泵是安捷倫液相色譜儀的核心，泵將流動(dòng)相從溶劑瓶輸送到液相流路系統(tǒng)中，并要在高壓下保持流量和壓力的穩(wěn)定。泵的狀態(tài)正常是液相色譜準(zhǔn)確分析的基礎(chǔ)，所以平日一定要重視對泵的維護(hù)。下面就安捷倫液相色譜儀1220泵的日常維護(hù)進(jìn)行簡要的介紹。
安捷倫液相色譜儀1220
1.安捷倫液相色譜儀-流動(dòng)相的準(zhǔn)備
為了防止顆粒性物質(zhì)對泵組件的磨損，流動(dòng)相（特別是水相）應(yīng)該新鮮配置并且過濾。上機(jī)前對流動(dòng)相進(jìn)行適當(dāng)?shù)某暶摎?，以保證更好的在線脫氣和在線混合的效果。
2.安捷倫液相色譜儀-比例閥溶劑通道的分配
四元泵的比例閥有A、B、C、D四個(gè)通道，建議將鹽溶液接在下面的通道（A或D），將有機(jī)溶劑接在上面的通道（B 或C）上,也就是有機(jī)通道在鹽溶液通道的上面。且建議用水定期沖洗所有比例閥通道除去可能在閥口析出的鹽結(jié)晶。
3.安捷倫液相色譜儀-過濾白頭的維護(hù)
過 濾白頭位于排氣閥內(nèi)，是一種聚四氟乙烯材質(zhì)的微孔過濾芯，用于過濾流動(dòng)相中的微粒，是經(jīng)常需要維護(hù)的地方。當(dāng)系統(tǒng)壓力有異常增高時(shí)，首先需要檢查過濾白頭 是否阻塞了。判斷的方法是：打開排氣閥，以純水作流動(dòng)相，將流速設(shè)為5mL/min，如果泵壓超過10bar，則說明過濾白頭需要更換了。對過濾白頭的預(yù) 防性維護(hù)通?？梢允?/span>1~2個(gè)月更換1次，更換時(shí)同時(shí)檢查一下過濾白頭前面的密封金墊，如果發(fā)現(xiàn)變形，也應(yīng)及時(shí)更換。 如果過濾白頭更換過于頻繁，則需要認(rèn)真檢查一下流動(dòng)相的品質(zhì)，確保流動(dòng)相上機(jī)前過濾，確保使用了合適的過濾膜。如果流動(dòng)相有長菌現(xiàn)象，除了配置新的溶劑，還應(yīng)對相應(yīng)的溶劑管線和脫氣機(jī)通道進(jìn) 行徹底的清洗。
4.安捷倫液相色譜儀-柱塞桿與柱塞密封圈的維護(hù)
柱塞密封圈套在柱塞桿上用于隔離泵與外界，工作時(shí)，它和柱塞桿進(jìn)行頻 繁的往復(fù)摩擦，使用一段時(shí)間后，會(huì)有一定的磨損，因而密封圈需要定期更換以保證系統(tǒng)的密封性。更換活塞密封墊時(shí)檢查活塞桿上是否有劃痕。有劃痕的活塞將導(dǎo) 致輕度滲漏，并降低密封墊的使用壽命。應(yīng)盡早更換有劃痕的活塞。
柱塞密封圈有反相和正相之分，反相密封圈為黑色，石墨Teflon材質(zhì)；正相呈橘黃色，聚乙烯材質(zhì)，更適用于正相溶劑。1100/1200標(biāo)配的是反相密封圈，正相應(yīng)用時(shí)，需要更換為正相密封圈。
鹽 溶液對柱塞密封圈的壽命有著很大的影響，使用有鹽溶液作為流動(dòng)相的體系時(shí)，要注意鹽溶液通道的清洗，千萬不能讓鹽溶液在系統(tǒng)中過夜，常常一個(gè)晚上析出的鹽 粒就會(huì)造成系統(tǒng)堵塞，對泵產(chǎn)生較大的損害。為了延長密封圈和柱塞桿的壽命，在經(jīng)常使用較高濃度的緩沖鹽溶液的情況下，建議安裝柱塞清洗附件。柱塞清洗的原 理在于：柱塞泵在工作時(shí)，雖然有密封圈密封，但由于毛細(xì)作用，還是會(huì)有一些流動(dòng)相滲入到密封圈與柱塞桿之間。如果流動(dòng)相中有緩沖鹽，當(dāng)柱塞桿壁上的溶劑揮 發(fā)掉后，極細(xì)小的鹽粒留了下來。這樣的鹽粒就象砂紙一樣磨損著柱塞桿和柱塞密封圈，會(huì)大大降低柱塞桿和密封圈的壽命。柱塞清洗附件是在柱塞桿的中間加入了 一個(gè)可以有水流過的腔體，通過水不斷的流動(dòng)，就可以帶走滲進(jìn)來的鹽溶液，防止了鹽粒的析出，保護(hù)了柱塞桿和柱塞密封圈。通常我們往柱塞清洗的水里加入 10％的異丙醇，可以減小水的張力，便于清洗液流動(dòng)，并且抑制長菌。但有一點(diǎn)要注意的是，裝有柱塞清洗附件的泵頭，清洗液流量可以很小（如沒分鐘幾滴）， 但一定不要讓清洗通道里干涸，如果水流光了，應(yīng)該盡快換上新的溶液。否則會(huì)減少柱塞桿和密封圈的壽命。
5.安捷倫液相色譜儀-主動(dòng)閥的維護(hù)
主 動(dòng)閥是流動(dòng)相進(jìn)入泵體的門戶。如果我們發(fā)現(xiàn)流量為零，流量不穩(wěn)，或泵壓波動(dòng)特別大，常常都是因?yàn)橹鲃?dòng)閥漏或是堵了。主動(dòng)閥里面裝有一個(gè)小的單向閥芯，我們 將其取下，在異丙醇內(nèi)超聲清洗一下，一般能解決這樣的問題。如果超聲不能解決問題的話，可以更換該閥芯。對于經(jīng)常使用緩沖鹽體系的用戶，手頭常備一個(gè)這樣 的閥芯是非常有用的，往往可以及時(shí)解決問題，大大的降低停機(jī)帶來的損失。
6.安捷倫液相色譜儀出口閥的維護(hù)
出口閥內(nèi)部也有，如果有鹽?；蚱渌s質(zhì)滲入其中，也會(huì)造成出口閥的堵或漏，常常表現(xiàn)為壓力的異常波動(dòng)。通常我們可以用異丙醇或60度左右的熱水沖洗系統(tǒng)，如果無效，在異丙醇中超聲清洗它常常會(huì)解決這樣的問題。
液相色譜應(yīng)選擇從以下幾個(gè)方面考慮：
1．漂移
是指儀器穩(wěn)定后一段時(shí)間內(nèi)基線漂離原點(diǎn)的距離，通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢。高品質(zhì)的儀器能在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定，從而在一定程度上提高了分析效率。
2．系統(tǒng)的，整體開發(fā)
這里指的是儀器的整體開發(fā)，是一個(gè)完整的系統(tǒng)。目前市場上有這個(gè)現(xiàn)象，說我的泵是進(jìn)口的，或者是檢測器怎么好，用了什么很多的進(jìn)口件組裝等等。其實(shí)這是個(gè)誤區(qū)。液相色譜是個(gè)復(fù)雜的系統(tǒng)，不是整體開發(fā)的，各項(xiàng)指標(biāo)之間、軟件和硬件、硬件和硬件等都不匹配，整體水平不會(huì)高到哪里去，而且在售后服務(wù)方面對用戶也是不負(fù)責(zé)任的。
整體開發(fā)的主要優(yōu)點(diǎn)有：各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)統(tǒng)一、儀器各單元的通信協(xié)調(diào)、能夠建立一個(gè)整體的數(shù)字化評價(jià)系統(tǒng)、體現(xiàn)了企業(yè)的科技及開發(fā)實(shí)力。
3．操作方便：
操作方便性無論是對新手還是成熟的用戶都是很重要的。操作越簡單，有利于提高分析效率，也為以后分析方法的拓展提供有力的幫助。上海伍豐科學(xué)儀器有限公司的WS-100工作站軟件實(shí)現(xiàn)了真正的智能化操作。它摒棄了以往工作站軟件只能起到數(shù)據(jù)處理的理念，率先在國內(nèi)推出了集控制與后處理于一身的軟件，在操作使用上給用戶帶來了極大的方便。
是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。CL=2×Nd×C/H（CL ：最小檢測濃度 Nd:噪音 C：樣品濃度最小檢測濃度 H：樣品峰高）由上式可見，最小檢測濃度是和噪音成正比的，噪音越大，最小檢測濃度就越大，靈敏度就越低。某些廠家回避了這個(gè)指標(biāo)，說明他們不愿在最小檢測濃度的基礎(chǔ)上去比較噪音。
4．噪音
是指由儀器的電器元件、溫度波動(dòng)、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動(dòng)。噪音的大小直接關(guān)系到儀器的檢測靈敏度，噪音越大，檢測的靈敏度就越低。對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好，否則噪音過大將會(huì)導(dǎo)致基線不穩(wěn)，甚至影響分析結(jié)果。
5．定性定量重復(fù)性
主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標(biāo)，這對于分析樣品來說是非常重要的。好的儀器其穩(wěn)定性應(yīng)該是十分優(yōu)秀的，這就要求多次進(jìn)樣保留時(shí)間及含量的一致性，這樣做出來的結(jié)果才能使人信服。
有的朋友會(huì)認(rèn)為這些指標(biāo)好像都是檢測器的。對的，但是就前面所說條件是要放在整個(gè)回路和系統(tǒng)里去看去比較。例如：泵的脈動(dòng)會(huì)直接影響噪音指標(biāo)，泵的流量準(zhǔn)確度、精確度指標(biāo)，以及密封性不好也會(huì)影響相關(guān)指標(biāo)。所以要系統(tǒng)地看指標(biāo)。例如：某些公司在公布的指標(biāo)中，噪音和漂移指標(biāo)寫的條件是空池或有的干脆不寫。這個(gè)指標(biāo)只考核了UV檢測器光學(xué)和電氣的特性，與實(shí)際情況相差甚遠(yuǎn)，并沒有考驗(yàn)泵的壓力脈動(dòng)，液流回路的阻尼和UV檢測器流通池的性能。所以我們認(rèn)為從以上的主要指標(biāo)中可以反應(yīng)出儀器的一些真實(shí)水平。
高效液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)。
1.進(jìn)樣系統(tǒng) 一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作，進(jìn)樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。
2.輸液系統(tǒng) 該系統(tǒng)包括高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強(qiáng)為l.47～4.4X107Pa，流速可調(diào)且穩(wěn)定，當(dāng)高壓流動(dòng)相通過層析柱時(shí)，可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng)，可加快其在柱中的移動(dòng)速度，這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動(dòng)相貯存錯(cuò)和梯度儀，可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強(qiáng)度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個(gè)基團(tuán)的差別或是同分異構(gòu)體)都能獲得有效分離。
3.分離系統(tǒng) 該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10～50cm(需要兩根連用時(shí)，可在二者之間加一連接管)，內(nèi)徑為2～5mm，由"優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，住內(nèi)裝有直徑為5～10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構(gòu)成).固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強(qiáng)度高的樹脂或硅膠構(gòu)成，它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔徑可達(dá)1000?)和比表面積大的特點(diǎn)，加之其表面經(jīng)過機(jī)械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣)，或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機(jī)化合物。因此，這類固定相對結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后，就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分離出來。
另外，固定相基質(zhì)粒小，柱床極易達(dá)到均勻、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)?；|(zhì)粒度小，微孔淺，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據(jù)柱效理論分析，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就越大。這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小，會(huì)提高分辨率的道理。 再者，高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C，通過改善傳質(zhì)速度，縮短分析時(shí)間，就可增加層析柱的效率。
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