液相色譜儀一直以來就備受廣大實(shí)驗(yàn)室愛好者的寵愛，操作簡(jiǎn)單、、結(jié)果。今天我們就來具體介紹一下液相色譜儀常見的故障的解決方法，希望可以幫助用戶更好的應(yīng)用產(chǎn)品，希望可以幫助用戶更好的應(yīng)用產(chǎn)品。
(一)液相色譜儀保留時(shí)間變化
1.柱溫變化柱恒溫，必要時(shí)需配置恒溫箱
2.等度與梯度間未能充分平衡至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱
3.緩沖液容量不夠用〉25mmol/l的緩沖液
4.柱污染每天沖洗柱
5.柱內(nèi)條件變化穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相
6.柱快達(dá)到壽命采用保護(hù)柱
(二)液相色譜儀保留時(shí)間縮短
1.流速增加檢查泵,重新設(shè)定流速
2.樣品超載降低樣品量
3.鍵合相流失流動(dòng)相ph值保持在3~7.5檢查柱的方向
4.流動(dòng)相組成變化防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀
5.溫度增加柱恒溫
(三)液相色譜儀保留時(shí)間延長(zhǎng)
1.流速下降管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡
2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱
3.鍵合相流失同前(二)3
4.流動(dòng)相組成變化同前(二)4
5.溫度降低同前(二)5
(四)液相色譜儀出現(xiàn)肩峰或分叉
1.樣品體積過大用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于*峰的15%
2.樣品溶劑過強(qiáng)采用較弱的樣品溶劑
3.柱塌陷或形成短路通道更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品
5.進(jìn)樣器損壞更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子
(五)液相色譜儀鬼峰
1.進(jìn)樣閥殘余峰每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗
2.樣品中未知物處理樣品
3.柱未平衡重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑(尤其是離子對(duì)色譜)
4.三氟乙酸(tfa)氧化(肽譜)每天新配,用抗氧化劑
5.水污染(反相)通過變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用hplc級(jí)的水
(六)液相色譜儀基線噪聲
1.氣泡(尖銳峰)流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓
2.污染(隨機(jī)噪聲)清洗柱,凈化樣品,用hplc級(jí)試劑
3.檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲更換氘燈
4.電干擾(偶然噪聲)采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)
5.檢測(cè)器中有氣泡流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓
(七)液相色譜儀峰拖尾
1.柱超載降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相
2.峰干擾清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相
3.硅羥基作用加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相ph值,鈍化樣品
4.同前(四)4
5.同前(四)3
6.死體積或柱外體積過大連接點(diǎn)降至zui低,對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管
7.柱效下降用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱
(八)液相色譜儀峰展寬
1.進(jìn)樣體積過大同
2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散
3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)
4.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過大設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣*峰半寬的10%
5.流動(dòng)相粘度過高增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相
6.檢測(cè)池體積過大用小體積池,卸下熱交換器
7.保留時(shí)間過長(zhǎng)等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫
8.柱外體積過大將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至zui小
9.樣品過載進(jìn)小濃度小體積樣品
高效液相色譜儀可以完成二元高壓梯度洗脫，也可以拓展為制備系統(tǒng)，采用高壓混合器連接兩個(gè)高壓恒流泵，利用RS232通訊，即可實(shí)現(xiàn)梯度分析；
便于用戶自由選擇與搭配，混合器材主要由不銹鋼、生物惰性PEEK等構(gòu)成，用途廣泛；
可廣泛應(yīng)用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗(yàn)、食品檢測(cè)、化工分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)等眾多分析領(lǐng)域。
高效液相色譜儀分離原理：液-液分配(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學(xué)鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流動(dòng)相和固定相都是液體。
流動(dòng)相與固定相之間應(yīng)互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個(gè)明顯的分界面。
當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。達(dá)到平衡時(shí)，高效液相色譜儀報(bào)價(jià)，服從于高效液相色譜計(jì)算公式；
6種定量計(jì)算方法：歸一法、修正歸一法、帶比例因子的修正歸一法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法，高效液相色譜儀適用范圍，以及指數(shù)計(jì)算法。
高效液相色譜儀特點(diǎn)：
1、梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制，編輯、存貯60個(gè)梯度方法，運(yùn)行復(fù)雜的梯度程序；
2、泵形式：串聯(lián)雙柱塞 浮動(dòng)式密封圈；泵頭自沖洗功能，泵無須手動(dòng)排空即可輸液“自吸式單向閥”技術(shù)，可延長(zhǎng)密封圈使用壽命；
3、光路系統(tǒng)采用精密定位結(jié)構(gòu)和獨(dú)特的散熱技術(shù)，高效的光學(xué)系統(tǒng)和數(shù)字過濾；
4、程序化的溶劑類和壓縮因子，可自動(dòng)補(bǔ)償；完整的預(yù)清洗功能，更于快速溶劑更換；
5、波長(zhǎng)調(diào)節(jié)功能：既可由鍵盤面板控制也可由程序軟件設(shè)定，全封閉集成型光電檢測(cè)元件，無需任何機(jī)械部分調(diào)整即可選擇或改變波長(zhǎng)；
6、光源運(yùn)行時(shí)間在線監(jiān)測(cè)并顯示，方便用戶確定光源壽命；
7、三條流量校正曲線以及特有的多點(diǎn)參數(shù)校正，保障了極高的流量準(zhǔn)確性；
8、梯度：高壓2-3元；梯度方式：高壓，梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制，可通過PC機(jī)及泵控制；
9、實(shí)時(shí)顯示樣品池和參比池能量，方便判斷光源和流通池狀態(tài)；
10、紫外檢測(cè)器具有自動(dòng)波長(zhǎng)定位調(diào)整，自動(dòng)調(diào)零，多量程輸出選擇；
11、智能化高，可實(shí)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)化平臺(tái)監(jiān)控，提高了你的QC效益；
12、自動(dòng)化，讓你從繁鎖的分析操作中解放出更多的時(shí)間。
色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。
①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩（如前所述）。
②應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/p>
?、垡话阏f來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
?、苓x擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
?、荼苊鈱⒒|(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
?、藿?jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml。
⑦保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對(duì)禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過晚上或更長(zhǎng)時(shí)間。
?、嗌V柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
在后兩種情況發(fā)生時(shí)，小心擰開柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當(dāng)溶劑濕潤(rùn)的固定相（與柱內(nèi)相同）填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復(fù)到新柱的水平。
柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱（5~30mm），可以起到保護(hù)、延長(zhǎng)柱壽命的作用。采用保護(hù)柱會(huì)損失一定的柱效，這是值得的。
通常色譜柱壽命在正確使用時(shí)可達(dá)2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時(shí)間后，可能有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙?。新的色譜柱在使用一段時(shí)間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時(shí)也可補(bǔ)加填料使柱效恢復(fù)。
每次工作完后，可以用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應(yīng)用無鹽流動(dòng)相沖洗。含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會(huì)腐蝕不銹鋼管道，不宜長(zhǎng)期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4~5天開機(jī)沖洗15分鐘。
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