毛細(xì)管色譜柱的選擇該如何呢?
1、膜厚
薄膜比厚膜洗脫組分快、峰分離好、溫度低。
一般而言,色譜柱的膜厚為0.25到0.5um。對于流出達(dá)300℃的大多數(shù)樣品(包括蠟、甘油三酯、甾族化合物等)能夠很好的分析。
對于更高的洗脫溫度,可以用0.1um的液膜。而厚液膜對于低沸點化合物有利,對于流出溫度在100℃~200℃之間的物質(zhì),用1~1.5um的液膜效果較好。
超厚膜(3~5um)用于分析氣體、溶劑和可吹掃出來的物質(zhì),以增加樣品組分與固定相的相互作用。
另一個選擇厚膜的原因是當(dāng)用大口徑柱時保持分離度和保留時間。由于這個原因,大口徑柱都是有厚膜。厚膜的流失較大,溫度極限必須隨膜厚度增加而下降。
2、長度
一般情況,15m柱用于快速篩選簡單混合物或分子量極高的化合物。30m柱是*普遍地柱長。超長柱(50、60或100、150m)用于非常復(fù)雜的樣品。
柱長度在柱性能上不是一個重要參數(shù),例如:加倍柱長,恒溫分析時間則加倍但峰分辨率僅增大40%。
如果分析只是比較好但不是特別好的,有比增加柱長度更好的辦法來分析結(jié)果,如考慮更薄的膜,優(yōu)化載氣流量或用程序升溫等。
分析活性極強的組分是一種特殊情況。如果樣品與柱材質(zhì)接觸,那么峰會嚴(yán)重拖尾。
較厚的膜、相對短的柱可以由于較少的柱材和較厚的固定液體掩蓋其表面以屏蔽活性表面從而減少相互作用的機會。
3、內(nèi)徑
增加直徑意味著需要更多的固定相,及時厚度不增加,也有較大的樣品容量。同時也意味著降低了分離能力且流失較大。
小口徑柱為復(fù)雜樣品提供了所需的分離,但通常因為柱容量低需要分流進(jìn)樣。如果分離度的降低能夠接受的話,大口徑柱可以避免這一點。
當(dāng)樣品容量是主要的考慮因素時,如:氣體、強揮發(fā)性樣品、吹掃和捕集或頂空進(jìn)樣,大內(nèi)徑甚至PLOT柱可能比較合適。
同時色譜柱內(nèi)徑的選擇中要考慮儀器的限制和要求。填充柱的進(jìn)樣口可以使用大口徑毛細(xì)管柱(0.53mm內(nèi)徑),而小口徑柱就不一定能夠被連接在儀器上使用。
毛細(xì)管柱的進(jìn)樣口一般可以用于所有內(nèi)徑范圍的毛細(xì)管。(0.1mm、0.25mm、0.32mm、0.53mm)直接聯(lián)用的GC/MSD和MSD需要小口徑柱,因為真空泵不能處理大口徑的大流量。查明你的整個系統(tǒng)看看那些是適合那些柱內(nèi)徑的色譜柱。
毛細(xì)管色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成,其兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板。
毛細(xì)管色譜柱正確安裝的步驟如下: 步驟一:檢查氣體過濾器、載氣、進(jìn)樣墊和襯管等檢查進(jìn)樣墊和氣體過濾器,保證輔助氣和檢測器用氣通暢有效。如果以前做過沸點較高的化合物,需要將進(jìn)樣口襯管清洗或更換?! 〔襟E二:將螺母和卡套裝在柱上,并將色譜柱兩端口小心切平在色譜柱的一端裝上相應(yīng)的螺母和卡套,此時色譜柱端口無前后之分,色譜柱支架的支撐部分應(yīng)總是朝向著柱箱門。安裝好螺母和卡套后,將色譜柱端口切平,并用放大鏡進(jìn)行檢查,以確認(rèn)切口和管壁成直角,并且沒有殘留的碎屑,沒有毛邊或不平的切割面?! 〔襟E三:將色譜柱連于進(jìn)樣口上通常來說,色譜柱的頂端應(yīng)保持在進(jìn)樣口襯管的中下部,當(dāng)進(jìn)樣針穿過隔墊完全插入進(jìn)樣口后,如果針尖與襯管中的色譜柱頂端相差1-2cm,這就是較為理想的狀態(tài)。從色譜柱架上取出需要連接的足夠的長度,并按步驟2切割柱子,連接到進(jìn)樣口。避免用力彎曲壓擠毛細(xì)柱,并小心不要讓標(biāo)記牌等有鋒利邊緣的物品與色譜柱接觸磨擦,以防柱身斷裂或受損。將色譜柱正確地嵌入進(jìn)樣口后,用手把連接螺母擰上,用手?jǐn)Q緊后用扳手再擰1/4-1/2圈?! 〔襟E四:接通載氣載氣必須為高純氮氣(或氦氣),純度達(dá)99.999%,使用極性柱時(如FFAP、PEG-20M等),載氣加脫氧管進(jìn)一步脫氧,這樣可延長柱子的使用壽命。當(dāng)色譜柱與進(jìn)樣口連接好后,接通載氣。調(diào)節(jié)柱前壓力以得到合適的載氣流速。將色譜柱的另一端(空端),插入裝有己烷的樣品瓶中,正常情況下,我們可以看見瓶中穩(wěn)定持續(xù)的氣泡。如果沒有氣泡,就要重新檢查一下載氣裝置和流量控制器等是否安裝完全或設(shè)置正確,并檢測一下整個氣路有無泄漏。等所有問題解決后,將色譜柱端口從瓶中取出,擦試干凈,保證柱端口無溶劑殘留,再進(jìn)行下一步安裝。毛細(xì)管柱前壓參考設(shè)置(Mpa)柱長m柱內(nèi)徑(mm)0.250.320.53150.050.040.02300.10.080.03500.180.140.05 步驟五:將色譜柱連于檢測器上其安裝和所需注意的事項與以上色譜柱與進(jìn)樣口聯(lián)接(步驟3)部分所講述的大致相同。安裝時要注意色譜柱末端要高于尾吹點,或按照色譜儀說明書安裝?! 〔襟E六:進(jìn)行氣體檢漏在色譜柱加熱前,要對GC系統(tǒng)進(jìn)行檢漏。建議使用1∶1的異丙醇/水的混合溶液進(jìn)行檢查。步驟7:色譜柱的老化色譜柱安裝和系統(tǒng)檢漏工作完成后,就可以對色譜柱進(jìn)行老化了。將色譜柱程序升溫至使用溫度的30℃以下,恒溫30分鐘。這樣柱子內(nèi)吸附的組份會被吹出,以免影響您的分析。最后,將色譜柱的溫度降低至所需要的溫度,即可進(jìn)行實際樣品的分析。