液相色譜中的許多問題都能在譜圖上反映出來，其中有一些問題可以通過改變設備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對于色譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關鍵。而面對常常發(fā)現(xiàn)的HPLC譜圖異常的問題，如何做到真正解決問題，則需堅持這幾個原則：一具體問題具體對待原則：二先外設后內(nèi)部原則：三由簡而繁原則：四單一處理到綜全處理原則。
一、拖尾峰
1、篩板阻塞:柱子兩頭的過濾篩板如果堵塞，樣品就會在篩板部分受阻而形成時間延遲，使得樣品在柱后流出時峰型形成拖尾。需要通過反沖色譜柱，或者更換篩板。
2、色譜柱塌陷:是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失，不能對物質(zhì)形成保留，使得物質(zhì)不在固定相上保留而隨流動相流出，但是又還有一點柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。
3、有污染:即樣品不在同一起跑線起跑，從后面開始跑得到達終點稍晚，表現(xiàn)出拖尾。更換色譜柱或者采用有機溶劑梯度洗脫1h以上，以沖洗柱子。
4、流動相PH值選擇錯誤:如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動態(tài)平衡，離子型的陸續(xù)向分子型轉(zhuǎn)化就會表現(xiàn)出拖尾。調(diào)節(jié)PH值可抑制分子解離，改善拖尾，對于堿性化合物，相對較低的PH值更有利于得到對稱峰。
二、前沿峰
1、樣品過載:被保留的樣品在正常出峰時間前陸續(xù)出來，形成前沿峰。降低樣品含量。
2、樣品溶劑選擇不恰當:當樣品溶劑的洗脫能力大大強于流動相時會出現(xiàn)前沿峰，例如，在反相色譜中用已腈做樣品溶劑，而流動相的洗脫力較弱時會出現(xiàn)前沿峰。選擇流動相或者接近流動相的比例作為樣品溶劑。
3、色譜柱損壞:色譜柱柱效損失，不能對物質(zhì)形成保留。更換色譜柱。
4、假象前沿峰:在大峰前有小峰出現(xiàn),假象前沿峰，即大峰前包埋了沒有分開的小峰。調(diào)整流動相洗脫梯度。
三、基線漂移
1、柱溫波動:即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動，通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。使用柱溫箱，控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器。
2、流動相不均勻:流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移。使用HPLC級的溶劑，流動相在使用前進行脫氣處理。
3、流通池被污染或有氣體:用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）。
4、流動相配比不當或流速變化:更改配比或流速，為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。
5、樣品中有強保留的物質(zhì):以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。
四、出現(xiàn)寬峰
1、塔板數(shù)降低:色譜柱污染或失效，造成塔板數(shù)降低。更換同樣類型的色譜柱，如果新柱子可以提供對稱的色譜峰，則用強溶劑沖洗舊柱子。
2、管路太長或管路內(nèi)徑太大:柱子與檢測器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大。更換內(nèi)徑較小的短管路。
3、檢測器響應過大:檢測器對反應時間或池體積響應過大。減少響應時間或使用更小的流通池。
五、基線噪音
1、尖銳峰:在流動相、檢測器或泵中有空氣。流動相脫氣，沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣。
2、漏液:檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。
3、流動相混合不完全:用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑。
4、溫度影響:柱溫過高，檢測器未加熱。使用柱溫箱，減少溫度差異或加上熱交換器。
5、偶然噪聲:在同一條線上有其他電子設備，斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。采用精密級穩(wěn)壓電源。
六、分離度不夠
1、流動相梯度洗脫設置不合理:優(yōu)化梯度洗脫程序。
2、流動相污染或變質(zhì):引起保留時間變化，重新配置流動相。
3、保護柱或分析柱阻塞:去掉保護柱進行分析，如果必要則更換保護柱；如果分析柱阻塞，可進行反沖；如果問題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞，建議使用恰當?shù)脑偕绦颍蝗绻麊栴}仍然存在，進口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。
液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲（封頭）與柱填料等組成。
柱管：
多用不銹鋼制成，若果使用時柱壓不高于70 kg/cm2時，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填。
壓帽：
即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽，中部有小孔，多為聚四氟乙烯制成，用于固定篩板。
密封環(huán)：
位于接頭螺旋環(huán)內(nèi)壁的彈性環(huán)，多為聚四氟乙烯制成，用于色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。
色譜柱使用前注意事項。
色譜柱在使用前，最hao進行柱的性能測試，并將結果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。
在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是最jia條件)，只有這樣，測得的結果才有可比性。
但要注意：
柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
1、樣品的前處理
a、最hao使用流動相溶解樣品。
b、使用預處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c、使用0.45μm或0.22?m的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
2、流動相的配制
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：
a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
b、流動相與樣品不產(chǎn)生化學反應
c、流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，最hao使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e、流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導致實驗無法進行。
f、在流動相配制好后，一定要進行脫氣。
除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動相流速的選擇
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。
對于一根特定的色譜柱，要追求最jia柱效，最hao使用最jia流速。
對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。
當選用最jia流速時，分析時間可能延長。
可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時，可適當增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：
a．含水流動相最hao在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。最hao加入die氮化鈉，防止細菌生長。
b．流動相要求使用0.45 μm或0.22m濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。
c．使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。
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