液相色譜儀由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分組成,其中液相色譜柱的正確安裝和使用,是液相色譜工作的關(guān)鍵;也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實驗數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路?! ∫合嗌V柱的安裝: 1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu): a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成?! ≈宇^采用低死體積結(jié)構(gòu),柱接頭是兩端螺紋組件,一端是為7/16英寸外螺紋,另一端是3/16英寸的內(nèi)螺紋(國內(nèi)外已規(guī)范化)。7/16英寸外螺紋與1/4英寸柱管(Φ6.35mm)連接,中間放置壓壞用于密封。3/16英寸的內(nèi)螺紋與1/16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接,中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積,在安裝色譜柱時,用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底,然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應(yīng)嚴(yán)格控制在2.5mm長或其他固定尺寸)?! ≡趦啥酥宇^內(nèi),柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網(wǎng)),用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失??罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì),能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕。 b、柱填料: 液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進行的,柱子的分類是依據(jù)填料類型而定?! ≌嘀憾嘁怨枘z為柱填料。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種,其顆粒直徑在3—10 ?m的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN,-NH2等官能團即所謂的鍵合相硅膠。 反相柱:主要是以硅膠為基質(zhì),在其表面鍵合十八烷基官能團(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分?! 〕S玫钠渌姆聪嗵盍线€有鍵合C8、C4、C2、苯基等,其顆粒粒徑在3—10 ?m之間。
液相色譜柱、特別是高效液相色譜柱的填裝,需要有較高的技巧和熟練的技能。因此,有人甚至將“裝柱”看作是“藝術(shù)加技術(shù)”。但是,只要掌握了一些基本的規(guī)律和方法,任何實驗室都可以填裝出具有較高柱性能的色譜柱。當(dāng)然,目前大多數(shù)實驗室多是購買商品預(yù)填裝柱來滿足分離、分析之需。但是在一些有特殊需要的情況下,或為節(jié)省經(jīng)費,在實驗室中自行填裝高效液相色譜柱還是可取的。
液相色譜柱填裝程序中應(yīng)該注意的問題:
①高壓操作的安全問題。常發(fā)生的問題是柱子與勻漿罐連接不牢,造成加壓時柱頭被高壓沖下或柱子從勻漿罐上滑脫。此時,輕則填裝失敗,材料損失,重則造成人身傷害事故,一定要加以防范。除每次填裝前均須仔細確認(rèn)是否連接正確且牢靠外,可以還可加上由法蘭盤和長螺桿組成的預(yù)防脫落裝置,以防萬一。
?、谕ǔ?,先填裝的柱床較后填裝的柱床緊密。因此,當(dāng)使用時宜以相反的方向為宜,即讓近勻漿罐一端作為使用時流動相的出口,而填裝時的出口端則作為流動相的入口。
?、坌轮邮褂们皯?yīng)以甲醇沖洗20-30min, 后,再改用流動相平衡。
?、苄轮右诉x適宜的標(biāo)準(zhǔn)樣品進行評價并記錄,以備存查和比較。