高效液相色譜儀是利用混合物各組分在固定相和流動(dòng)相中溶解、分配或吸附等化學(xué)作用性能的差異,使各組分在作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達(dá)到相互分離。高效液相色譜儀在食品分析、環(huán)境分析、生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和無機(jī)分析等領(lǐng)域得到廣泛使用。一般來說,80%~85%的有機(jī)物原則上可采用高效液相色譜儀分析。
一、在食品分析中:
1、食品營養(yǎng)成分分析:蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、色素、維生素、香料、有機(jī)酸(鄰苯二甲酸、檸檬酸和蘋果酸等)、有機(jī)胺和礦物質(zhì)等分析。
2、食品添加劑分析:甜味劑、防腐劑、著色劑(檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃和亮藍(lán)等)和抗氧化劑等分析。
3、食品污染物分析:霉菌毒素(黃qu霉毒素、黃桿菌毒素和大腸桿菌毒素等)、微量元素和多環(huán)芳烴等分析。
二、在環(huán)境分析中:
多環(huán)芳烴(特別是稠環(huán)芳烴)和農(nóng)藥殘留(氨基甲酸脂類,反相色譜)等分析。
三、在生命科學(xué)中的應(yīng)用:
1、低分子量物質(zhì):氨基酸、有機(jī)酸、有機(jī)胺、類固醇、卟啉、糖類和維生素等分析。
2、高分子量物質(zhì):多肽、核糖核酸、酶(胰島素、激素、細(xì)胞色素和干擾素等)和蛋白質(zhì)等分析。
四、在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中:
1、合成藥物:抗生素、抗憂郁藥物和黃胺類藥等分析。
2、天然藥物生物堿:吲哚堿、顛茄堿和強(qiáng)心甙等分析。
五、在無機(jī)分析中:
陽、陰離子等分析。
1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu):
a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。
柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu),柱接頭是兩端螺紋組件,一端是為7/16英寸外螺紋,另一端是3/16英寸的內(nèi)螺紋(國內(nèi)外已規(guī)范化)。7/16英寸外螺紋與1/4英寸柱管(Φ6.35mm)連接,中間放置壓壞用于密封。3/16英寸的內(nèi)螺紋與1/16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接,中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積,在安裝色譜柱時(shí),用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底,然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應(yīng)嚴(yán)格控制在2.5mm長或其他固定尺寸)。
在兩端柱接頭內(nèi),柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或?yàn)V網(wǎng)),用于封堵柱填料不被流動(dòng)相沖出柱外而流失??罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì),能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對(duì)其有一定的腐蝕性,故使用時(shí)要注意,柱及連接管內(nèi)不能長時(shí)間存留此類溶劑,以避免腐蝕。
b、柱填料:
液相色譜柱的分離作用是在填料與流動(dòng)相之間進(jìn)行的,柱子的分類是依據(jù)填料類型而定。
正相柱:多以硅膠為柱填料。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種,其顆粒直徑在3—10?m的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN,-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。
反相柱:主要是以硅膠為基質(zhì),在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。
常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等,其顆粒粒徑在3—10?m之間。
2、色譜柱的安裝:
a、拆開柱包裝盒,確認(rèn)色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。
b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
c、按柱管上標(biāo)示的流動(dòng)相流向,將色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如條件允許,建議在柱前使用保護(hù)柱);柱的出口與檢測(cè)器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時(shí)一定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底,然后順時(shí)針擰緊空心螺釘,直到擰不動(dòng)為止,再用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1/4-1/2圈,切記不要用力過大。如色譜柱通過流動(dòng)相加壓后有漏液現(xiàn)象,請(qǐng)用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1/4圈,直至不漏液為止。