糖檢測色譜柱特點(diǎn):
1.柱壽命更長:雜化鍵和相技術(shù)使得這款糖柱兼有硅膠柱的耐壓性與聚合物柱的酸堿耐受性。
2.基線更穩(wěn)定:與常規(guī)的用于分析糖的硅膠氨基柱比較,即使使用梯度洗脫也沒有基線漂移問題。
3.可兼容使用在梯度洗脫條件下的ELSD檢測。
糖檢測色譜柱使用時(shí)注意事項(xiàng):
1.為避免管路中的有機(jī)溶劑和氣泡進(jìn)入糖檢測色譜柱,先用水沖洗整個色譜系統(tǒng),然后才能接入糖檢測色譜柱。
2.不要讓有機(jī)溶劑進(jìn)入柱中,否則會使填料脫水,導(dǎo)致柱床損壞,要小流速開啟泵,不要快速加大流速,以防止壓力迅猛升高而導(dǎo)致柱床損壞。15mm的柱子流速不要超過3ml/min。
3.每次使用后務(wù)必用蒸餾水沖洗干凈將含鹽的流動相置換干凈,若較長時(shí)間不用請按保存方法保存。
糖檢測色譜柱保存方法:
1.將糖檢測色譜柱用蒸餾水沖凈后充上0.02%-0.05%的疊氮鈉水溶液封存,或三氯丁醇(0.015%)苯基汞代鹽(0.001-0.01%)將糖檢測色譜柱封閉后低溫保存(溫度在5℃左右)在冰箱。
2.再次使用時(shí),用蒸餾水將保護(hù)溶液沖洗掉即可使用。
3.如果第二天還要使用也要從系統(tǒng)中取下,將柱封閉后存于4~8度的冰箱中冷藏。
現(xiàn)代高效液相色譜中,分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬,要做合適的選擇,首先必須對此有一定的認(rèn)識和了解。下面將對幾種常見的色譜填料極其各種的性能做各一個簡要的介紹。
(1)硅膠填料
硅膠填料主要應(yīng)用正相色譜及反相色譜柱中,正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica),以及其他具有極性官能團(tuán),如胺基團(tuán)(NH2,APS)和氰基團(tuán)(CN,CPS)的鍵合相填料。
由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他團(tuán)的極性較強(qiáng),因此,分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小,即極性強(qiáng)弱的組份最先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如:正乙烷(Hexane),氯(Chloroform),二氯甲烷(MethyleneChloride)等。
反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ),表面鍵合有極性相對較弱的官能團(tuán)的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強(qiáng),通常為水,緩沖液與甲醇,已腈等混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)組合最先被沖出,而極性弱的組份會在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等。
?。?)聚合物填料
聚合物調(diào)料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要優(yōu)點(diǎn)是在PH值為1~14均可使用。相對與硅膠基質(zhì)的C18填料,這類填料具有更強(qiáng)的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。現(xiàn)在的聚合物填料的缺點(diǎn)是相對硅膠基質(zhì)填料,色譜柱柱效較低。
?。?)其他無機(jī)填料
其它HPLC的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì),一般僅限于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料。這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基鍵合相,石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ),不再需其它的表面改性,該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng),石墨化碳可用于分離某些幾何導(dǎo)構(gòu)體,又由于HPLC流動相中不會被溶解,這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可用于HPLC,氧化鋁微粒剛性強(qiáng),可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床,其優(yōu)點(diǎn)是可在PH高達(dá)12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強(qiáng),應(yīng)用范圍受到一定的限制,所以未能廣泛應(yīng)用,新型氧化鋯填料也可用于HPLC,商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應(yīng)用PH范圍1~14,溫度可達(dá)100℃。由于氧化鋯填料幾年才開始研究,加之面臨的實(shí)驗(yàn)難度,其重要用途與優(yōu)勢尚在進(jìn)行中。
色譜柱是一種內(nèi)有固定相用于分離混合物的柱管,多為金屬或玻璃制作,有直管形、盤管形、U形管等形狀,被廣泛用于多個領(lǐng)域中。今天小編主要來介紹一些色譜柱的應(yīng)用和構(gòu)造,希望可以幫助用戶更好的應(yīng)用產(chǎn)品。
色譜柱的應(yīng)用:
譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相,以及色譜柱的制備和操作條件。
色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。市售的用于Hplc的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球(包括離子交換樹脂)、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,柱效理論值可達(dá)5~16萬/米。對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;對于同系物分析,只要500即可;對于較難分離物質(zhì)對則可采用高達(dá)2萬的柱子,因此一般10~30cm左右的柱長就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。
柱效受柱內(nèi)外因素影響,為使色譜柱達(dá)到較佳效率,除柱外死體積要小外,還要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。即使可以的裝填技術(shù),在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,靠近管壁的部位比較疏松,易產(chǎn)生溝流,流速較快,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬,這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中,柱外效應(yīng)對柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。