流動(dòng)相相當(dāng)于液相的血液,可以想象對(duì)液相的重要程度。那么流動(dòng)相都需要注意什么呢? 01、過濾溶劑 溶劑在使用前一定要用0.5μm的過濾器過濾,如果使用固體化學(xué)試劑(緩沖鹽)配制流動(dòng)相,過濾特別重要,不能讓固體微粒污染泵,阻塞進(jìn)樣器和柱頭過濾片。本實(shí)驗(yàn)室有水溶性和脂溶性兩種過濾膜供選擇(反光面朝上),過濾水溶性流動(dòng)相時(shí)(如甲醇/水),先用1~2mL甲醇潤(rùn)濕過濾膜,有助于快速抽濾?! ?2、保持儲(chǔ)液瓶的清潔 用普通溶劑瓶作流動(dòng)相儲(chǔ)液器應(yīng)不定期廢棄瓶子,最后一次應(yīng)用HPLC級(jí)的水或溶劑清洗,不能在清洗過程中留下污跡?! ?3、保證溶劑的質(zhì)量 一定要用HPLC級(jí)的溶劑,水也應(yīng)達(dá)到HPLC級(jí),同樣也要使用高純度的緩沖鹽?! ∫恍┮蛄鲃?dòng)相引起的常見問題 01、流動(dòng)相脫氣不充分 流動(dòng)相受熱,或者流動(dòng)相不同組分混合時(shí)會(huì)有氣體產(chǎn)生,氣泡進(jìn)入泵內(nèi)引起壓力波動(dòng),增加噪音,色譜圖上出現(xiàn)毛刺??稍囉孟铝蟹椒ń鉀Q問題:流動(dòng)相再脫氣;采用更有效的脫氣方法或兩種方法配合使用;改系統(tǒng)內(nèi)混合為系統(tǒng)外預(yù)混合?! ?2、流動(dòng)相供給不暢 流動(dòng)相用完,管道中吸入氣體引起泵壓力不穩(wěn)。應(yīng)經(jīng)常觀察儲(chǔ)液器中流動(dòng)相的量,加足流動(dòng)相保證所有的樣品分析完畢。輸液管道上裝沉子沉至瓶底,儲(chǔ)液器蓋上留一小孔正好夾住進(jìn)液管,使其不能上下移動(dòng)。 過濾器阻塞引起管道和泵腔空化,壓力不穩(wěn)。過濾器被微粒所阻塞或長(zhǎng)霉,去掉過濾器后如果系統(tǒng)運(yùn)轉(zhuǎn)正常,說明已找出問題,換上新的過濾器則可。有時(shí)候換上新的過濾器仍然不暢,那就需要查查流動(dòng)相的制備過程,或者換大孔徑的過濾器。不管如何,流動(dòng)相都需要重新過濾?! ×魉龠^高、阻力大,造成空化現(xiàn)象,這是由于過濾器孔徑、管道內(nèi)徑、流速和溶劑黏度等引起的。如果流速大于10mL/min,常會(huì)出現(xiàn)這種現(xiàn)象?! ∈褂孟铝蟹椒ń鉀Q: (1)使用低流速; (2)換大孔徑的過濾器; (3)增加進(jìn)液管道內(nèi)徑; (4)抬高或加壓儲(chǔ)液器; (5)不用過濾器,但流動(dòng)相一定要先過濾; (6)儲(chǔ)液器蓋子太緊,在儲(chǔ)液器內(nèi)形成真空,打出的流動(dòng)相不連續(xù)。應(yīng)松開蓋子或留有1mm的縫隙; (7)進(jìn)液管道阻塞或彎曲使泵抽不到液,注意調(diào)整進(jìn)液管道或更換新的。其它問題包括滲漏或接頭松動(dòng)、泵部件損壞等,都能引起供液不正常?! ?3、流動(dòng)相和儲(chǔ)液器被污染 由于污染,噪音越來越大,檢測(cè)器基線上升。污染物可能被泵以穩(wěn)定的濃度打入系統(tǒng),而再以穩(wěn)定的濃度流出來,所以在色譜圖中不出多余的峰。用梯度洗脫時(shí)弱流動(dòng)相可以使污染物聚在柱頂,流動(dòng)相強(qiáng)度增加后污染物可能被洗脫出來一個(gè)大的偽峰。有時(shí)基線噪音突然增大或突然提高,都是因?yàn)榉磸?fù)加進(jìn)新的流動(dòng)相或系統(tǒng)用得太久(通宵)所造成的。新加進(jìn)的流動(dòng)相有污染物或者流動(dòng)相長(zhǎng)霉,繁殖了細(xì)菌?! ∨K的儲(chǔ)液器會(huì)污染清潔的流動(dòng)相。每種流動(dòng)相備有專用的儲(chǔ)液器,或者定期報(bào)廢儲(chǔ)液器?! ×鲃?dòng)相污染來自這幾個(gè)方面 04、試劑質(zhì)量不高,玻璃器皿不合格; 微生物的影響; 配制流動(dòng)相時(shí)操作不當(dāng)?shù)? 因此要求高純度化學(xué)試劑和HPLC級(jí)溶劑; 玻璃器皿按規(guī)定清洗干凈; 為防止微生物生長(zhǎng),每天要用甲醇清洗系統(tǒng); 懷疑系統(tǒng)內(nèi)生長(zhǎng)了微生物,可用稀硝酸沖洗即可(注意不要損壞柱和管道系統(tǒng)); 真空脫氣時(shí)防止泵油帶入流動(dòng)相; 用清潔的惰性塞子、攪棒、過濾器和玻璃器皿配制流動(dòng)相; 已經(jīng)污染的流動(dòng)相一定要廢棄掉。
對(duì)液相色譜儀色譜工作站硬件的要求主要有以下五點(diǎn):
1. 對(duì)工作站可靠性的要求。目前很多國(guó)產(chǎn)色譜工作站硬件在電路設(shè)計(jì)和元器件選用上存在缺陷,造成硬件的穩(wěn)定性差。有部分硬件在保修期內(nèi)反復(fù)出問題,極大的損壞了品牌形象。
2. 對(duì)量程范圍的要求。在制備色譜儀和離子色譜儀等領(lǐng)域,量程范圍通常會(huì)超過1V,達(dá)到5V或者更高。這就要求硬件具有拓展性,稍作更改既能滿足上述要求。
3. 對(duì)采樣頻率和最小分辨率的要求。毛細(xì)管電泳色譜,超高效液相色譜儀等快速分析設(shè)備的發(fā)展;痕量分析需求的增多。
4. 對(duì)兼容性的要求。當(dāng)前有些工作站硬件接上電腦后,出現(xiàn)系統(tǒng)死機(jī),工作站死機(jī),系統(tǒng)重啟,鼠標(biāo)亂跳等現(xiàn)象。這些現(xiàn)象需要從開發(fā)時(shí),在源頭上規(guī)避。
5. 對(duì)通訊接口的要求。為了跟上計(jì)算機(jī)主機(jī)的變化,目前國(guó)內(nèi)各廠家都把USB通訊作為一大亮點(diǎn)。然而USB通訊本身存在信號(hào)易中斷的缺陷,目前還沒有哪個(gè)廠家真正刻服了這個(gè)缺陷,所以建議在USB通訊之外,提供串行口的選擇。當(dāng)然,選用網(wǎng)口,順應(yīng)網(wǎng)絡(luò)化數(shù)據(jù)采集和儀器控制的需求是當(dāng)前可以的選擇,這一趨勢(shì)也會(huì)隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展得以快速進(jìn)步。