高效液相色譜儀（HPLC）現(xiàn)已成為有機化學分析的重要手段之一。同樣，在食品分析中，無論是殘留分析還是成分分析，HPLC也已成為不可或缺的分析儀器。和其它分析儀器一樣，你若想讓HPLC很好地為你工作、得到可靠的數(shù)據(jù)，首先你要保養(yǎng)好它，使它處于一個良好的待機狀態(tài)，這樣你操作它進行分析時就可以比較順利地獲得理想的結(jié)果?！ ×鲃酉嗝摎鈱τ诒苊釮PLC系統(tǒng)出問題，順利得到一個理想的數(shù)據(jù)是一個很有效的措施。HPLC系統(tǒng)內(nèi)是不能夠有氣泡存在的。HPLC泵在輸送液體時要產(chǎn)生很大的壓力，由于氣體的壓縮比與液體相比大的多，因而當氣泡存在時，你將觀察到瞬間的流速降低和系統(tǒng)壓力下降。如果這個氣泡足夠大，液相泵將不能輸送任何溶劑，而且如果壓力低于預先設定的壓力低限，泵將停止工作。有些泵設計可以很好地排除氣泡，而也有一些泵設計當氣泡存在時將停止運轉(zhuǎn)。 常用的脫氣方法有如下幾種： 1、吹氦脫氣法?！ ±煤庠谝后w中溶解度比空氣低的特性，在0.1MPa壓力下，以約60 mL/min流速通入流動相儲液容器中10～15min，可以很有效地從流動相中排除溶解的空氣，能排除接近80%的氧氣。采用一個高效分布式噴射流裝置，一體積的氦氣可從流動相中將等體積的幾乎全部氣體排除。這意味著1L氦氣通過1L流動相就可完成排氣這個工作。這種脫氣方法雖然好，但我們國內(nèi)氦氣價格較高，很少有實驗室采用此方法?！ ?、加熱回流法?！ 〈朔ǖ拿摎庑Ч^好。在操作時要注意冷凝塔的冷卻效率，否則溶劑會丟失，混合流動相的比例會有變化?！ ?、抽真空脫氣法?！ 〈朔墒褂?font color="#0268CA">真空泵，降壓至0.05～0.07MPa即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會使混合溶劑組成發(fā)生變化，從而影響到實驗的重現(xiàn)性，因此多用于單溶劑體系的簡單分析。 4、超聲波脫氣法。 將欲脫氣的流動相置于超聲波清洗器中，用超聲波震蕩10～20min。此法的脫氣效果最差?！ ?、在線脫氣法?！ ‖F(xiàn)在商品的HPLC儀器，均可配在線脫氣機。在線脫氣使用簡單，低故障，有效。建議購買儀器時一定要購買，有的公司是作為選購件，所以與儀器公司談配置時應與公司確認。
高效液相色譜儀適宜于分離、分析高沸點、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對分子量比較大的物質(zhì)，因而廣泛為化學、醫(yī)學、工業(yè)、農(nóng)學、商檢和法檢等學科領(lǐng)域中針對這種精密而又運用廣泛的科學儀器。
下面我們來聊一聊基線。HPLC常見的基線問題主要有基線漂移以及基線噪音。
基線漂移
線漂移基線漂移是色譜工作者普遍遇到的問題。一般說來，機器剛起動時，基線容易漂移，大概要30min的平衡時間，如果用了緩沖溶液、緩沖鹽，或者在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長，仍然發(fā)現(xiàn)基線漂移，原因可能有以下幾種：
1、柱溫波動
控制好柱子和流動相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。
2、流通池被污染或有氣體
用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池(盡量斷開柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
3、紫外燈能量不足
更換新的紫外燈
4、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。檢查流動相的組成，使用高品質(zhì)的化學試劑及HPLC級的溶劑。
基線噪音
對于紫外檢測器,氘燈光源打開后要預熱30min以上,基線才能穩(wěn)定。噪聲是指與被測物無關(guān)的檢測器輸出信號的隨機擾動變化,分短期噪聲和長期噪聲兩種。
基線噪音(規(guī)則的)
產(chǎn)生基線噪音的原因有：在流動相、檢測器或泵中有空氣;漏液;流動相混合不完全;溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱);在同一條線上有其他電子設備;泵振動。
了避免基線噪音,在正式進樣之前,需要對流動相脫氣;沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣;檢查管路接頭是否松動;泵是否漏液;是否有鹽析出和不正常的噪音,如有必要,更換泵密封;用手搖動使溶劑混合均勻或使用低粘度的溶劑減少差異或加上熱交換器;有其他電子設備時斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正;泵振動時在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器。
基線噪音(不規(guī)則的)
(1)漏液：檢查接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封,檢查流通池是否漏液。
(2)流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成：檢查流動相的組成。
(3)流動相各溶劑不相溶：選擇互溶的流動相。
(4)檢測器/記錄儀電子元件的問題：斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正。
(5)系統(tǒng)內(nèi)有氣泡：用強極性溶液清洗系統(tǒng);檢測器內(nèi)有氣泡,清洗檢測器,在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器。
(6)流通池污染(即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音):用硝酸清洗流通池;
(7)檢測器燈能量時不足更換燈;
(8)色譜柱填料流失或阻塞:更換色譜柱。
(9)流動相混合不均勻或混合器工作不正常:維修或更換混合器,在流動相不走梯度時,不建議使用泵的混合裝置。
高效液相色譜儀操作步驟如下：
1)過濾流動相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜.
2)對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。
3)打開hplc工作站（包括計算機軟件和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統(tǒng)。
4)進入hplc控制界面主菜單，點擊manual，進入手動菜單。
5)有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。
6)調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。
7)設計走樣方法。
8)進樣和進樣后操作。
9)關(guān)機時，先關(guān)計算機，再關(guān)液相色譜。
10)填寫登記本，由負責人簽字。
11)流動相均需色譜純度，水用20m的去離子水。
12)柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要讓液體過柱子。
13)所有過柱子的液體均需嚴格的過濾。
14)壓力不能太大，可以不要超過2000psi。
高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。
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