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流式細(xì)胞儀日常使用規(guī)范 流式細(xì)胞儀操作規(guī)程

時間:2020-05-16    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
  【中國儀器網(wǎng) 使用手冊】流式細(xì)胞儀是一種對細(xì)胞進行自動分析和分選的裝置,依據(jù)參數(shù)測量原理工作。流式細(xì)胞儀主要由流動室和液流系統(tǒng)、激光源和光學(xué)系統(tǒng)、光電管和檢測系統(tǒng)、計算機和分析系統(tǒng)4部分組成,目前在生物醫(yī)療領(lǐng)域有廣泛運用,主要用于分析細(xì)胞表面標(biāo)志、分析細(xì)胞受體、分析腫瘤細(xì)胞的DNA、RNA含量、分析免疫細(xì)胞的功能。
 
  由于流式細(xì)胞儀比較昂貴且精密,為了確保不因為使用不當(dāng)就很容易使液流部位出問題。
 
  1.一般來說,需要使用的所用溶液都應(yīng)該進行過濾處理,此外樣本在上機前也要過濾,這么做事為了避免設(shè)備長時間使用時出現(xiàn)沉淀物而堵塞噴嘴;
 
  2. 開機后檢測樣本前,要用prime機檢查噴嘴的暢通狀況;
 
  3. 每日關(guān)機前移開托臂,用3~4管10%次氯酸鈉反復(fù)沖洗,不要讓有堵塞的噴嘴帶病運行,使用經(jīng)過濾處理的H2O或PBS沖洗后才關(guān)機;
 
  4. 每天要倒空廢液瓶內(nèi)的廢液,再注入少量的次氯酸鈉或消佳凈溶液,以防細(xì)菌生長;
 
  5. 鞘液瓶內(nèi)的液體加至4/5容量并放置一夜,防止新加入的液體有氣泡產(chǎn)生而影響檢測結(jié)果。

流式細(xì)胞儀的發(fā)展歷史

  1、1934年,Moldavan使懸浮的紅細(xì)胞從一個毛細(xì)玻璃管中流過,每個通過的細(xì)胞可被一個光電裝置記錄下來。這就是流式細(xì)胞儀的雛形?! ?、1965年,Kamentsky用紫外吸收和可見光散射兩個參數(shù)同時測量未染色細(xì)胞,給出細(xì)胞中核酸的含量和細(xì)胞大小。奠定了多參數(shù)流式細(xì)胞測量的基礎(chǔ)?! ?、1967年,Van Dilla和Los Alamos采用了層流流動室和氬激光器,開發(fā)出了液流束、照明光軸、檢測系統(tǒng)三者相互垂直的流式細(xì)胞儀。這成為目前各種流式細(xì)胞儀的基礎(chǔ)?! ?、1969年,F(xiàn)ulwyler利用靜電墨水噴射液滴偏轉(zhuǎn)技術(shù),建立了流式細(xì)胞分選術(shù)。Ehrlich和Wheeless利用飛點掃描技術(shù)和縫掃描技術(shù)使零分辨率的流式細(xì)胞儀變成了低分辨率的流式細(xì)胞儀。  5、20世紀(jì)70年代,隨著Kohler和Milstein成功提出了單克隆抗體技術(shù)和熒光標(biāo)記技術(shù),為特異研究和分析細(xì)胞奠定了良好的基礎(chǔ)?! ?、1973年,美國BD公司和美國斯坦福大學(xué)合作,研制開發(fā)并生產(chǎn)了世界上第一臺商用流式細(xì)胞儀FACS I?! ?、20世紀(jì)80年代,流式細(xì)胞儀的數(shù)據(jù)采集、存儲、顯示、分析日趨完善,隨著樣品制備方法的增加,新的熒光染料和細(xì)胞標(biāo)記物的出現(xiàn),使流式細(xì)胞儀的應(yīng)用范圍逐漸擴大。  8、20世紀(jì)90年代,與之配套的標(biāo)本制備儀和自動進樣器的問世,以及適合臨床應(yīng)用的單克隆抗體的增加,使流式細(xì)胞儀逐漸從科研單位進入醫(yī)院的中心實驗室和檢驗科,成為現(xiàn)代化的臨床檢驗儀器的一部分。

標(biāo)簽: 流式細(xì)胞儀
流式細(xì)胞儀 流式細(xì)胞儀的發(fā)展歷史_流式細(xì)胞儀

流式細(xì)胞儀的十大應(yīng)用

  1、DNA倍體分析  DNA分析是流式細(xì)胞儀最初且是現(xiàn)在應(yīng)用廣泛檢測項目。由于惡性細(xì)胞DNA含量通常與正常細(xì)胞不同,存在異倍體細(xì)胞,所以現(xiàn)有很研究評價異倍體細(xì)胞與腫瘤惡性度及其預(yù)后的關(guān)系。DNA含量檢測還可提供細(xì)胞周期方面的信息,這在細(xì)胞生物學(xué)中運用很廣泛。特別地,它可表示出細(xì)胞毒性藥物對細(xì)胞作用過程。這些DNA檢測還可與細(xì)胞表面標(biāo)志物標(biāo)記同時進行,這樣在細(xì)胞混合培養(yǎng)中,可通常追蹤表達特異標(biāo)志物的細(xì)胞顯示其生長周期情況。所有方法都是基于染料能與核酸起特異的化學(xué)反應(yīng)并發(fā)射出熒光,常用的染料為PI,DAPI?! ≡谠擃I(lǐng)域Partec公司的 CyFlow PA是一枝獨秀?! ?、細(xì)胞生存能力實驗  使用Heochest 33342染料與DNA特異性結(jié)合,后因細(xì)胞活力不同染料的結(jié)合程度也各異,故可評估細(xì)胞的活性度。  3、計數(shù)外周血中檢測網(wǎng)織紅細(xì)胞  使用TO染料能夠特異性地與RNA結(jié)合,結(jié)合系數(shù)高達3000,故具有很好的性價比?! ?、外周血、骨髓采集物中CD34陽性干細(xì)胞計數(shù),臨床上用于骨髓移植前干細(xì)胞數(shù)理的測定。使用標(biāo)準(zhǔn)ISHAG方案,需要DNA或其他核染料占用FITC通道,PE標(biāo)記CD34抗體,PE-CY5標(biāo)記CD45抗體。  5、交叉淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞毒實驗  檢測識別供體血清中免疫球蛋白與受體粒細(xì)胞之間是否存在反應(yīng)有著重要臨床意義,因為這種反應(yīng)會導(dǎo)致移植后發(fā)熱、移植后肺損傷及免疫性粒細(xì)胞缺乏癥。流式細(xì)胞儀可檢測全血樣本與血清孵育后粒細(xì)胞上結(jié)合的人免疫球蛋白。FITC標(biāo)記人免疫球蛋白抗體、PE標(biāo)記粒細(xì)胞表面標(biāo)志物、PE-CY5標(biāo)記HLA抗體?! ?、血小板自身抗體檢測  血小板自身抗體識別人血小板抗原,會引起各種臨床相關(guān)癥狀,如新生兒自免性血小板減少癥、輸血后紫癜、難治性血小板減少。流式細(xì)胞可快速準(zhǔn)確地檢測血小板自身抗體。FITC標(biāo)記抗人免疫球蛋白抗體、PE標(biāo)記識別血小板抗體?! ?、移植交叉配型  原細(xì)胞毒實驗,主要用于避免移植物超急性排拆反應(yīng)。流式細(xì)胞儀用于監(jiān)測T或B細(xì)胞是否受到受體血清中免疫球蛋白攻擊,作為HLA配型前的預(yù)實驗。流式細(xì)胞儀因其高精確性已成為該領(lǐng)域內(nèi)的金標(biāo)準(zhǔn)。FITC標(biāo)記抗人免疫球蛋白抗體、PE標(biāo)記識別T細(xì)胞CD3或B細(xì)胞CD29抗體?! ?、檢測細(xì)胞經(jīng)抗原或細(xì)胞有絲分裂刺激后活化效應(yīng)淋巴細(xì)胞早期活化指標(biāo)CD69可用來檢測免疫治療效果。流式細(xì)胞使用三色分析可監(jiān)測淋巴細(xì)胞各亞群活化情況:FITC標(biāo)記的CD3抗體、PE標(biāo)記的CD8抗體、PE-CY5標(biāo)記的CD69抗體?! ?、細(xì)胞增殖狀態(tài)檢測  核增殖抗PCNA、Ki67、BrdUrd用于衡量細(xì)胞增殖分裂狀況,在評估腫瘤預(yù)后有重要意義。為些標(biāo)志物的檢測一般同細(xì)胞表面標(biāo)志物同時檢測。FITC標(biāo)記PCNA或Ki67或BrdUrd,PE或(并)PE-CY5標(biāo)記細(xì)胞表面標(biāo)志物?! ?0、染色體分析  流式細(xì)胞儀染色分析運用兩種特異性染料:Hoechest33258與核苷酸AT結(jié)合;Chromomycin A3與GC相結(jié)合。從而在雙參數(shù)坐標(biāo)上根據(jù)染色體ATCG含量的不同識別各種染色體。平時進行的染色體分析耗時且需要操作者極具經(jīng)驗,而用流式細(xì)胞儀時可快速地識別出異常染色體,如加配分選系統(tǒng)可將這些異常染色體分選出來作進一步分析。

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流式細(xì)胞儀 流式細(xì)胞儀的十大應(yīng)用_流式細(xì)胞儀

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