、生長霉菌堵塞濾板，導(dǎo)致壓力升高。所以在使用磷酸鹽緩沖液時(shí)一般要現(xiàn)配現(xiàn)用?！ ?、溶質(zhì)吸附： 一些溶質(zhì)在色譜柱上有較強(qiáng)大的吸附力，洗脫時(shí)流動相也難以清除掉，累積的未洗脫溶質(zhì)也會造成阻力增大從而造成壓力升高?！ ?、流動相更換過度較快： 當(dāng)改變流動相體系時(shí)，不徹底的更換使不同性質(zhì)、互不混溶的流動相存在于同一個(gè)體系之中，也會造成壓力升高?！ ?、壓力脈沖： 運(yùn)行過程中，有時(shí)會產(chǎn)生整個(gè)液相色譜儀系統(tǒng)內(nèi)壓力的突然升降。如泵壓力變化，此所形成的壓力脈沖會造成多孔填料的崩壞和柱床結(jié)構(gòu)的微小變化，填料微屑的長期積累也可能會使柱床阻力增大，造成壓力升高。
色譜柱在使用前，可以進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測試時(shí)要按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行（出廠測試所使用的條件是較佳條件），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同?！ ?、樣品的前處理； a、可以使用流動相溶解樣品； b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)； c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)?！ ?、流動相的配制 液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點(diǎn)： a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長期留在柱中）； b、流動相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)； c、流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命（可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度）； d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，可以使用對紫外吸收較低的溶劑配制； e、流動相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行； f、在流動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用?！ ?、流動相流速的選擇 因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求較佳柱效，可以使用較佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳?！ ‘?dāng)選用較佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間（如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量）?！ ∽⒁猓骸 .含水流動相可以在實(shí)驗(yàn)前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜?？梢约尤氙B氮化鈉，防止細(xì)菌生長； b.流動相要求使用0.45μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)； c.使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。
449717568
