分光光度計的基本原理是:物質(zhì)在光的照射下會產(chǎn)生對光吸收的效應,而且物質(zhì)對光的吸收是具有選擇性的。各種不同物質(zhì)都具有其各自的吸收光譜。
因此不同波長的單色光通過溶液時其光的能星就會被不同程度的吸收,光能量被吸收的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系,即符合比耳定律。
在使用可見分光光度計前先了解一下的操作規(guī)程沒有錯。
開機
1、開機前，檢查電源插座是否接上;
2、啟動電源開關(guān)，儀器顯示"723C"
3、儀器經(jīng)自測后，按"MODE"鍵后再按"2"鍵，儀器顯示"DATA"
基本使用方法
1、按"GO TO λ"鍵，輸入設定波長;
2、四個比色皿，其中R位置放置參比試樣，其余三個放入待測試樣。將比色皿放入樣品池內(nèi)的比色皿架中，蓋上樣品池蓋;
3、將參比試樣推入光路，按"ABS%"鍵，使儀器自動調(diào)零和置滿度;
4、然后將待測試樣推入光路，顯示試樣的吸光度值;
5、如果要想將待測試樣的數(shù)據(jù)打印出，只需按"START/STOP"鍵即可。
可見分光光度計的使用注意事項
每天使用結(jié)束后，應仔細檢查樣品室內(nèi)是否有溶液溢出，若有溢出必須隨時用濾紙吸干;
儀器使用完畢，用防塵套罩住。
1、測量波長 在定量分析中，為了提高測定的靈敏度，入射光的波長應選擇被測物的最大吸收波長λmax，如果λmax有干擾，可選擇另一條靈敏度稍低、但能避免干擾的譜線，所以，適當選擇入射光的波長，不僅能提高測定的靈敏度，還能提高測定的準確度?！ ?、狹縫寬度 狹縫寬度過大，入射光的單色性差；狹縫寬度太小，入射光的強減弱。狹縫寬度過大或過小均會造成靈敏度降低，較佳選擇是產(chǎn)生最小誤差情下的最大狹縫。一般選用儀器的狹縫寬琶度應小于待測樣品吸收帶的半寬度，否則測得的吸光度值會偏低，狹縫寬度的選擇應以減少狹縫寬度時供試品的吸光度不再；加為準，對于大部分被測品種，可以使用2nm縫寬?！ ?、控制適當?shù)奈舛确秶 】赏ㄟ^控制被測物濃度或改變吸收池厚度來實現(xiàn)吸光度合理的范圍，以盡量減小測量誤差。一般吸光度盡量控制在0.1-0.8范圍?！ ?、空白溶液的選擇 空白溶液是用來調(diào)節(jié)吸光度測量工作零點即A=0，T=100%的溶液，以消除溶液中其它基體組分以及吸收池和溶劑對入射光的反射和吸收所帶來的誤差。根據(jù)情況不同，常用空白溶液有如下幾種選擇?！ 、偃軇┛瞻桩斎芤褐兄挥写郎y組分在測定波長下有吸收，而其它組分無吸收時，可用純?nèi)軇┳骺瞻?。 ?、谠噭┛瞻兹绻@色劑或其它試劑有吸收，而待測試樣溶液無吸收，則用不加待測組分的其它試劑作空白。 ?、墼嚇涌瞻兹绻嚇踊w有吸收，而顯色劑或其它試劑無吸收，則用不加顯色劑的試樣溶液作空白。
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