液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲(封頭)與柱填料等組成。
柱管:
多用不銹鋼制成,若果使用時柱壓不高于70 kg/cm2時,也可采用厚壁玻璃或石英管,管內壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填。
壓帽:
即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽,中部有小孔,多為聚四氟乙烯制成,用于固定篩板。
密封環(huán):
位于接頭螺旋環(huán)內壁的彈性環(huán),多為聚四氟乙烯制成,用于色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。
色譜柱使用前注意事項。
色譜柱在使用前,最hao進行柱的性能測試,并將結果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。
在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是最jia條件),只有這樣,測得的結果才有可比性。
但要注意:
柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
1、樣品的前處理
a、最hao使用流動相溶解樣品。
b、使用預處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質。
c、使用0.45μm或0.22?m的過濾膜過濾除去微粒雜質。
2、流動相的配制
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
b、流動相與樣品不產(chǎn)生化學反應
c、流動相的黏度要盡量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
d、流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,最hao使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e、流動相沸點不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導致實驗無法進行。
f、在流動相配制好后,一定要進行脫氣。
除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動相流速的選擇
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。
對于一根特定的色譜柱,要追求最jia柱效,最hao使用最jia流速。
對內徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
當選用最jia流速時,分析時間可能延長。
可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時,可適當增加甲醇或乙腈的含量)。
注意:
a.含水流動相最hao在實驗前配制,尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。最hao加入die氮化鈉,防止細菌生長。
b.流動相要求使用0.45 μm或0.22m濾膜過濾,除去微粒雜質。
c.使用HPLC級溶劑配制流動相,使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命,提高柱性能。
1、首先檢查高效液相色譜儀的噪聲,如果噪聲大,會引起基線變粗,需要采取措施降低噪聲;如果基線粗是因為噪聲大引起,要解決這個問題就要看你的檢測器和工作站的指標以及壓力是否平穩(wěn),然后可以通過脫氣等一系列的方法降低噪聲。
2、調節(jié)你的電腦分辨率,如果分辨率太低,調節(jié)一下就會見效。
3、還可能是采樣頻率高。將檢測器的狹縫寬度設置得小一點,可能很快就能解決問題。
4、如果是工作站得坐標太大,調節(jié)一下,將坐標設置小點就可能解決問題。
5、有可能是光源用久了,能量不足引起,這樣的話應該調換光源。
6、電源的紋波太大,也會引起基線變粗,這個問題很多科技工作者不大注意沒,所以還應該仔細檢查光源的電路。
7、光路通道有污染或流動池污染。如果這樣,就要清洗光路通道中的光學組件,或者清洗流動池。
8、可流動相中有氣泡,應認真排氣。
9、如果確定不是色譜系統(tǒng)的原因,就可能是電源接地的問題,將檢測器外殼、接收裝置外殼和電腦的外殼等用電線連起來,認真的接地。
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