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流式細(xì)胞儀的流動室維護(hù)和保養(yǎng) 流式細(xì)胞儀操作規(guī)程

時間:2020-05-16    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
  流式細(xì)胞儀(Flow cytometer)是對細(xì)胞進(jìn)行自動分析和分選的裝置。它可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細(xì)胞的一系列重要的生物物理、生物化學(xué)方面的特征參量,并可以根據(jù)預(yù)選的參量范圍把指定的細(xì)胞亞群從中分選出來。多數(shù)流式細(xì)胞計是一種零分辨率的儀器,它只能測量一個細(xì)胞的諸如總核酸量,總蛋白量等指標(biāo),而不能鑒別和測出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是說,它的細(xì)節(jié)分辨率為零。
  
  了解如何正確地維護(hù)和保養(yǎng)流動室,可zui大化延長流動室的性能和使用期限。而不正確的使用和維護(hù),則可能產(chǎn)生不正確的讀數(shù)和數(shù)據(jù),而且會使得你不停呼叫工程師甚至更換流動室或光路。
  
  一、需避免的化學(xué)物質(zhì)
  
  目前大部分流動室都是由石英或熔融石英制作而成,故需避免pH值大于9.5的堿性溶液非常重要。這些溶液可能腐蝕石英,使其變毛糙,影響光學(xué)性能。一旦使用過堿性溶液,在流動室的通路上可能會看到一些被腐蝕的條紋,如果這些條紋剛好位于激光器檢測點,那么就可能影響檢測準(zhǔn)確性。
  
  二、如何避免結(jié)晶
  
  避免結(jié)晶很重要。為了避免流動室內(nèi)液體結(jié)晶,需經(jīng)常用水沖洗。在跑完緩沖液或生理鹽水之后,尤其是高pH值的溶液后,徹底沖洗十分必要。有些流動室內(nèi)部會包被一些特殊材料,以防止真菌或結(jié)晶生長。
  
  三、清洗
  
  清洗流動室和光路連接器對于任何流式細(xì)胞儀的正確運行都十分重要。其中zui重要的一點就是別讓流動室的液體干掉,而含有鹽分、蛋白或其它固態(tài)溶解物的液體,均可能損傷液路。
  
  的清潔方式就是用充滿10%表面活性劑的針頭連接流動室,將活性劑注入流動室,多次注射后,將液體留在流動室內(nèi)至少2小時。zui后關(guān)機前,流動室必須完全用蒸餾水充滿。
  
  如果流動室只是過夜,第二天馬上就用,那么可以用buffer充。
  
  如果要過一個周末或長時間不用,那么建議使用蒸餾水或20%乙醇充。
  
  四、操作和使用中的注意事項
  
  1.光電倍增管要求穩(wěn)定的工作條件,暴露的較強的光線下以后,需要較長時間的“暗適應(yīng)”以消除或降低部分暗電流本底才能工作;另外還要注意磁屏蔽;
  
  2.光源不得在短時間內(nèi)(一般要1h左右)關(guān)上又打開;使用光源必須預(yù)熱并注意冷卻系統(tǒng)工作是否正常;
  
  3.液流系統(tǒng)必需隨時保持液流暢通,避免氣泡栓塞,所使用的鞘流液使用前要經(jīng)過過濾、消毒;
  
  4.注意根據(jù)測量對象的變換選用合適的濾片系統(tǒng)、放大器的類型等;
  
  5.特別強度每次測量都需要對照組。

流式細(xì)胞儀的發(fā)展歷史

  1、1934年,Moldavan使懸浮的紅細(xì)胞從一個毛細(xì)玻璃管中流過,每個通過的細(xì)胞可被一個光電裝置記錄下來。這就是流式細(xì)胞儀的雛形。  2、1965年,Kamentsky用紫外吸收和可見光散射兩個參數(shù)同時測量未染色細(xì)胞,給出細(xì)胞中核酸的含量和細(xì)胞大小。奠定了多參數(shù)流式細(xì)胞測量的基礎(chǔ)?! ?、1967年,Van Dilla和Los Alamos采用了層流流動室和氬激光器,開發(fā)出了液流束、照明光軸、檢測系統(tǒng)三者相互垂直的流式細(xì)胞儀。這成為目前各種流式細(xì)胞儀的基礎(chǔ)?! ?、1969年,F(xiàn)ulwyler利用靜電墨水噴射液滴偏轉(zhuǎn)技術(shù),建立了流式細(xì)胞分選術(shù)。Ehrlich和Wheeless利用飛點掃描技術(shù)和縫掃描技術(shù)使零分辨率的流式細(xì)胞儀變成了低分辨率的流式細(xì)胞儀。  5、20世紀(jì)70年代,隨著Kohler和Milstein成功提出了單克隆抗體技術(shù)和熒光標(biāo)記技術(shù),為特異研究和分析細(xì)胞奠定了良好的基礎(chǔ)?! ?、1973年,美國BD公司和美國斯坦福大學(xué)合作,研制開發(fā)并生產(chǎn)了世界上第一臺商用流式細(xì)胞儀FACS I?! ?、20世紀(jì)80年代,流式細(xì)胞儀的數(shù)據(jù)采集、存儲、顯示、分析日趨完善,隨著樣品制備方法的增加,新的熒光染料和細(xì)胞標(biāo)記物的出現(xiàn),使流式細(xì)胞儀的應(yīng)用范圍逐漸擴大?! ?、20世紀(jì)90年代,與之配套的標(biāo)本制備儀和自動進(jìn)樣器的問世,以及適合臨床應(yīng)用的單克隆抗體的增加,使流式細(xì)胞儀逐漸從科研單位進(jìn)入醫(yī)院的中心實驗室和檢驗科,成為現(xiàn)代化的臨床檢驗儀器的一部分。

標(biāo)簽: 流式細(xì)胞儀
流式細(xì)胞儀 流式細(xì)胞儀的發(fā)展歷史_流式細(xì)胞儀

流式細(xì)胞儀的應(yīng)用

  流式細(xì)胞儀在醫(yī)學(xué)應(yīng)用非常廣泛,是一種能夠?qū)?xì)胞進(jìn)行相關(guān)處理的儀器,并且能夠?qū)?xì)胞進(jìn)行必要的分析,所以在醫(yī)學(xué)生的應(yīng)用非常的多。下面介紹一下流式細(xì)胞儀的具體應(yīng)用:  流式細(xì)胞儀的應(yīng)用  1、DNA倍體分析  DNA分析是流式細(xì)胞儀最初且是現(xiàn)在應(yīng)用廣泛檢測項目。由于惡性細(xì)胞DNA含量通常與正常細(xì)胞不同,存在異倍體細(xì)胞,所以現(xiàn)有很研究評價異倍體細(xì)胞與腫瘤惡性度及其預(yù)后的關(guān)系。DNA含量檢測還可提供細(xì)胞周期方面的信息,這在細(xì)胞生物學(xué)中運用很廣泛。特別地,它可表示出細(xì)胞毒性藥物對細(xì)胞作用過程。這些DNA檢測還可與細(xì)胞表面標(biāo)志物標(biāo)記同時進(jìn)行,這樣在細(xì)胞混合培養(yǎng)中,可通常追蹤表達(dá)特異標(biāo)志物的細(xì)胞顯示其生長周期情況。所有方法都是基于染料能與核酸起特異的化學(xué)反應(yīng)并發(fā)射出熒光,常用的染料為PI,DAPI?! ≡谠擃I(lǐng)域Partec公司的 CyFlow PA是一枝獨秀?! ?、細(xì)胞生存能力實驗  使用Heochest 33342染料與DNA特異性結(jié)合,后因細(xì)胞活力不同染料的結(jié)合程度也各異,故可評估細(xì)胞的活性度?! ?、計數(shù)外周血中檢測網(wǎng)織紅細(xì)胞  使用TO染料能夠特異性地與RNA結(jié)合,結(jié)合系數(shù)高達(dá)3000,故具有很好的性價比?! ?、外周血、骨髓采集物中CD34陽性干細(xì)胞計數(shù),臨床上用于骨髓移植前干細(xì)胞數(shù)理的測定。使用標(biāo)準(zhǔn)ISHAG方案,需要DNA或其他核染料占用FITC通道,PE標(biāo)記CD34抗體,PE-CY5標(biāo)記CD45抗體?! ?、交叉淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞毒實驗  檢測識別供體血清中免疫球蛋白與受體粒細(xì)胞之間是否存在反應(yīng)有著重要臨床意義,因為這種反應(yīng)會導(dǎo)致移植后發(fā)熱、移植后肺損傷及免疫性粒細(xì)胞缺乏癥。流式細(xì)胞儀可檢測全血樣本與血清孵育后粒細(xì)胞上結(jié)合的人免疫球蛋白。FITC標(biāo)記人免疫球蛋白抗體、PE標(biāo)記粒細(xì)胞表面標(biāo)志物、PE-CY5標(biāo)記HLA抗體。  6、血小板自身抗體檢測  血小板自身抗體識別人血小板抗原,會引起各種臨床相關(guān)癥狀,如新生兒自免性血小板減少癥、輸血后紫癜、難治性血小板減少。流式細(xì)胞可快速準(zhǔn)確地檢測血小板自身抗體。FITC標(biāo)記抗人免疫球蛋白抗體、PE標(biāo)記識別血小板抗體?! ?、移植交叉配型  原細(xì)胞毒實驗,主要用于避免移植物超急性排拆反應(yīng)。流式細(xì)胞儀用于監(jiān)測T或B細(xì)胞是否受到受體血清中免疫球蛋白攻擊,作為HLA配型前的預(yù)實驗。流式細(xì)胞儀因其高精確性已成為該領(lǐng)域內(nèi)的金標(biāo)準(zhǔn)。FITC標(biāo)記抗人免疫球蛋白抗體、PE標(biāo)記識別T細(xì)胞CD3或B細(xì)胞CD29抗體?! ?、檢測細(xì)胞經(jīng)抗原或細(xì)胞有絲分裂刺激后活化效應(yīng)淋巴細(xì)胞早期活化指標(biāo)CD69可用來檢測免疫治療效果。流式細(xì)胞使用三色分析可監(jiān)測淋巴細(xì)胞各亞群活化情況:FITC標(biāo)記的CD3抗體、PE標(biāo)記的CD8抗體、PE-CY5標(biāo)記的CD69抗體?! ?、細(xì)胞增殖狀態(tài)檢測  核增殖抗PCNA、Ki67、BrdUrd用于衡量細(xì)胞增殖分裂狀況,在評估腫瘤預(yù)后有重要意義。為些標(biāo)志物的檢測一般同細(xì)胞表面標(biāo)志物同時檢測。FITC標(biāo)記PCNA或Ki67或BrdUrd,PE或(并)PE-CY5標(biāo)記細(xì)胞表面標(biāo)志物?! ?0、染色體分析  流式細(xì)胞儀染色分析運用兩種特異性染料:Hoechest33258與核苷酸AT結(jié)合;Chromomycin A3與GC相結(jié)合。從而在雙參數(shù)坐標(biāo)上根據(jù)染色體ATCG含量的不同識別各種染色體。平時進(jìn)行的染色體分析耗時且需要操作者極具經(jīng)驗,而用流式細(xì)胞儀時可快速地識別出異常染色體,如加配分選系統(tǒng)可將這些異常染色體分選出來作進(jìn)一步分析。

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流式細(xì)胞儀 流式細(xì)胞儀的應(yīng)用_流式細(xì)胞儀

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