1、一般定性 用已知物和直接對照法定性，這是一種相對可靠的方法，主要可以分為以下四種： 1）保留時間和保留體積 2）相對保留值 3）已知物增加峰高法 4）雙柱貨雙體系 實驗表明，各類同系物在兩根不同柱上的Vg值有如下關系：
式中：VgI表示在柱I上的比保留體積；VGII表示在柱II上的比保留體積；A1與C1為常數(shù)?！ 纳鲜娇梢钥闯觯滴镌趦蓚€性質(zhì)不同的色譜柱上，比保留體積Vg的對數(shù)有線性關系，下圖就是根據(jù)某些化合物和領苯二甲酸二異葵酯柱上的比保留體積的對數(shù)制作出的?！ 〗?jīng)過領苯二甲酸二異葵酯柱分離后，在lgvgII為1.8的位置上有一個未知峰，由圖可看出有兩種可能性，即酮與伯醇；此時，將樣品在柱上I上進行分離，得到lgVgII為1.62的色譜峰，從而可確定該峰是酮而不是醇。 在液相色譜中，可用雙體系定性，通過改變流動相和固定相，從而改善分離的選擇性，通常改用與原色譜體系有較大差別的其他色譜體系來實現(xiàn)分離?！ ?、保留值分隨份子結構或性質(zhì)變化的規(guī)律 1）GC中的碳數(shù)規(guī)律：同系物間，在一定溫度下，保留值變化遵循如下規(guī)律：
2）GC中的沸點規(guī)律：同族具有相同碳原子數(shù)目的同分異構體間存在如下關系：
3)LC中的保留值規(guī)則：對于份子中存在不同數(shù)目的重復官能團的化合物，有如下的經(jīng)驗公式：
3、反向液譜的定性 在氣譜中廣泛使用的Kovats指數(shù)定性，在夜譜中，由于組分的保留行為不僅與固定相有關，還與流動相的種類及濃度有關，所以不能直接用同系物間，在一定溫度下，保留值變化遵循如下規(guī)律指數(shù)定性。 4、計算機檢索 計算機不僅都能貯存大量保留指數(shù)，而且還可以將庫中標準數(shù)據(jù)轉換為用戶色譜條件下保留指數(shù)和tR值，靠檢索功能定性?！ ?、色譜中的輔助技術 液相色譜，對于未知物結構的確定，也常常使用一些輔助技術，常用的有質(zhì)譜，紅外，核磁等。 使用非在線聯(lián)用技術時，首先將色譜分離后的純樣品收集。
自動進樣器的故障容易被發(fā)現(xiàn)，有時液相色譜儀系統(tǒng)出了故障而不能確定是否是進樣器故障，可以用手動進樣幾次，或用一臺好的自動進樣器代替，如排除了故障，說明自動進樣器有了問題。不同廠商的自動進樣器差異很大，除一些共性故障外，較好查閱操作手冊或與供應商聯(lián)系。
除自動進樣器機械、控制系統(tǒng)可能出現(xiàn)故障外，在操作及方法學方面也可能出現(xiàn)相應的問題，這里主要根據(jù)自動進樣器的設計特點，對試驗過程中可能出現(xiàn)的問題進行說明。
一、滯后體積
高效液相色譜儀中滯后體積是指流動相混合器到柱頭的體積，包括溶劑混合器和混合器到柱頭之間連接管的體積，對于低壓混合系統(tǒng)，也包括泵體積。滯后體積較大可能導致實驗的重復性差、方法移植困難。通常的HPLC系統(tǒng)中，滯后體積一般在0.2mL～5mL之間，主要取決于裝置的設計。
滯后體積中較重要的部分為自動進樣器的定量環(huán)體積。只有定量環(huán)體積小于100μL時，其對滯后體積的影響才可以近似不計。當定量環(huán)體積較大時，這種影響將表現(xiàn)出來。例如，采用50μL的定量環(huán)時滯后體積為300μL，如果改用1mL定量環(huán)，滯后體積將變成1250μL，這種變化直接影響到色譜分離結果。在實際分離過程中，采用的色譜柱較細時，必須考慮滯后體積的影響，解決的辦法為更換較小的定量環(huán)，減小滯后體積。
二、樣品瓶過滿
如果樣品瓶過滿，在瓶蓋較緊、進樣量較大的情況下，可能會導致進樣重復性變差。其原因為樣品瓶中的樣品被抽出時，蓋緊的瓶蓋不能使空氣及時進入，造成部分真空。由于這種真空作用，注射器不能夠吸取足夠量的樣品體積。在極端的情況下，對于揮發(fā)性稀溶液樣品，針內(nèi)甚至會出現(xiàn)氣泡，影響分析工作的正常進行。
有些自動進樣器采用加排空針的方法克服這一問題，但這種方法并不常用。較簡單的解決辦法為不要使樣品瓶過滿。一般裝樣量在樣品瓶的1／2到3／4之間較為適宜。
三、進針深度的調(diào)節(jié)
樣品量足夠多時，不必考慮這一問題。但對于痕量分析而言，進針深度的調(diào)節(jié)問題將較為突出。理想的情況下可以使進針深入到接近樣品瓶底部，這樣可以較大限度地利用樣品。當可用的樣品體積有限時，可以采用微量樣品瓶以增加給定體積樣品的相對深度。如果進針過深，可能插入樣品瓶的底部，甚至導致針尖阻塞。如果進針深度不足，樣品只及針尖部分，針將不能抽取足夠量的樣品，部分空氣取而代之。
對于進針深度的調(diào)節(jié)，一般采用機械或電動的方法，目前大部分廠商可以在液相色譜儀色譜工作站上設置。無論采用哪種方法，實驗之前都必須認真調(diào)節(jié)，更換樣品瓶類型時還需要重新調(diào)整。
449717568