超微量分光光度計(jì)如何保養(yǎng)
超微量分光光度計(jì)是精密光學(xué)儀器，出廠前經(jīng)過精細(xì)的裝配和調(diào)試，如果能對(duì)儀器進(jìn)行恰當(dāng)?shù)木S護(hù)和保養(yǎng)，不僅能保證儀器的可靠性和穩(wěn)定性，也可以延長(zhǎng)儀器使用壽命。
超微量分光光度計(jì)常用于定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)。如：1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算，從而得出相應(yīng)的樣品濃度。
超微量分光光度計(jì)的工作原理是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器，常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。無論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測(cè)、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門 ,紫外可見分光光度計(jì)督有廣泛而重要的應(yīng)用。
超微量分光光度計(jì)是精密光學(xué)儀器，正確安裝、使用和保養(yǎng)對(duì)保持儀器良好的性能和保證測(cè)試的準(zhǔn)確度有重要作用。下面分享一些超微量分光光度計(jì)不可不知的保養(yǎng)常識(shí)。
(1)儀器工作環(huán)境的要求
分光光度計(jì)對(duì)工作環(huán)境的要求如下。
①儀器應(yīng)安放在干燥的房間內(nèi)，使用溫度為5～35℃．相對(duì)濕度不超過85％。
②儀器應(yīng)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上，且避免強(qiáng)烈的振動(dòng)或持續(xù)的振動(dòng)。
③室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)，且應(yīng)避免直射日光的照射。
④電扇不宜直接向儀器吹風(fēng)，以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。
⑤盡量遠(yuǎn)離高強(qiáng)度的磁場(chǎng)、電場(chǎng)及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。
⑥供給儀器的電源電壓為AC 220V±22V，頻率為50Hz±1Hz，并必須裝有良好的接地線。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩(wěn)壓器或交流恒壓穩(wěn)壓器，以加強(qiáng)儀器的抗干擾性能。
⑦避免在有硫化氫等腐蝕性氣體的場(chǎng)所使用。
(2)儀器的日常維護(hù)和保養(yǎng)
①光源。光源的壽命有限，為了延長(zhǎng)光源使用壽命，在不使用儀器時(shí)不要開光源燈，應(yīng)盡量減少開關(guān)次數(shù)。在短時(shí)問的工作間隔內(nèi)可以不關(guān)燈。剛關(guān)閉的光源燈不能立即重新開啟。儀器連續(xù)使用時(shí)間不應(yīng)超過3h。若需長(zhǎng)時(shí)間使用，hao間歇30min。如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定，應(yīng)及時(shí)更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置，不要用手直接接觸窗口或燈泡，避免油污沾附。若不小心接觸過，要用無水乙醇擦拭。
②單色器。單色器是儀器的核心部分，裝在密封盒內(nèi)，不能拆開。選擇波長(zhǎng)應(yīng)平衡地轉(zhuǎn)動(dòng)，不可用力過猛。為防止色散元件受潮生霉，必須定期更換單色器盒干燥劑(硅膠)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色，應(yīng)立即更換。
③吸收池。必須正確使用吸收池，應(yīng)特別注意保護(hù)吸收池的兩個(gè)光學(xué)面。
④檢測(cè)器。光電轉(zhuǎn)換元件不能長(zhǎng)時(shí)間曝光，且應(yīng)避免強(qiáng)光照射或受潮積塵。
⑤當(dāng)儀器停止工作時(shí)，必須切斷電源。
⑥為了避免儀器積灰和沾污，在停止工作時(shí)，應(yīng)蓋上防塵罩。
⑦儀器若暫時(shí)不用要定期通電，每次不少于20～30min，以保持整機(jī)呈干燥狀態(tài)，并且維持電子元器件的性能。
超微量分光光度計(jì)是一類很重要的分析儀器 ,無論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測(cè)、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門 ,紫外可見分光光度計(jì)督有廣泛而重要的應(yīng)用。
超微量分光光度計(jì)主要結(jié)構(gòu)
各種型號(hào)的超微量分光光度計(jì)基本結(jié)構(gòu)都相同，由如下五種部分組成：
1)光源(鎢燈、鹵鎢燈，氫弧燈，氘燈、氙燈或激光光源);
2)單色器(濾光片、棱鏡、光柵、全息柵);
3)樣品吸收池;
4)檢測(cè)系統(tǒng)(光電池、光電管、光電倍增管);
5)信號(hào)指示系統(tǒng)(檢流計(jì)、微安表、數(shù)字電壓表、示波器、微處理機(jī)顯像管)。
光源-單色器-樣品吸收池-檢測(cè)系統(tǒng)-信號(hào)指示系統(tǒng)。
紫外可見分光光度計(jì)來自于美國(guó)，產(chǎn)品包含光源，單色器，吸收池，檢測(cè)器和顯 示器等，它是一款對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性，定量以及結(jié)構(gòu)分析的儀器。這款儀器和人們常 用的可見光光度計(jì)有有很大的區(qū)別，除了波長(zhǎng)范圍，使用光源都不一樣等，價(jià)格也 是后者要要貴一些；平時(shí)的使用和注意事項(xiàng)不一樣的，今天就先來學(xué)習(xí)一下紫外可見分光光度計(jì)使用方法： 1.試驗(yàn)中所用的量瓶、移液管均應(yīng)經(jīng)檢定校正、洗凈后使用。 2.使用的石英吸收池必須潔凈。用于盛裝樣品、參比及空內(nèi)溶液的吸收池，當(dāng)裝 入同一溶劑時(shí)，在規(guī)定波長(zhǎng)測(cè)定吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配 對(duì)使用，否則必須加以校正。 3.取吸收池時(shí)，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。裝盛樣品溶液以池休積的4/5為度，使用 揮發(fā)性溶液吋應(yīng)加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應(yīng)無殘留溶劑。 為防止溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)殘留在池子的透光面，可先用蘸有空白溶劑的擦鏡紙擦拭， 然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放入樣品室時(shí)應(yīng)注意每次放入方向相同。使用后用 洗液及水沖洗干凈，晾干防塵保存，吸收池發(fā)現(xiàn)污染不易洗凈時(shí)可用硫酸發(fā)煙硝酸(3 ：1V/V)混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用重鉻酸鉀清潔液清洗時(shí)，吸收池不貧在 清潔液中長(zhǎng)時(shí)間浸泡，否則清潔液中的重鉻酸鉀結(jié)晶會(huì)損壞吸收池的光學(xué)表面，并 應(yīng)充分甩水沖洗，以防重鉻酸鉀吸附于吸收池表面。 4.測(cè)定前應(yīng)先檢查所用的溶劑在測(cè)定供試品所用的波長(zhǎng)附近是否符合要求，可用 lcm石英吸收池盛溶劑以空氣為空白（即參比光路中不放置任何物質(zhì))測(cè)定其吸收度 ，應(yīng)符合規(guī)定。 5.稱量應(yīng)按藥典規(guī)定要求。配制測(cè)定溶液時(shí)稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少，轉(zhuǎn)移稀釋 時(shí)所取容積一般應(yīng)不少于5cm。含量測(cè)定供試品應(yīng)稱取2份，如為對(duì)照品比較法，對(duì) 照品一般也應(yīng)稱取2份。吸收系數(shù)檢查也應(yīng)稱取供試品2份，平行操作，每份結(jié)果對(duì) 平均值的偏差應(yīng)在±0.5%以內(nèi)。作鑒別或檢查可取樣品1份。 6.供試品測(cè)定溶液的濃度，除各該品種項(xiàng)下已有注明者外，供試品溶液的吸收度 以在0.3~0.7之間為宜，吸收度讀數(shù)在此范圍誤差較小，并應(yīng)結(jié)合所用儀器吸收度線 性范圍，配制合適的讀數(shù)濃度。 7.選用儀器的狹縫譜帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測(cè)得的吸收度值 會(huì)偏低，狹縫寬度的選擇應(yīng)以減小狹縫寬度吋供試品的吸收度不揮增加為準(zhǔn)，對(duì)于 紫外測(cè)定的部分品種，可以使用2nm縫寬，但對(duì)某些品種如青霉素鉀及鈉的吸收度 檢查則需用lnm縫寬或更窄，否則其264nm的吸收度會(huì)偏低。 8.測(cè)定時(shí)除另有規(guī)定者外，應(yīng)在規(guī)定的吸收峰±2nm處，再測(cè)幾點(diǎn)的吸收度，以核 對(duì)供試品的吸收峰位置是否正確，并以吸收度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)，除另有規(guī) 定外吸收度最大波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)±lnm以內(nèi)，否則應(yīng)考慮試樣的同一 性、純度以及儀器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度 9.除另有規(guī)定外，比色法所用的空內(nèi)系指用同休積的溶劑代替對(duì)照品或供試品溶 液，然后依次加入等量的相應(yīng)試劑，并用同樣方法處理。 10.當(dāng)吸收度和濃度關(guān)系不呈線性關(guān)系時(shí)，應(yīng)取數(shù)份梯度量的對(duì)照濃度，用溶劑補(bǔ) 充至同一休積，顯色后測(cè)定各份溶液的吸收度，然后以吸收度與相應(yīng)的濃度繪制標(biāo) 準(zhǔn)曲線，再根據(jù)供試品的吸收度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出其含量。
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