在食品分析中，無論是殘留分析還是成分分析，HPLC 也已成為不可或缺的。流動相脫氣是HPLC 系統(tǒng)能得到可靠數(shù)據(jù)的一個很有效的措施。下面分析一下，高效液相色譜脫氣的必要性，并總結(jié)歸納了脫氣常用的方法。
一、脫氣的必要性
流動相脫氣是HPLC 系統(tǒng)能得到可靠數(shù)據(jù)的一個很有效的措施。HPLC 泵在輸送液體時要產(chǎn)生很大的力量，由于氣體的壓縮比與液體相比大的多，因而當(dāng)氣泡存在時，我們發(fā)現(xiàn)瞬間的流速降低和系統(tǒng)壓力下降。如果這個氣泡足夠大，液相泵將不能輸送任何溶劑，而且如果壓力低于預(yù)先設(shè)定的壓力低限，泵將停止工作。當(dāng)一個氣泡通過輸液泵時，由于系統(tǒng)壓力大，氣泡通常會溶解在流動相溶液中，隨流動相通過柱子。但是到達檢測器流通池時系統(tǒng)壓力又恢復(fù)到了大氣壓，因而氣泡可能在檢測器流通池中又顯現(xiàn)，在色譜圖上會出現(xiàn)不規(guī)律的毛刺。
二、脫氣方法
1、吹氦脫氣法。
利用氦氣在液體中溶解度比空氣低的特性，在0.1MPa 壓力下，以約60 mL/min 流速通入流動相儲液容器中10～15min，可以很有效地從流動相中排除溶解的空氣，能排除接近80%的氧氣。采用一個高效分布式噴射流裝置，一體積的氦氣可從流動相中將等體積的幾乎全部氣體排除。這意味著1L 氦氣通過1L 流動相就可完成排氣這個工作。這種脫氣方法雖然好，但氦氣價格較高，很少使用。
2、加熱回流法。
此法的脫氣效果較好。在操作時要注意冷凝塔的冷卻效率，否則溶劑會丟失，混合流動相的比例會有變化。
3、抽真空脫氣法。
此法可使用真空泵，降壓至0.05～0.07MPa ，即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會使混合溶劑組成發(fā)生變化，從而影響到實驗的重現(xiàn)性，因此多用于單溶劑體系的簡單分析。
4、超聲波脫氣法。
將欲脫氣的流動相置于超聲波清洗機中，用超聲波震蕩10～20min。此法的脫氣效果最差。
在液相色譜分離系統(tǒng)中，色譜填料選擇的正確與否會直接影響到專業(yè)的液相色譜柱分離物質(zhì)效果的好壞。由于液相色譜填料具有相當(dāng)寬的選擇范圍，所以我們在購買液相色譜柱之前有必要對不同液相色譜填料進行一個簡單的認識和了解。
第一、正相色譜硅膠基質(zhì)填料。
正相色譜柱的固定相是由硅膠和其他具有極性官能團組成的鍵合相填料。其物質(zhì)分離特點是極性較弱組合最先被色譜柱沖洗出來。而且正相色譜所使用的流動相其極性要低于固定相，流動相通常使用正乙烷和二氯甲烷等。
第二、反相色譜硅膠基質(zhì)填料。
反向色譜柱的填料是以硅膠材料為主要物質(zhì)，并與極性相對較弱的官能團組成的鍵合相。其物質(zhì)分離特點是極性較強組合最先被色譜柱沖洗出來，而極性弱的組分則會更強的保留在柱子上。反向色譜的流動相的極性相對較強，常配制有機緩沖液作為流動相。目前較為常用的反相色譜填料有C4（B）、C8（MOS）以及C18（ODS）等。
第三、聚合物填料。
這種聚合物的填料一般是由聚甲基丙酸酯或者聚苯乙烯-二乙烯基苯組成。其特點是這種色譜柱的酸堿度適用范圍相對較廣，且疏水性很強，但它的柱效相對于硅膠基質(zhì)的填料要低一些。一般將這種大孔的基質(zhì)填料用于蛋白質(zhì)的分離。
第四、其他無機填料。
如石墨化碳對于酸堿度和溫度沒用嚴格的限制范圍，一般可對一些幾何導(dǎo)構(gòu)體進行分離。此外還有氧化鋁以及氧化鋯等無機填料的應(yīng)用。
總而言之，如果我們能夠全面系統(tǒng)的了解一下液相色譜柱填料的分類及特點，那么我們在選擇購買一流的色譜柱時就可以在一個相對較小的范圍內(nèi)順利找到自己所需要的產(chǎn)品。這樣我們就可以在節(jié)省選擇購買時間的同時，也能快速買到令自己滿意的色譜柱。
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