分光光度計(jì)所采用的分光光度法在定量分析領(lǐng)域中的應(yīng)用已有數(shù)十年的歷史,至今仍是實(shí)驗(yàn)室中常用的分析方法之一。隨著現(xiàn)代科學(xué)儀器的不斷發(fā)展,在傳統(tǒng)的追求準(zhǔn)確、快速、可靠的同時(shí),小型化、智能化、在線化、網(wǎng)絡(luò)化成為了現(xiàn)代可見(jiàn)分光光度計(jì)新的增長(zhǎng)點(diǎn)。
結(jié)構(gòu)組成
分光光度計(jì)的基本組成和大多數(shù)分光光度計(jì)一樣,都是由光源、單色器、比色池、光電檢測(cè)器和放大器幾部分組成。
1.光源
分光光度計(jì)的可見(jiàn)區(qū)的光源仍是采用鹵素鎢燈和氘燈。鹵素鎢燈的工作波長(zhǎng)范圍為:320～2500nm,氘燈的工作波長(zhǎng)范圍為180～375nm。兩光源有儀器上的一個(gè)燈選擇反射鏡自動(dòng)進(jìn)行選擇和光源切換。
1.2單色器(分光系統(tǒng))
單色器是分光光度計(jì)的重要部分,比濾光片選擇波長(zhǎng)能更有效地提供帶寬窄的單色光。是采用先進(jìn)的光柵單色器,由入射狹縫、出口狹縫、色散元件、準(zhǔn)直鏡等光學(xué)元件組成。入射狹縫是用來(lái)調(diào)節(jié)入射單色光的純度和強(qiáng)度，也直接影響分辨率。而準(zhǔn)直鏡(反射凹面鏡)的作用一是將入射光束變?yōu)槠叫泄馐笤龠M(jìn)入色散元件，二是把來(lái)自色散元件的平行光束聚焦于出口狹縫上,形成光譜像。出口狹縫是單色光的出口，它只讓光譜帶中所需要波長(zhǎng)的光從狹縫中透出，而將其他波長(zhǎng)的光擋住,不讓其通過(guò)。
色散元件是單色器中的核心元件，起著將復(fù)合光分解為單色光的作用。分光光度計(jì)的色散元件是凹面反射式全息光柵,它本身就起著分解復(fù)合光和準(zhǔn)直鏡(聚焦)的作用,而且全息光柵具有雜散光小、不產(chǎn)生偽線和分辨率高的優(yōu)點(diǎn)。
1.3比色池
分光光度計(jì)配有多種規(guī)格樣品池架和比色杯。池架有標(biāo)準(zhǔn)池架、七位池架、50霯微量池架和多形態(tài)樣品池架。比色杯有常量(2～4mL)、半微量(0.5～1mL)和微量(50～100霯),使用方便。另外還配有樣品架卡套,分為特為酶動(dòng)力學(xué)設(shè)計(jì)的半導(dǎo)體溫控池:溫度范圍15～50℃,和流動(dòng)池。
正確使用分光光度計(jì)
分光光度計(jì)操作簡(jiǎn)便。
打開(kāi)儀器電源開(kāi)關(guān)，儀器應(yīng)順利通過(guò)自檢，然后預(yù)熱10分鐘左右，可以進(jìn)行測(cè)定。讀數(shù)時(shí)應(yīng)記錄最先顯示的數(shù)值，不要讓樣品連續(xù)光照時(shí)間太長(zhǎng)(動(dòng)力學(xué)測(cè)定除外)，特別是在紫外區(qū)域測(cè)定時(shí)更要快速，因?yàn)殡S著光的連續(xù)照射讀數(shù)會(huì)下降，變得不穩(wěn)定。而應(yīng)用顯色劑顯色后會(huì)使讀數(shù)穩(wěn)定，給測(cè)定帶來(lái)方便，同時(shí)還會(huì)使物質(zhì)中許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來(lái)的幾萬(wàn)提高到數(shù)十萬(wàn)，明顯提高了檢測(cè)靈敏度。
作為一種分子吸收光譜儀,廣泛應(yīng)用于化學(xué)研究、生物醫(yī)藥、環(huán)境科學(xué)和食品分析等研究領(lǐng)域。它具有分析精度高、應(yīng)用范圍廣、分析簡(jiǎn)便快速和儀器靈敏度較高的優(yōu)點(diǎn),是目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室常用的定量分析儀器。
1、工作環(huán)境檢查：
1）放置要求：儀器應(yīng)平穩(wěn)的擺放在水平固定的桌面上。(因?yàn)榉止夤舛扔?jì)為精密光學(xué)儀器,在運(yùn)行的過(guò)程中如果桌面不穩(wěn)，會(huì)影響其工作狀態(tài),且儀器處在工作狀態(tài)時(shí)，燈絲處于高溫狀態(tài),此時(shí)如果有劇烈的震動(dòng)會(huì)導(dǎo)致燈絲折斷。)
2）溫度要求：工作環(huán)境的溫度在5-35度之間。(儀器在工作狀態(tài)時(shí)內(nèi)部較熱需要用儀器自身的散熱風(fēng)扇與外界空氣進(jìn)行熱交換散熱,如果外界溫度過(guò)高,會(huì)導(dǎo)致儀器內(nèi)部溫度過(guò)高,從而加速儀器電器件與燈的老化速度,從而影響儀器的使用壽命。)
3）濕度要求：工作環(huán)境的相對(duì)濕度不超過(guò)85%。（儀器內(nèi)部有很多電器元件與光學(xué)件，在濕度太高的情況下，電器件容易老化或燒壞，光學(xué)件表面的鍍鋁膜也容易發(fā)霉。）
4）空氣狀況：空氣中不應(yīng)有足以引起腐蝕的有害氣體和過(guò)多的塵土存在。
2、樣品室檢查：
1）在開(kāi)機(jī)之前，先要檢查樣品室中是否有比色皿或其他物品，因?yàn)閮x器在開(kāi)機(jī)后要進(jìn)行一系列的功能自檢，如果有物品放在樣品室中會(huì)導(dǎo)致自檢出錯(cuò)。
2）每次使用后應(yīng)檢查樣品室是否積存有溢出溶液，須經(jīng)常擦拭樣品室，以防止廢液對(duì)部件或光路系統(tǒng)的腐蝕。
3）在測(cè)試完成后，請(qǐng)及時(shí)將樣品從樣品室中取出，否則，液體揮發(fā)會(huì)導(dǎo)致鏡片發(fā)霉。對(duì)易揮發(fā)和腐蝕性的液體，尤其要注意！如果樣品室中有漏液，請(qǐng)及時(shí)擦拭干凈，否則會(huì)引起樣品室內(nèi)的部件腐蝕和螺釘生銹。
3、儀器的表面清潔：
儀器外殼表面經(jīng)過(guò)噴漆工藝處理過(guò)，如果不小心將溶液漏灑在外殼上，請(qǐng)立即用濕毛巾擦拭干凈，杜絕使用有機(jī)溶液擦拭。如果長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)，請(qǐng)注意及時(shí)清理儀器表面的灰塵。
4、比色皿清洗：
在每次測(cè)量結(jié)束或溶液更換時(shí)，您需要對(duì)比色皿進(jìn)行及時(shí)清洗，然后放在低濃度酸性溶液里浸泡，浸泡后用蒸餾水沖洗比色皿的內(nèi)外壁，否則比色皿壁上的殘留溶液會(huì)引起測(cè)量誤差。
5、電源檢查：
1）插電源插座時(shí)，請(qǐng)檢查當(dāng)前電壓是否與儀器標(biāo)識(shí)的電壓一致。
2）因?yàn)楦鱾€(gè)地區(qū)電網(wǎng)的質(zhì)量差異很大，所以為了使儀器運(yùn)行得更穩(wěn)定和更可靠，建議給儀器外配一個(gè)穩(wěn)壓器。
3）儀器不用時(shí)請(qǐng)關(guān)機(jī)，并拔掉電源插頭，以防止實(shí)驗(yàn)室的電源地線不好，而導(dǎo)致在雷雨天氣時(shí)損壞儀器。
6、提示：
為縮短自檢時(shí)間，儀器在開(kāi)機(jī)時(shí)所進(jìn)行的自檢只是對(duì)一些常規(guī)的項(xiàng)目進(jìn)行檢查。而儀器在運(yùn)輸、搬運(yùn)與使用一段時(shí)間后（一般一個(gè)月）會(huì)導(dǎo)致結(jié)構(gòu)件累計(jì)誤差的產(chǎn)生，所以我們建議用戶(hù)在出現(xiàn)上述情況或感覺(jué)儀器測(cè)試數(shù)據(jù)與經(jīng)驗(yàn)值相差較大時(shí)，應(yīng)對(duì)儀器進(jìn)行一次波長(zhǎng)校正和暗電流校正。（具體操作方法見(jiàn)本手冊(cè)中的“系統(tǒng)應(yīng)用”一節(jié)）
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