色譜柱是高效液相色譜儀的重要組成部分，在色譜儀分析系統(tǒng)中起著分離作用，是色譜分析的核心部件，對(duì)高效液相色譜柱的正確使用不僅能延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，還能有效保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
以下簡(jiǎn)單介紹液相色譜柱
在使用過(guò)程中應(yīng)當(dāng)注意的問(wèn)題
01
性能測(cè)試
新色譜柱使用前，應(yīng)進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái)，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考依據(jù) (柱性能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異有所不同，在測(cè)試中需保證方法一致性）。
02
流動(dòng)相的配制
液相色譜是通過(guò)樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：
流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中（或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中）。
流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)。
流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)既能得到好的分離效果，同時(shí)又降低柱壓，延長(zhǎng)柱子的使用壽命（可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度）。
流動(dòng)相的物化性質(zhì)與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。
流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。
流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣，除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體。
03
新色譜柱使用前沖洗步驟
1、首先查看色譜柱的說(shuō)明書，注意色譜柱封存的溶劑、推薦流速、pH值、耐受柱壓、及使用溫度等信息。
2、如分析使用的流動(dòng)相與色譜柱內(nèi)儲(chǔ)存的溶劑混溶，可以直接使用流動(dòng)相參照色譜柱說(shuō)明書中推薦的流速、溫度等條件沖洗色譜柱20倍柱體積以上。如果分析條件使用的流動(dòng)相與色譜柱內(nèi)儲(chǔ)存的溶劑不混溶，請(qǐng)選擇與色譜柱內(nèi)儲(chǔ)存溶劑和流動(dòng)相都混溶的溶劑，作為置換溶劑，逐步置換到分析使用的流動(dòng)相。每次置換均應(yīng)沖洗色譜柱20倍柱體積以上。
04
日常使用注意事項(xiàng)
1、請(qǐng)使用HPLC級(jí)別以上的試劑作為流動(dòng)相。
2、流動(dòng)相要用0.45um孔徑以下的微孔濾膜濾過(guò)。
3、流動(dòng)相的pH值不能超出色譜柱的適用范圍。
4、注意流動(dòng)相的流動(dòng)方向要與色譜柱標(biāo)識(shí)的方向一致。
5、容易滋生微生物的流動(dòng)相不要存放過(guò)久，要及時(shí)換新，以免微生物滋生污染色譜柱。
6、色譜柱分析結(jié)束后要及時(shí)徹底沖洗。
7、長(zhǎng)時(shí)間不用的色譜柱要將流動(dòng)相置換為色譜柱保存的溶劑，并兩端用堵頭封死保存。
8、色譜柱要避免劇烈碰撞、跌落等。
05
流動(dòng)相流速的選擇
因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不用的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求較佳柱效，應(yīng)使用zui佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1mL/min，對(duì)于內(nèi)徑4.0mm柱，流速0.8mL/min為更佳。當(dāng)選用zui佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)?？刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間（如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加有機(jī)試劑甲醇或乙腈的含量）。
液相色譜柱在色譜分析中起著至關(guān)重要的角色，是樣品分離的核心，正確使用色譜柱才能達(dá)到更好的理想的分離效果，提高色譜柱的使用壽命。
島津液相色譜儀LC-40
融合“AI”與”loT”尖端技術(shù)的液相色譜儀
診斷精靈＆修復(fù)精靈
智能判斷流動(dòng)相中氣泡的存在，主動(dòng)排氣，自動(dòng)重啟分析序列
流速控制精靈
智能流量控制，流速逐漸增加至柱溫設(shè)定值，保護(hù)色譜柱
流動(dòng)相精靈
儲(chǔ)液盤內(nèi)置傳感器，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)流動(dòng)相剩余量
溶劑配置精靈
自動(dòng)以任意比例混合流動(dòng)相，方便、準(zhǔn)確地制備出分析所需流動(dòng)相
倉(cāng)溫管控精靈
空氣循環(huán)制冷控溫模塊，防止熱空氣進(jìn)入樣品倉(cāng)形成冷凝水
譜峰解析精靈
zui小肩縫提取，共流出峰切割，線性范圍拓展
?。?）照明：
室內(nèi)照明要光線適中，避免陽(yáng)光直射。為避開(kāi)直射光線對(duì)儀器操作、觀測(cè)的影響，儀器(顯示屏)應(yīng)側(cè)向光線。實(shí)驗(yàn)室窗戶要掛窗簾，以便隨時(shí)調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度。
?。?）通風(fēng)：
使用液相色譜儀分析過(guò)程中，由于流動(dòng)相中含有揮發(fā)性有機(jī)溶劑（甲醇、乙睛等）會(huì)產(chǎn)生有害氣體，對(duì)儀器中的光學(xué)元件帶來(lái)腐蝕，應(yīng)注意儀器室的通風(fēng)，以排除室內(nèi)有害氣體、保持空氣清新。
通風(fēng)主要有兩種方式:一種自然通風(fēng)，定時(shí)打開(kāi)門窗，讓內(nèi)外空氣對(duì)流;另一種是強(qiáng)制通風(fēng)，如用通風(fēng)柜、排風(fēng)扇等，及時(shí)將有害氣體排出室外。
?。?）環(huán)境溫度和濕度：
適宜的溫度和濕度是保障HPLC儀正常運(yùn)行、性能穩(wěn)定的必要條件。
HPLC儀一般要求室溫在20一30℃之間，日溫度變化2一3℃，不要波動(dòng)太大，否則，在開(kāi)機(jī)分析時(shí)會(huì)影響色譜分離;
夏季一定要控制室溫不要超過(guò)30℃，溫度太高會(huì)使流路系統(tǒng)產(chǎn)生氣泡，影響檢測(cè)器的正常工作（如熒光檢測(cè)器）。室內(nèi)相對(duì)濕度應(yīng)控制在60%以下。
?。?）供電：
液相色譜室應(yīng)設(shè)有照明電源和動(dòng)力電源，動(dòng)力電可供儀器運(yùn)行使用。為減少噪音的干擾，儀器應(yīng)遠(yuǎn)離瞬時(shí)供電的大功率電器設(shè)備，如:大型電動(dòng)設(shè)備（超低溫冰箱、電烤箱等）、電梯、空調(diào)系統(tǒng)等。為保證HPLC輸液泵的精度，必須要保證穩(wěn)定的輸人電壓，為此，建議色譜室應(yīng)設(shè)有和儀器負(fù)荷相當(dāng)?shù)姆€(wěn)壓電源。室內(nèi)墻上應(yīng)安裝有接地電阻符合要求的地線，用于儀器設(shè)備保護(hù)性接地的公用地線接地電阻≤4Ω。
?。?）潔凈度：
懸浮于空氣中的顆粒物質(zhì)會(huì)對(duì)色譜儀器分析帶來(lái)干擾，使本底和噪聲升高，成為分析測(cè)試的污染源，直接影響高純物質(zhì)的純度與痕量雜質(zhì)的分析。
當(dāng)樣品定量管經(jīng)過(guò)充分的沖洗后，可以將旋柄轉(zhuǎn)回取樣位置(Load)，也可以繼續(xù)保持在進(jìn)樣位置，到下次取樣前才切換回取樣位置。在切換回取樣位置時(shí)，將樣品進(jìn)樣針或微量樣品進(jìn)樣針從進(jìn)樣閥中拔出。
為防止交叉污染，正常情況下不必每次進(jìn)樣后都沖洗進(jìn)樣閥注射針導(dǎo)入口。進(jìn)樣閥內(nèi)根據(jù)專利設(shè)計(jì)的直接連接進(jìn)樣孔，可以使注射針頭的前端直接連接到樣品定量管的末端，沒(méi)有其他空間供樣品殘留。這樣在下一次進(jìn)樣時(shí)，就不會(huì)有上一次殘留的樣品進(jìn)入樣品定量管。
但是在進(jìn)樣針頭插入或拔出過(guò)程中，會(huì)有痕量的樣品沉積在針頭密封區(qū)域。精密的測(cè)定顯示這種殘留有1nL ~ 10nL。這表明進(jìn)20μL樣品，會(huì)殘留0.005% ~ 0.05%。每次進(jìn)樣后沖洗注射針導(dǎo)入口可以將此殘留沖洗干凈。沖洗注射針導(dǎo)入口的過(guò)程為：設(shè)定流動(dòng)相的流速為0.1mL/min ~ 1mL/min，將注射針導(dǎo)入口沖洗頭(Rheodyne部件號(hào)7125-054)連接到一只體積相對(duì)較大的注射器上，用大量的流動(dòng)相只在進(jìn)樣位置清洗注射針導(dǎo)入口。這樣進(jìn)入進(jìn)樣閥中的液體繞過(guò)樣品定量管由樣品溢出管5# 口排出。這一過(guò)程可以將注射針導(dǎo)入口、引導(dǎo)管、注射針導(dǎo)入管和注射針密封圈徹底清洗。而采用注射器完全插入式的沖洗方式，則不能全部清洗上述部分的表面。在取樣位置將注射針插入注射針導(dǎo)入口時(shí)，針頭推動(dòng)注射針密封圈內(nèi)少量樣品液體(上一次沖洗注射針導(dǎo)入管留下的)進(jìn)入樣品定量管。當(dāng)該樣品液體與所用的流動(dòng)相組成不同，且同時(shí)采用部分充滿定量管進(jìn)樣方式時(shí)，在高靈敏度的檢測(cè)器上可能出現(xiàn)怪峰。所以沖洗注射針時(shí)可以用流動(dòng)相沖洗。
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