我們該如何使用紫外可見光光度計進行雜光散光測試呢?下面跟我一起來了解一下吧。
據(jù)了解，有的紫外可見光光度計只測試220nm處的雜散光，不測試340nm處的雜散光，這樣是不正確的，需測試220nm處雜散光是因為：
?、俑鶕?jù)儀器學(xué)理論中的電光源理論，氘燈在220nm處能量很小，即信號很小，容易顯現(xiàn)雜散光;
?、诟鶕?jù)儀器學(xué)理論中的光電發(fā)射理論，光電倍增管在220nm處的光譜響應(yīng)(靈敏度)低，容易顯現(xiàn)雜散光。
?、鄹鶕?jù)量子光學(xué)理論，波長是能量的倒數(shù)，波長短能量大，容易產(chǎn)生雜散光，而220nm處屬于短波部分;
而測試340nm處雜散光的原因是完全不同的，因為340nm處一般是氘燈換鎢燈和儀器調(diào)換濾光片的地方，此時容易產(chǎn)生雜散光。所以，對于紫外可見光光度計來講，應(yīng)該測試220nm和340nm兩處的雜散光。
紫外可見光光度計雜散光測試步驟：
1、首先將參比液注入配對石英石吸收池，分別放置在參比池座和試樣池座內(nèi)。再測定波段掃描基線并使之平滑。
2、將減光片插入試樣光路的濾光片槽內(nèi)，其讀數(shù)即為減光片的衰減值K，然后將減光片插入?yún)⒈裙饴返臑V光片座內(nèi)，
3、將石英吸收池中的蒸餾水依次換成上述截止濾光液，插入試樣試樣池座中，在相應(yīng)的波段內(nèi)掃描、打印;在記錄紙的作標(biāo)上量取測定波長處的透光度，乘以衰減值K，即得各測定波長處的雜散光值。
我們?nèi)绾蝸碓u價一臺紫外可見分光光度計的優(yōu)劣呢？首先，我們要來考察它的外觀。然后，我們探討一下會對儀器的使用有很大影響的幾個重要指標(biāo)：
1、雜散光它指不應(yīng)該有光的地方有了光。
它是光譜測量中誤差的主要來源。這個值當(dāng)然越小越好了。
2、光度準(zhǔn)確度光度準(zhǔn)確度指實際測量的光度讀數(shù)值與真值之差。
它是用戶對儀器的直接要求，每個用戶都必須重視。
3、噪聲噪聲也是儀器的重要指標(biāo)之一。
它表征儀器的做稀溶液的能力。這個指標(biāo)也是越小越好。
4、光譜帶寬指從單色器射出的單色光譜線強度輪廓曲線的1/2高度處的譜帶寬度。
表征儀器的光譜分辨率。按照比耳定律，光譜帶寬應(yīng)該是越小越好的，但是如果儀器的光源能量弱，光學(xué)傳感器的靈敏度低時，光譜帶寬小了，也得不到理想的測量結(jié)果的。所以，選擇和使用儀器時一定注意。
5、穩(wěn)定性穩(wěn)定性是使用者較為關(guān)注的指標(biāo)之一。
儀器的宗旨就是穩(wěn)定可靠，不穩(wěn)定更談不上可靠了。
6、噪聲噪聲也是儀器的重要指標(biāo)之一。
它表征儀器的做稀溶液的能力。這個指標(biāo)也是越小越好。
7、波長的準(zhǔn)確度和重復(fù)性儀器的每個值都是在一定的波長下測得的，如果所示的波長和實際波長偏差萬里，那么測出的值和真值的吻合度從何談起呢？可見這個指標(biāo)的重要性。
總之，這幾個指標(biāo)都是相互獨立又相互關(guān)聯(lián)的，每個指標(biāo)對儀器的使用都有很大影響。希望大家在選購紫外、可見分光光度計時，多做比較，多做判斷，切實找到一個穩(wěn)定可靠的好幫手。
我們選擇時需要根據(jù)自己實驗室的需要，主要考慮光學(xué)構(gòu)造和光源、檢測方法、樣品類型和數(shù)據(jù)處理等因素。
1.光學(xué)構(gòu)造
一般來說，紫外光分光光度計分為單光束和雙光束兩類。1單光束型主要是依賴單束光進行測量。一束給定波長的光通過對照物，然后再通過實際樣品溶液，就能得到吸光結(jié)果。
雙光束型則是通過一個斬光輪（mirroredchopperwheel）將一束光分成兩束，分別測量對照樣品和實際樣品?？梢宰钚』馄疲╨ampdrift）和減少測量時間。一些雙光型光度計不利用斬光輪，而是利用一種光束分光器來代替，將一束光分成兩束平行的光然后同時測量對照樣品和目的樣品。因為增加了測量的速度，所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時間動態(tài)變化的研究中大有用處。
2.樣品類型
在大部分的樣品類型中，分光光度計可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。
用小試管裝樣品容量一般從1μl-5ml，并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要。
3.光源和檢測方法
分光光度計的光譜也是需要考慮的一個重要因素。
紫外分光光度計一般覆蓋190nm和380nm波長，通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍。
有的儀器可以選擇多種光源：紫外光、可見光和甚至紅外光（780nm至3,000nm）。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分（大約380nm到800nm）。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。
分光光度計的帶寬（bandwidth）很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度。可以投射出實驗精確要求的光譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對復(fù)雜的混合物進行高分辨率的吸光測量?？勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。
4.樣品類型
在大部分的樣品類型中，分光光度計可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。
用小試管裝樣品容量一般從1μl-5ml，并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要。
5.數(shù)據(jù)管理
大部分單機型的分光光度計包含了驅(qū)動儀器運行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器，通常與PC機一起聯(lián)用，需要從制造商提供額外的軟件。
由此可見紫外、可見分光光度計是一種常規(guī)的實驗室分析儀器?？蓮V泛用于無機物、有機物的定性、定量分析中，在科研、制藥、化工、環(huán)保、衛(wèi)生、防疫等領(lǐng)域中發(fā)揮重要的作用。
752紫外可見分光光度計由光源室，單色器，試樣室，光電管，微電流放大器，對數(shù)放大器，數(shù)字顯示器及穩(wěn)壓電源部分組成（下圖為工作原理圖）。
操作流程及注意事項： （1）將靈敏度旋鈕調(diào)置“1”檔（放大倍率最?。?，打開樣品室蓋子。 （2）按電源開關(guān)（開關(guān)內(nèi)2只指示燈亮），鎢燈點亮；按氫燈開關(guān)（開關(guān)內(nèi)左側(cè)指示燈亮），氫燈電源接通；再按氫燈觸發(fā)按鈕（開關(guān)內(nèi)右側(cè)指示燈亮），氫燈點亮。僅器預(yù)熱30min。 （3）選擇開關(guān)置于“T”。 （4）打開試樣室蓋（光門自動關(guān)閉），調(diào)節(jié)“0% ”透光率旋鈕，使數(shù)字顯示為“000.0（T）” (5)將波長置于所需要測的波長。 (6)將裝有溶液的比色皿放置于比色皿架中。 (7)蓋上樣品室蓋，將參比溶液比色皿置于光路，調(diào)節(jié)透光率100%旋鈕，使數(shù)字顯示為“100.0”[若顯示不到100.0(T)，則可適當(dāng)增加靈敏度的檔數(shù)，同時應(yīng)重復(fù)（4)，調(diào)整僅器的“OOO.O(T)”]。 （8）將被測溶液置于光路中，數(shù)字顯示器上直接讀出被測溶液的透光率（T)值。 （9）吸光度4的測量：參照（4)和（7)，調(diào)整僅器的“000.0”和“100.0”，將選擇開關(guān)置于“A”，旋動吸光度調(diào)整旋鈕，使得數(shù)字顯示為“000.0”，然后移入被測溶液，顯示其吸光度A。 (10)濃度C的測量：選擇開關(guān)由“ A”旋至“C”，將已標(biāo)定濃度的溶液移入光路，調(diào)節(jié) “濃度”旋鈕使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值，將被測溶液移入光路，即可讀出相應(yīng)的濃度值。 (11)如果大幅度改變測試波長時，需要數(shù)分鐘后，才能正常工作（因波長由長波向短波或由短波向長波移動時，光能量變化急劇，使光電管受光后響應(yīng)緩慢，需有光移響應(yīng)平 衡時間）。 （12）僅器在使用時，應(yīng)常參照本操作方法中（4)和（7)進行調(diào)“000.0”和“ 100.0”的工作。 （13）每臺僅器所配套的比色狐不能與其他僅器上的比色狐單個調(diào)換。 （14）僅器數(shù)字顯示后背面帶有外接插座，可輸出模擬信號，插腳1為正，插腳2為負(fù)，接地線。 （15）儀器使用完畢后，應(yīng)關(guān)機，罩上防塵罩，并及時更換干燥劑。比色皿用完后應(yīng)清洗干凈，擦干放于比色皿盒內(nèi)。
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