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導致液相色譜柱失效的4個常見問題及解決辦法 液相色譜解決方案

時間:2020-05-17    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
  液相色譜儀的色譜柱在使用一段時間后,會出現(xiàn)一定的常見故障,如果不能很好的判斷并解決就會影響色譜柱的使用效果,從而影響樣品的分析結(jié)果。
 

液相色譜柱
 
  1 篩板堵塞
 
  色譜柱入口篩板堵塞是zui常見的問題之一,會導致柱壓升高、色譜峰拖尾、塔板數(shù)降低等問題。通常分析樣品中微粒雜質(zhì)zui右可能堵塞色譜柱入口,因此分析時,需要先過濾或者離心,乳濁或渾濁樣品應以0.25µm濾膜處理,也可用針頭過濾器過濾。進樣器與泵密封墊的磨損也會帶入微粒,在進樣閥與色譜柱之間使用0.25µm或0.45µm的在線過濾器,通??梢员苊膺@類問題。
 
  2 強保留樣品組分
 
  強吸附性的樣品組分吸附在柱頭填料上,能嚴重地影響色譜柱壽命。像生物組織或體液的提取物、天然產(chǎn)物等復雜樣品,極易造成柱頭的污染。相對較純的樣品,一般不會出現(xiàn)這一問題。色譜柱應用中,色譜峰嚴重拖尾或分裂往往是強保留污染物在柱頭吸附的體現(xiàn)。
 
  3 色譜柱裝填不良
 
  裝填不良的色譜柱,在短時間應用后,填充床的壓縮通常使柱頭處產(chǎn)生塌陷,導致柱效突然降低。色譜柱的初始評價指標,如塔板數(shù)、不對稱因子等往往不能很好地表征色譜柱床層的穩(wěn)定性,這種情緒只能在實際應用中發(fā)現(xiàn)。
 
  4 壓力因素
 
  液相色譜儀色譜柱使用過程中的驟然壓力波動、機械撞擊或溫度驟然變化都會對色譜柱床層產(chǎn)生影響,導致峰形變差和柱效降低。進樣過程中,進樣閥轉(zhuǎn)動太慢可引起壓力波動,使色譜柱床產(chǎn)生裂隙,在柱切換時也存在同樣的問題。使用填充良好的色譜柱,在較低柱壓下操作,可大大減少由壓力波動造成的色譜柱損壞。

高效液相色譜儀常見故障解決方法

  高效液相色譜儀是由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、查看器、記錄儀等幾有些構(gòu)成。儲液器中的活動相被高壓泵打入體系,樣品溶液經(jīng)進樣器進入活動相,被活動相載入色譜柱(固定相、內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不一樣的分配系數(shù),在兩相中作相對運動時,經(jīng)過重復屢次的吸附-解吸的分配進程,各組分在移動速度上發(fā)生較大的不一樣,被別離成單個組分順次從柱內(nèi)流出,經(jīng)過查看器時,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜方式打印出來。

  高效液相色譜儀常見故障解決方法:

  故障1

  活動相內(nèi)有氣泡,封閉泵,翻開泄壓閥,翻開purge鍵,清潔脫氣,氣泡不斷從過濾器冒出,進入活動相,不管翻開purge鍵幾回,都無法清除不斷發(fā)生的氣泡。

  因素過濾器長時刻沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),過濾器內(nèi)部由于霉菌的成長繁衍,構(gòu)成菌團,阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地經(jīng)過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進入活動相。

  處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,超聲清潔幾分鐘即可;亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小時,悄悄震蕩幾回,再將過濾器用純水清潔幾回,翻開泄壓閥,翻開purge鍵,清潔脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,持續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,闡明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團已被硝酸損壞,活動相能夠流暢地經(jīng)過過濾器。翻開泄壓閥,翻開泵,流速調(diào)至1.0~3.0ml/min,純水沖刷過濾器1小時擺布。即可將過濾器清潔潔凈。封閉泄壓閥,純甲醇沖刷半小時即可。

  故障2

  柱壓高因素:緩沖液鹽分如(乙酸銨等)堆積于柱內(nèi);樣品污染堆積。

  處理關(guān)于第一種狀況先用40~50℃的純水,低速正向沖刷柱子,待柱壓逐步降低后,相應進步流速沖刷,柱壓大幅度降低后,用常溫純水沖刷,之后用純甲醇沖刷柱子30分鐘;關(guān)于第二種狀況,由樣品的堆積導致污染的C18柱,和純水反向沖刷柱子,然后換成甲醇沖刷,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖刷柱子(沖刷時刻的長短由樣品污染的狀況而定),再用換成甲醇沖刷,然后用純水沖刷,最終甲醇沖刷正向沖刷柱子30分鐘以上。

  故障3

  既無壓力指示,又無液體流過[1>;。

  泵密封墊圈磨損;很多氣泡進入泵體。

  處理關(guān)于第一種狀況,替換密封墊圈;關(guān)于第二種狀況,在泵作用的一起,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處協(xié)助抽出空氣。

  故障4

  壓力動搖大,流量不穩(wěn)定.

  因素體系中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。

  處理作業(yè)中留意調(diào)查活動相的量,確保不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,防止吸入空氣,活動相要充沛脫氣[2>;。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清潔.

  故障5

  出峰欠安,峰分叉。

  因素色譜柱被污染;柱頭填料陷落。

  處理關(guān)于第一種狀況,先用純水反向沖刷柱子,然后換成甲醇沖刷,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖刷柱子(沖刷時刻的長短由樣品污染的狀況而定),再換成甲醇沖刷,然后用純水沖刷,最終甲醇沖刷正向沖刷柱子30分鐘以上。如沖刷后仍然出峰欠安,則考慮第二種狀況。關(guān)于第二種狀況,擰開柱頭,查看柱填料是不是硬結(jié)或陷落。去掉硬結(jié)有些(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內(nèi)徑一樣的頂端滑潤的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊重復幾回,直至裝滿填平;。柱頭用甲醇沖刷潔凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖刷30分鐘以上。

標簽: 高效液相色譜儀
高效液相色譜儀 高效液相色譜儀常見故障解決方法_高效液相色譜儀

高效液相色譜儀的特點

    高效液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、。分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),下面將分別敘述其各自的組成與特點。

    1.進樣系統(tǒng)一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作,進樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。

    2.輸液系統(tǒng)該系統(tǒng)包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。

    高壓泵的一般壓強為l。47~4。4X107Pa,流速可調(diào)且穩(wěn)定,當高壓流動相通過層析柱時,可降低樣品在柱中的擴散效應,可加快其在柱中的移動速度,這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。

    流動相貯存錯和梯度儀,可使流動相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變,包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值,或改用競爭性抑制劑或變性劑等。

    這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個基團的差別或是同分異構(gòu)體)都能獲得有效分離。

    3.分離系統(tǒng)該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10~50cm(需要兩根連用時,可在二者之間加一連接管),內(nèi)徑為2~5mm,由"優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,住內(nèi)裝有直徑為5~10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構(gòu)成)。

    固定相中的基質(zhì)是由機械強度高的樹脂或硅膠構(gòu)成,它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔徑可達1000?)和比表面積大的特點,加之其表面經(jīng)過機械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣),或者用化學法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機化合物。

    因此,這類固定相對結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。

    例如,在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來。

 

    另外,固定相基質(zhì)粒小,柱床極易達到均勻、致密狀態(tài),極易降低渦流擴散效應?;|(zhì)粒度小,微孔淺,樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。

    根據(jù)柱效理論分析,基質(zhì)粒度小,塔板理論數(shù)N就越大。這也進一步證明基質(zhì)粒度小,會提高分辨率的道理。

    再者,高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C,通過改善傳質(zhì)速度,縮短分析時間,就可增加層析柱的效率。

標簽: 高效液相色譜儀
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