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紫外可見分光光度計測試方法 光度計操作規(guī)程

時間:2020-05-16    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
  紫外可見分光光度法
 
  紫外-可見分光光度法是在190~800nm波長范圍內(nèi)測定物質(zhì)的吸光度,用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測定的方法。當(dāng)光穿過被測物質(zhì)溶液時,物質(zhì)對光的吸收程度隨光的波長不同而變化。因此,通過測定物質(zhì)在不同波長處的吸光度,并繪制其吸光度與波長的關(guān)系圖即得被測物質(zhì)的吸收光譜。從吸收光譜中,可以確定大吸收波長λmax和小吸收波長λmin。物質(zhì)的吸收光譜具有與其結(jié)構(gòu)相關(guān)的特征性。因此,可以通過特定波長范圍內(nèi)樣品的光譜與對照光譜或?qū)φ掌饭庾V的比較,或通過確定大吸收波長,或通過測量兩個特定波長處的吸收比值而鑒別物質(zhì)。用于定量時,在大吸收波長處測量一定濃度樣品溶液的吸光度,并與一定濃度的對照溶液的吸光度進行比較或采用吸收系數(shù)法求算出樣品溶液的濃度。
 
  儀器的校正和檢定
 
  1.波長 由于環(huán)境因素對機械部分的影響,儀器的波長經(jīng)常會略有變動,因此除應(yīng)定期對所用的儀器進行全面校正檢定外,還應(yīng)于測定前校正測定波長。常用汞燈中的較強譜線237.83nm,253.65nm,275.28nm,296.73nm,313.16nm,334.15nm,365.02nm,404.66nm,435.83nm,546.07nm與576.96nm;或用儀器中氘燈的486.02nm與656.lOnm譜線進行校正;鈥玻璃在波長279.4nm,287.5nm,333.7nm,360.9nm,418.5nm,460.0nm,484.5nm,536.2nm與637.5nm處有尖銳吸收峰,也可作波長校正用,但因來源不同或隨著時間的推移會有微小的變化,使用時應(yīng)注意;近年來,常使用高氯酸鈥溶液校正雙光束儀器,以10%高氯酸溶液為溶劑,配制含氧化鈥(Ho2O3)4%的溶液,該溶液的吸收峰波長為241.13nm,278.lOnm,287.18nm,333.44nm,345.47nm,361.31nm,416.28nm,451.30nm,485.29nm,536.64nm和640.52nm。
 
  儀器波長的允許誤差為:紫外光區(qū)±1nm,500nm附近±2nm。
 
  2.吸光度的準(zhǔn)確度 可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120℃干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約60mg,精密稱定,用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml,在規(guī)定的波長處測定并計算其吸收系數(shù),并與規(guī)定的吸收系數(shù)比較,應(yīng)符合表中的規(guī)定。
 
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  波長/nm                  235(小)     257(大)     313(小)      350(大)
 
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  吸收系數(shù)()的規(guī)定值          124.5          144.0          48.6           106.6
 
  吸收系數(shù)()的許可范圍    123.0~126.0   142.8~146.2   47.0~50.3     105.5~108.5
 
  -----------------------------------------------------------------------------------
 
  3.雜散光的檢查 可按下表所列的試劑和濃度,配制成水溶液,置1cm石英吸收池中,在規(guī)定的波長處測定透光率,應(yīng)符合表中的規(guī)定。
 
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  試劑   濃度/%(g/ml)  測定用波長/nm   透光率/%
 
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  鈉      1.00           220          <0.8
 
  亞硝酸鈉    5.00           340          <0.8
 
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  對溶劑的要求
 
  含有雜原子的有機溶劑,通常均具有很強的末端吸收。因此,當(dāng)作溶劑使用時,它們的使用范圍均不能小于截止使用波長。例如甲醇、乙醇的截止使用波長為205nm。另外,當(dāng)溶劑不純時,也可能增加干擾吸收。因此,在測定供試品前,應(yīng)先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求,即將溶劑置1cm石英吸收池中,以空氣為空白(即空白光路中不置任何物質(zhì))測定其吸光度。溶劑和吸收池的吸光度,在220~240nm范圍內(nèi)不得超過0.40,在241~250nm范圍內(nèi)不得超過0.20,在251~300nm范圍內(nèi)不得超過0.10,在300nm以上時不得超過0.05。
 
  測定法
 
  測定時,除另有規(guī)定外,應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照,采用1cm的石英吸收池,在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內(nèi)測試幾個點的吸光度,或由儀器在規(guī)定波長附近自動掃描測定,以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確。除另有規(guī)定外,吸收峰波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的波長±2nm以內(nèi),并以吸光度大的波長作為測定波長。一般供試品溶液的吸光度讀數(shù),以在0.3~0.7之間為宜。儀器的狹縫波帶寬度宜小于供試品吸收帶的半高寬度的十分之一,否則測得的吸光度會偏低;狹縫寬度的選擇,應(yīng)以減小狹縫寬度時供試品的吸光度不再增大為準(zhǔn)。由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收,因此測定供試品的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù),或由儀器自動扣除空白讀數(shù)后再計算含量。
 
  當(dāng)溶液的pH值對測定結(jié)果有影響時,應(yīng)將供試品溶液的pH值和對照品溶液的pH值調(diào)成一致。
 
  1.鑒別和檢查 分別按各品種項下規(guī)定的方法進行。
 
  2.含量測定 一般有以下幾種方法。
 
  (1)對照品比較法 按各品種項下的方法,分別配制供試品溶液和對照品溶液,對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分規(guī)定量的100%±10%,所用溶劑也應(yīng)完全一致,在規(guī)定的波長處測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度后,按下式計算供試品中被測溶液的濃度:
 
  cx=(Ax/AR)cR
 
  式中 cx為供試品溶液的濃度;
 
  Ax為供試品溶液的吸光度;
 
  cR為對照品溶液的濃度;
 
  AR為對照品溶液的吸光度。
 
  (2)吸收系數(shù)法 按各品種項下的方法配制供試品溶液,在規(guī)定的波長處測定其吸光度,再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計算含量。用本法測定時,吸收系數(shù)通常應(yīng)大于100,并注意儀器的校正和檢定。
 
  (3)計算分光光度法 計算分光光度法有多種,使用時應(yīng)按各品種項下規(guī)定的方法進行。當(dāng)吸光度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時,波長的微小變化可能對測定結(jié)果造成顯著影響,故對照品和供試品的測試條件應(yīng)盡可能一致。計算分光光度法一般不宜用作含量測定。
 
  (4)比色法 供試品本身在紫外-可見光區(qū)沒有強吸收,或在紫外光區(qū)雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度,可加入適當(dāng)?shù)娘@色劑,使反應(yīng)產(chǎn)物的大吸收移至可見光區(qū),這種測定方法稱為比色法。
 
  用比色法測定時,由于顯色時影響顯色深淺的因素較多,應(yīng)取供試品與對照品或標(biāo)準(zhǔn)品同時操作。除另有規(guī)定外,比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液,然后依次加入等量的相應(yīng)試劑,并用同樣方法處理。在規(guī)定的波長處測定對照品和供試品溶液的吸光度后,按上述(1)法計算供試品濃度。
 
  當(dāng)吸光度和濃度關(guān)系不呈良好線性時,應(yīng)取數(shù)份梯度量的對照品溶液,用溶劑補充至同一體積,顯色后測定各份溶液的吸光度,然后以吸光度與相應(yīng)的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,再根據(jù)供試品的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得其相應(yīng)的濃度,并求出其含量。
 

紫外可見分光光度計故障問題解決方案

  1、紫外可見分光光度計噪音較大

  原因:光源燈泡使用時間超過壽命期

  處理方法:更換光源燈泡

  2、在使用過程中,出現(xiàn)數(shù)字顯示不能歸零,同時伴有圖線記錄基線位置偏高

  ①光電倍增等老化,性能降低

 ?、谛盘柼幚戆蹇赡馨l(fā)生故障

  ③前置放大版出現(xiàn)故障,引起反饋量增大

  處理方法:

 ?、匍_機通電,先做記錄故障曲線,再與原始記錄的標(biāo)準(zhǔn)曲線對照,找出異同點,并作一下定性定能分析。然后用一只同型號規(guī)格的新光電倍增管替換機上的光電管,再開機實驗,結(jié)果記錄出來的圖線并沒有什么變化,由此證明光電倍增管沒有老化變質(zhì)。

 ?、谶M一步檢查信號處理板,未發(fā)現(xiàn)信號處理板各元器件損壞,對影響靈敏度有關(guān)的電位器檢測,結(jié)果測得數(shù)據(jù)正常,這說明信號處理板沒有故障。

  3、自檢時提示波長自檢出錯

  原因:

  自檢過程中可能打開過儀器樣品室的蓋子

  處理方法:

  關(guān)上儀器樣品室蓋子,重新自檢

  4、儀器自檢時提示通訊錯誤

  原因:

  儀器與電腦之間的數(shù)據(jù)線沒有連接好

  處理方法:

  連接好數(shù)據(jù)線,重新打開儀器和軟件,重新自檢

  5、測試過程中提示能量太低

  原因:

 ?、俟庠礋襞菔褂脮r間超過壽命期

  ②樣池中有不透光的東西擋住了光

  處理方法:

  更換光源燈泡;拿走擋光的物品

標(biāo)簽: 紫外可見分光光度計
紫外可見分光光度計 紫外可見分光光度計故障問題解決方案_紫外可見分光光度計

原子吸收分光光度計的介紹

  原子吸收分光光度計主要由光源、原子化器、分光系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)4部分組成。原子化器主要有兩大類,即火焰原子化器和電熱原子化器?;鹧嬗卸喾N火焰,目前普遍應(yīng)用的是空氣—乙炔火焰。電熱原子化器普遍應(yīng)用的是石墨爐原子化器,因而原子吸收分光光度計,就有火焰原子吸收分光光度計和帶石墨爐的原子吸收分光光度計?! ?、光源的作用是供給原子吸收所需要的足夠尖銳的共振線?! ?、原子化器的作用是提供一定的能量,使試樣游離出能在原子吸收中起作用的基態(tài)原子,并使其進入原子吸收光譜燈的吸收光程?! ?、分光系統(tǒng)的作用是將欲測的吸收線和其他譜線分開,從而得到原子吸收所需的尖銳的共振線?! ?、檢測系統(tǒng)包括光電元件、放大器及讀數(shù)系統(tǒng)。

標(biāo)簽: 原子吸收分光光度計
原子吸收分光光度計 原子吸收分光光度計的介紹_原子吸收分光光度計

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