氣相、液相色譜樣品瓶清洗不徹底的潛在問題包括：
導(dǎo)致的分析物損失；溶劑與隔墊作用產(chǎn)生的色譜雜峰；自動(dòng)進(jìn)樣器的機(jī)械損壞；樣品降解；進(jìn)樣重復(fù)性差等等?？傊畷?huì)出現(xiàn)因清洗后的色譜樣品瓶潔凈度達(dá)不到要求而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)生偏差的情況。按玻璃儀器洗滌方法根據(jù)污染程度選擇清洗方法，下面介紹五種清洗色譜樣品瓶方法：
第①種：酒精清洗
1、倒干色譜樣品瓶內(nèi)試液。
2、全部浸入95%酒精，超聲洗2次后倒干，因?yàn)榫凭走M(jìn)入1.5mL的小瓶，且能與大多數(shù)有機(jī)溶劑互溶以達(dá)到。
3、倒入清水，超聲洗2次。
4、倒干瓶內(nèi)洗液，于110攝氏度烘1~2小時(shí)，注意不能于高溫下烘烤。
5、冷卻，保存。
第二種：甲醛+超聲波清洗
1、先用甲醇（色譜純）浸泡，并超聲清洗20分鐘，后將甲醇倒干。
2、再將色譜樣品瓶內(nèi)注滿水，超聲清洗20分鐘，后將水倒干。
3、后將色譜樣品瓶烘干。
第三種：純水+超聲+乙醇清洗
1、自來水沖洗幾遍。
2、放入倒有純水的燒杯中，超聲15分鐘。
3、換水，再超聲15分鐘。
4、泡在倒有無水乙醇的燒杯中。
5、然后取出自然風(fēng)干。
第四種：過氧化氫+酒精清洗
1、一般都是先用清水沖洗烘干后再用強(qiáng)氧化氫洗液洗液浸泡。
2、首先使用醫(yī)用酒精侵泡4個(gè)小時(shí)以上，然后超聲半個(gè)小時(shí)，然后倒出醫(yī)用酒精，使用水超聲半個(gè)小時(shí)，用水沖洗后烘干。
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現(xiàn)代高效液相色譜中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，要做合適的選擇，首先必須對此有一定的認(rèn)識(shí)和了解。
液相色譜填料可以是陶瓷性質(zhì)的無機(jī)物基質(zhì)，也可以是有機(jī)聚合物基質(zhì)。液相色譜填料中的有機(jī)物基質(zhì)主要是硅膠和氧化鋁。無機(jī)物基質(zhì)剛性大，在溶劑中不容易膨脹。
液相色譜填料中有機(jī)聚合物基質(zhì)主要有交聯(lián)苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯。有機(jī)聚合物基質(zhì)剛性小、易壓縮，溶劑或溶質(zhì)容易滲入有機(jī)基質(zhì)中，導(dǎo)致填料顆粒膨脹，結(jié)果減少傳質(zhì)，最終使柱效降低。
液相色譜填料的粒度選擇
液相色譜填料的粒度主要影響填充柱的兩個(gè)參數(shù)，即柱效和背壓。粒度越小，填充柱的柱效越高；然而粒度越小，柱壓越大，柱壓的增加限制了粒度小于3μm的填料應(yīng)用。在相同選擇性條件下，提高柱效可提高分離度，但不是唯一的因素。如果固定相選擇是正確，但是分離度不夠，那么選用更小粒度的填料是很有用的。3μm填料填充柱的柱效比相同條件下的5μm填料的柱效提高近30%；然而，3μm的色譜柱的背壓卻是5μm的2倍。與此同時(shí)，柱效提高意味著在相同條件下可以選用更短的色譜柱，以縮短分析時(shí)間。另外，可以采用低粘度的溶劑做流動(dòng)相或增加色譜柱的使用溫度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色譜柱的壓力。
輸液泵/高壓泵是保證HPLC系統(tǒng)流路暢通、流量精確和壓力穩(wěn)定的重要儀器部件。目前多用往復(fù)式恒流柱塞泵。主要由柱塞桿、密封墊圈和兩個(gè)單項(xiàng)閥組成,用馬達(dá)帶動(dòng)凸輪驅(qū)動(dòng)柱塞桿作吸液和排液的往復(fù)運(yùn)動(dòng)。常見泵的故障主要有以下幾種,并提供解決的辦法。
1、單向閥故障
由于球與閥座密封不嚴(yán),導(dǎo)致液體倒流,造成壓力不穩(wěn),甚至球與閥座粘在一起阻死。為避免單項(xiàng)閥中的寶石球和閥座被污染,流動(dòng)相應(yīng)使用HPLC級的溶劑,并且配好的流動(dòng)相一定要用0.45um濾膜過濾和脫氣。如果泵被微粒污染,可分別用25ml水25ml甲醇25ml異丙醇25ml二氯甲烷依次沖洗,最后再用所用的溶液沖洗整個(gè)系統(tǒng)。注意:沖洗時(shí)應(yīng)打開泄液閥。如果氣泡進(jìn)入閥中,它會(huì)緊貼在閥體的一側(cè),使寶石球難返回到閥座,引起液體倒流,導(dǎo)致泵的壓力和流速明顯改變。此時(shí)應(yīng)立即打開瀉液閥,大流量(2ml/min)沖洗泵,直至排除液為直線型。如果泵進(jìn)氣泡也可在泵頭上排氣泡,具體做法為:用扳手固定住進(jìn)氣泡的泵頭,擰開輸出管道的壓帽,手動(dòng)泵進(jìn)液,這時(shí)可見到氣泡從孔中擠壓出來,直至無氣泡排出將壓帽擰緊。如果采取上述方法仍不能使壓力穩(wěn)定,應(yīng)考慮是密封墊圈壞了?或單向閥磨損、球不光滑等,需更換部件。
2、泵墊圈故障
泵墊圈常見的故障是滲漏和墊圈受損污染系統(tǒng).液相色譜系統(tǒng)一般情況下不要使用強(qiáng)酸強(qiáng)堿溶液,樣品PH值一般調(diào)到中性,才可進(jìn)樣。如果強(qiáng)酸強(qiáng)堿會(huì)損壞密封墊和柱塞桿。密封圈與運(yùn)動(dòng)著的柱塞桿緊密接觸,可使柱塞在泵頭自由運(yùn)動(dòng)而流動(dòng)相不漏出來,它是液相色譜中最易磨損的部件。有條件的實(shí)驗(yàn)室可三個(gè)月更換一次墊圈,以防止泵系統(tǒng)污染。如果用緩沖鹽作流動(dòng)相則更會(huì)加速墊圈的磨損,應(yīng)及時(shí)沖洗。墊圈損壞一般表現(xiàn)為:泵壓力不穩(wěn)、泵頭漏液。為避免上述故障的發(fā)生,我們在分析中應(yīng)注意以下幾點(diǎn):
①使用超純水、純度級別較高的試劑和色譜級溶劑配制流動(dòng)相;
②配好的流動(dòng)相一定要抽濾脫氣,即便儀器有在線脫氣裝置,也可以在上機(jī)前進(jìn)行抽濾;
?、郾迷趩?dòng)前一定要通過泄液閥抽凈泵里的空氣;
?、苡镁彌_鹽洗脫時(shí),分析結(jié)束后一定要用水沖洗泵和整個(gè)流路系統(tǒng),最后用有機(jī)溶劑充滿系統(tǒng)。
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