高效液相色譜儀適宜于分離、分析高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對分子量比較大的物質(zhì)，因而廣泛為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中針對這種精密而又運(yùn)用廣泛的科學(xué)儀器。
下面我們來聊一聊基線。HPLC常見的基線問題主要有基線漂移以及基線噪音。
基線漂移
線漂移基線漂移是色譜工作者普遍遇到的問題。一般說來，機(jī)器剛起動時，基線容易漂移，大概要30min的平衡時間，如果用了緩沖溶液、緩沖鹽，或者在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長，仍然發(fā)現(xiàn)基線漂移，原因可能有以下幾種：
1、柱溫波動
控制好柱子和流動相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。
2、流通池被污染或有氣體
用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池(盡量斷開柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
3、紫外燈能量不足
更換新的紫外燈
4、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。檢查流動相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑。
基線噪音
對于紫外檢測器,氘燈光源打開后要預(yù)熱30min以上,基線才能穩(wěn)定。噪聲是指與被測物無關(guān)的檢測器輸出信號的隨機(jī)擾動變化,分短期噪聲和長期噪聲兩種。
基線噪音(規(guī)則的)
產(chǎn)生基線噪音的原因有：在流動相、檢測器或泵中有空氣;漏液;流動相混合不完全;溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱);在同一條線上有其他電子設(shè)備;泵振動。
了避免基線噪音,在正式進(jìn)樣之前,需要對流動相脫氣;沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣;檢查管路接頭是否松動;泵是否漏液;是否有鹽析出和不正常的噪音,如有必要,更換泵密封;用手搖動使溶劑混合均勻或使用低粘度的溶劑減少差異或加上熱交換器;有其他電子設(shè)備時斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正;泵振動時在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器。
基線噪音(不規(guī)則的)
(1)漏液：檢查接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封,檢查流通池是否漏液。
(2)流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成：檢查流動相的組成。
(3)流動相各溶劑不相溶：選擇互溶的流動相。
(4)檢測器/記錄儀電子元件的問題：斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正。
(5)系統(tǒng)內(nèi)有氣泡：用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng);檢測器內(nèi)有氣泡,清洗檢測器,在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器。
(6)流通池污染(即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音):用硝酸清洗流通池;
(7)檢測器燈能量時不足更換燈;
(8)色譜柱填料流失或阻塞:更換色譜柱。
(9)流動相混合不均勻或混合器工作不正常:維修或更換混合器,在流動相不走梯度時,不建議使用泵的混合裝置。
高效液相色譜儀操作步驟如下：
1)過濾流動相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜.
2)對抽濾后的流動相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。
3)打開hplc工作站（包括計算機(jī)軟件和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統(tǒng)。
4)進(jìn)入hplc控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動菜單。
5)有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。
6)調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。
7)設(shè)計走樣方法。
8)進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。
9)關(guān)機(jī)時，先關(guān)計算機(jī)，再關(guān)液相色譜。
10)填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。
11)流動相均需色譜純度，水用20m的去離子水。
12)柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要讓液體過柱子。
13)所有過柱子的液體均需嚴(yán)格的過濾。
14)壓力不能太大，可以不要超過2000psi。
高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實(shí)現(xiàn)對試樣的分析。
1.漂移
漂移是指儀器穩(wěn)定后一段時間內(nèi)基線漂離原點(diǎn)的距離，通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢。高品質(zhì)的儀器能在較短的時間內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定，從而在一定程度上提高了分析效率。
2.系統(tǒng)的，整體開發(fā)
這里指的是儀器的整體開發(fā)，是一個完整的系統(tǒng)。目前市場上有這個現(xiàn)象，說我的泵是進(jìn)口的，或者是檢測器怎么好，用了什么很多的進(jìn)口件組裝等等。其實(shí)這是個誤區(qū)。液相色譜是個復(fù)雜的系統(tǒng)，不是整體開發(fā)的，各項(xiàng)指標(biāo)之間、軟件和硬件、硬件和硬件等都不匹配，整體水平不會高到哪里去，而且在售后服務(wù)方面對用戶也是不負(fù)責(zé)任的。
整體開發(fā)的主要優(yōu)點(diǎn)有：各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)統(tǒng)一、儀器各單元的通信協(xié)調(diào)、能夠建立一個整體的數(shù)字化評價系統(tǒng)、體現(xiàn)了企業(yè)的科技及開發(fā)實(shí)力。
3.操作方便
操作方便性無論是對新手還是成熟的用戶都是很重要的。液相色譜儀的操作越簡單，有利于提高分析效率，也為以后分析方法的拓展提供有力的幫助。上海伍豐科學(xué)儀器有限公司的WS-100工作站軟件實(shí)現(xiàn)了真正的智能化操作。它摒棄了以往工作站軟件只能起到數(shù)據(jù)處理的理念，率先在國內(nèi)推出了集控制與后處理于一身的軟件，在操作使用上給用戶帶來了極大的方便。是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。CL=2×Nd×C/H(CL ：最小檢測濃度 Nd:噪音 C：樣品濃度最小檢測濃度 H：樣品峰高)由上式可見，最小檢測濃度是和噪音成正比的，噪音越大，最小檢測濃度就越大，靈敏度就越低。某些山東液相色譜儀廠家回避了這個指標(biāo)，說明他們不愿在最小檢測濃度的基礎(chǔ)上去比較噪音.
4.噪音
噪音是指由儀器的電器元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動。噪音的大小直接關(guān)系到儀器的檢測靈敏度，噪音越大，檢測的靈敏度就越低。對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好，否則噪音過大將會導(dǎo)致基線不穩(wěn)，甚至影響分析結(jié)果。
5.定性定量重復(fù)性
國產(chǎn)液相色譜儀廠家認(rèn)為主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標(biāo)，這對于分析樣品來說是非常重要的。好的儀器其穩(wěn)定性應(yīng)該是十分優(yōu)秀的，這就要求多次進(jìn)樣保留時間及含量的一致性，這樣做出來的結(jié)果才能使人信服。
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