液相色譜柱是一種用于液體色譜分析儀器。 液相色譜柱的日常維護: 1、每次開機時,流速和柱壓要逐漸增加,突然迅速增加,會使柱床受到沖擊,引起紊亂,產生空隙 2、在進樣前使色譜系統(tǒng)充分平衡,是否平衡可由基線加以判斷 3、在進樣前,檢查色譜系統(tǒng)的各個接頭,通常由此能發(fā)現(xiàn)是否有漏液現(xiàn)象。如有漏液,空氣會從漏縫進入系統(tǒng)引起基線漂移,影響峰高和峰面積的重復性 4、不要把柱接頭上得太緊,否則易損壞接頭螺紋,引起滲漏 5、不要把柱子放在有氣流的地方或直接放到陽光下,氣流和陽光都會使柱子產生溫度梯度造成基線漂移;如果懷疑基線漂移是由溫度梯度引起的,可以設法使柱子恒溫 6、若儀器用做常規(guī)分析,樣品種類有限,但分析次數很多,則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱,這樣有助于延長柱壽命 7、如果懷疑樣品會污染色譜柱,可以用合適的溶劑幾百毫升、慢慢沖洗柱子過夜,第二天早晨再用流動相重新平衡柱子約3min、 8、在因裝卸、更換、貯存等而挪動柱子時,動作要輕,不要使其受到碰撞,以免柱床因震動產生空隙或通道 9、柱要加標簽,新舊分開,不要放在溫度變化很大的地方 10、液相色譜柱柱子不用或貯藏時,應封閉并貯存在惰性溶劑中
造成這種情況的原因一般是色譜柱被污染,或柱頭填料塌陷導致的。
對于第一種情況,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。
對于第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結或塌陷。去除硬結部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。
如何排除液相色譜儀氣泡溢出故障?
流動相內產生都無法清除不斷產生的氣泡,主要是因為過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內,過濾器內部由于霉菌的生長繁殖,形成菌團,阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經過濾器進入流動相。
過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小時,輕輕震蕩幾次,再將過濾器用純水清洗幾次,打開泄壓閥,打開purge鍵清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內部的霉菌菌團已被硝酸破壞,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調至1.0~3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。
自檢時有時會出現(xiàn)“鎢燈能量低”的錯誤?
一般來說,原因是系統(tǒng)中有擋光物,光路偏離,鎢燈電源系統(tǒng)或鎢燈燈泡已壞。這時首先要檢查光度室是否有擋光物;打開檢測器光源室蓋,檢查氘燈是否點亮;如果氘燈不亮,則關機,更換新氘燈,換時,需注意型號;檢查氘燈保險絲,看是否松動、氧化、燒斷;如果故障,應立即更換;再開機重新自檢;若仍出現(xiàn)上述故障,則重新安裝軟件后再進行自檢。
出現(xiàn)壓力波動大,流量不穩(wěn)定?
造成這種情況的原因是系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
液相色譜儀峰面積重復性不好?
主要原因可能有進樣閥漏液、加樣針不到位或液量不足。針對第一種情況,處理時應對更換進樣閥墊圈;對于第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉換到INJECT狀態(tài),以保證進樣量的準確。日常工作中,液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要,如要注意不要讓空氣進入輸液系統(tǒng)和高壓泵中,儲液器內的溶液如長時間未用應清洗儲液器并更換溶液,每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無機鹽析出或沉積;樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質,完全溶解,盡量減少對色譜柱的污染,以延長色譜柱的使用壽命,同時避免注射過濃的樣品溶液,以免殘留液在進樣閥內析出固體引起堵塞;色譜柱作好標記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。
液相色譜柱壓升高?
造成柱壓升高的原因很多。一般是由于柱床內產生了異常的占位性物體,造成流體阻力加大所引起的。例如,緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內,或樣品污染沉積。針對第一種情況,處理時應先用40~50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。