液相色譜作為一種高精密儀器，如果在使用過程中不按照正確方式操作的話，就容易導致一些棘手的小問題。其中常見的就是柱壓問題、漂移問題、峰型異常問題。
【液相色譜儀系統(tǒng)】液相色譜儀主要由貯液瓶、泵、進樣器、柱子、柱溫箱、檢測器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。對于整個系統(tǒng)而言，柱子、泵和檢測器是核心部件同時也是易出問題的主要部位。
常見問題及解決方法
一、柱壓問題
柱壓問題是使用液相色譜過程中需要密切注意的地方，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個恒定值而是指壓力波動范圍在345kPa 以內(nèi)或在50PSI之間(在使用梯度洗脫時，柱壓平穩(wěn)緩慢的變化是允許的)。壓力過高、過低都屬于柱壓問題。
1壓力過高這是液相在使用中常見的問題，指的是壓力突然升高，
1、一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時，我們應該分段進行檢查。
(1).首先斷開真空泵的入口處，此時PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法：用30%的硝酸浸泡半個小時，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，在檢查;
(2).打開Purge閥，使流動相不經(jīng)過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞。處理方法：將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI以下，過濾白頭正常，在檢查;
(3).把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質導致堵塞，則要用比現(xiàn)在流動相更強的流動相沖至壓力正常。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上，用流動相沖洗柱子。這時，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以盡量少用。問題無法解決可考慮更換色譜柱。
2、流速設定不正確：可重新設定正確流量。
3、流動相配比不正確：不同配比的流動相其黏度系數(shù)不相同，較高黏度的流動相相應的系統(tǒng)壓力也大，如果可能可更換黏度較小的溶劑或重新設定配比。4、系統(tǒng)壓力零點漂移：調節(jié)壓力傳感器的零點。
2壓力過低
1、一般是由于系統(tǒng)泄漏，處理方法：尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。拆下柱子加適當力擰緊或襯四氟薄膜。
2、泵里進了空氣，但此時表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn)，忽高忽低，更嚴重一點會導致泵無法吸上液體。處理方法：打開Purge閥，用3~5ml/min的流速沖洗，如果不行，則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。
3、無流動相流出：檢查儲液瓶中有無流動相，沉子是否浸在流動相中，泵是否運行。
4、參比閥未關閉：將流速降低后關閉參比閥。一般降至0.1～0.2mL/min后關閉參比閥。
基線問題
1基線漂移基線漂移是色譜工作者普遍遇到的問題,在實際工作中,我們經(jīng)常能遇到基線漂移的情況,特別是在梯度洗脫的時候,基線漂移是常有的事。一般說來，機器剛起動時，基線容易漂移，大概要30min的平衡時間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長，但如果你在實驗過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，則你要考慮下面的原因：
1、柱溫波動 控制好柱子和流動相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調對著柱溫箱。
2、(即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。)控制好柱子和流動相的溫度,在檢測器之前使用熱交換器。
3、流通池被污染或有氣體 用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池(應該斷開柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
4、紫外燈能量不足 更換新的紫外燈
5、流動相污染、變質或由低品質溶劑配成。 檢查流動相的組成，使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑。
2基線噪音
對于紫外檢測器, 氘燈光源打開后要預熱30 min以上, 基線才能穩(wěn)定。噪聲是指與被測物無關的檢測器輸出信號的隨機擾動變化, 分短期噪聲和長期噪聲兩種。
氘燈用的過久, 接近壽命期時( 氘燈的壽命約1 000 h) , 會使基線噪音明顯增加, 應及時更換氘燈。除光源外, 流路中的氣泡也會產(chǎn)生噪音。對于判斷基線噪聲增大是由于光源燈的老化還是來自流路中的氣泡的問題, 可將泵關上, 繼續(xù)走基線, 如果噪聲立即停止, 基線呈一條直線, 說明基線噪聲來自流動相中的氣泡, 應設法排氣; 若停泵后仍有噪音出現(xiàn), 應考慮是燈的問題。
基線噪音(規(guī)則的)
產(chǎn)生基線噪音的原因有：在流動相、檢測器或泵中有空氣;漏液;流動相混合不完全;溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱);在同一條線上有其他電子設備;泵振動。
了避免基線噪音,在正式進樣之前,需要對流動相脫氣;沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣;檢查管路接頭是否松動;泵是否漏液;是否有鹽析出和不正常的噪音,如有必要,更換泵密封;用手搖動使溶劑混合均勻或使用低粘度的溶劑減少差異或加上熱交換器;有其他電子設備時斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正;泵振動時在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器。
基線噪音(不規(guī)則的)
(1) 漏液：檢查接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封,檢查流通池是否漏液。
(2) 流動相污染、變質或由低質溶劑配成：檢查流動相的組成。
(3) 流動相各溶劑不相溶：選擇互溶的流動相。
(4) 檢測器/記錄儀電子元件的問題：斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正。
(5) 系統(tǒng)內(nèi)有氣泡：用強極性溶液清洗系統(tǒng);檢測器內(nèi)有氣泡,清洗檢測器,在檢測器后面安裝背景壓力調節(jié)器。
(6) 流通池污染(即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音) :用硝酸清洗流通池;
(7) 檢測器燈能量時不足更換燈;
(8) 色譜柱填料流失或阻塞:更換色譜柱。
(9) 流動相混合不均勻或混合器工作不正常:維修或更換混合器,在流動相不走梯度時,不建議使用泵的混合裝置。
保留時間
保留時間的漂移往往由柱老化引起,而柱老化不可能引起保留時間的無規(guī)律波動。事實上,保留時間漂移的多半原因是由于不同機理的色譜柱老化,如固定相流失(例如通過水解) ,色譜柱污染(由樣品或流動相所致)等。保留時間漂移的幾種常見的原因和解決方法如下：
1色譜柱平衡
如果觀察到保留時間漂移,首先應考慮色譜柱是否已經(jīng)平衡。在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱。通常平衡需要10～20個柱體積的流動相,但如果在流動相中加入少量添加劑(如離子對試劑)則需要相當長的時間來平衡色譜柱。流動相污染也可能是原因之一。溶于流動相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上,從而造成保留時間的漂移。應注意:水是很容易污染的流動相成分。
2固定相穩(wěn)定性
固定相的穩(wěn)定性都是有限的,即使在推薦的pH范圍內(nèi)使用,固定相也會慢慢水解。例如,硅膠基質在pH4時水解穩(wěn)定性好,水解速度與流動相類型和配體有關。雙官能團配體和三官能團配體比單官能團配體的鍵合相要穩(wěn)定;長鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩(wěn)定;烷基鍵合相比氰基鍵合相穩(wěn)定的多。經(jīng)常清洗色譜柱亦會加速色譜柱固定相的水解。其他硅膠基質鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解,如氨基鍵合相等。
3色譜柱污染
保留時間漂移的另一個常見原因是色譜柱污染。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器,它可以過濾并吸附流動相攜帶的任何物質。污染源可以是:流動相本身,流動相容器,連接管、泵、進樣器和儀器密封墊,以及樣品等。通常通過實驗可判斷污染的來源。樣品中如果存在色譜柱上保留很強的組分,就可能是使保留時間漂移的潛在根源。這些根源通常是樣品基質,如:配藥中的賦形劑,生化樣品(如血清)中的蛋白及類脂類化合物,食品樣品中的淀粉,環(huán)境水樣中的腐殖酸等。通常樣品中的強保留組分具有較高的分子量,在此情況下,保留時間漂移的同時或其后會有反壓的增加,可以通過使用固相提取( SPE)等樣品前處理方法來去除樣品基質的影響,避免色譜柱污染簡單的方法是防患于未然。相比之下,找到問題的所在并設計有效的清洗步驟以去除污染物要困難的多。通常使用在給定色譜條件下的強溶劑,但并非所有污染物都可以在流動相中溶解。如THF可去除反相色譜柱中的許多污染物,但蛋白在THF中就不能溶解, DMSO常常用于去除反相色譜柱中的蛋白。使用保護柱是個非常有效的方法。反沖色譜柱僅是不得已時采用的辦法。
4流動相組成
流動相組成的緩慢變化也是保留時間漂移的常見原因。如流動相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用流動相等,應防止流動相由于蒸發(fā)、反應等等原因造成的變化。
保留時間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個重要標志，同一種東西，兩次的保留時間相差不要超過15s，超過了半分鐘可看做保留時間漂移，就無法進行定性。
峰型異常問題
峰型問題是液相的主要問題，在做液相過程中，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型，對于各種各樣的異常峰，要區(qū)別對待，從主要問題出發(fā)，一個一個加以解決。
1.色譜圖中未出峰
系統(tǒng)未進樣或樣品分解;泵未輸液或流動相使用不正確;檢測器設置不正確;針對以上情況成因作相應調整即可。
2.一個峰或幾個峰是負峰
流動相吸收本底高;進樣過程中進入空氣;樣品組分的吸收低于流動相。
3.所有峰均為負峰
信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒;光學裝置尚未達到平衡。
4.所有峰均為寬峰
系統(tǒng)未達到平衡;溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多;色譜柱尺寸及類型選擇不正確;色譜柱或保護柱被污染或柱效降低;溫度變化造成的影響。
5.所出峰比預想的小
樣品黏度過大;進樣品故障或進樣體積誤差;檢測器設置不正確.定量環(huán)體積不正確;檢測池污染;檢測器燈出現(xiàn)問題。
6.出現(xiàn)雙峰或肩峰
進樣量過大;樣品濃度過高;保護柱或色譜柱柱頭堵塞;保護拄或色譜柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。
7.前伸峰
進樣量或樣品濃度高，溶解樣品的溶劑較流動相極性強;保護柱或色譜柱污染或失效。
①柱溫低：升高柱溫;②樣品溶劑選擇不恰當：使用流動相作為樣品溶劑;③樣品過載：降低樣品含量;④色譜柱損壞：更換柱子。
8.拖尾峰
柱超載，降低樣品量;增加柱直徑采用較高容量的固定相;峰干擾，對樣品進行清潔過濾;調整流動相;硅羥基作用，加入三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相pH值;柱內(nèi)燒結不銹鋼失效，更換燒結不銹鋼;加在線過濾器，對樣品進行過濾;死體積或柱外體積過大，將連接點降至低;盡可能使用內(nèi)徑較細的連接管;柱效下降，更換柱子;采用保護柱，對柱子進行再生。
9.出現(xiàn)平頭峰
檢測器設置不正確;進樣體積太大或樣品濃度太高。
10.出現(xiàn)鬼峰
進樣閥殘余峰，可能為上次樣品的殘余。在每次進完樣后用充足的時間來平衡和清洗系統(tǒng);樣品中存在未知物，改進樣品的預處理;流動相污染，更換新流動相，盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用，隔夜的流動相再次使用時要過濾;盡可能使用HPLC級試劑;流路中有小的氣泡，打開Purge閥，加大流速排除。
11.峰分叉
?、俦Ｗo柱或分析柱污染：取下保護柱再進行分析,如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞,拆下來清洗。如果問題仍然存在,可能是柱子被強保留物質污染,運用適當?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在,入口可能被阻塞,更換篩板或更換色譜柱。②樣品溶劑不溶于流動相改變樣品溶劑,如果可能采取流動相作為樣品溶劑。
12.峰變形
樣品過載，減少樣品載量。
13.早出的峰變形
樣品溶劑選擇不恰當 ①減少進樣體積 ②運用低極性樣品溶劑
14.早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
柱外效應 ①調整系統(tǒng)連接(使用更短、內(nèi)徑更小的管路) ②使用小體積的流通池
15.酸性或堿性化合物的峰拖尾
緩沖不合適①使用濃度50～100 mM的緩沖液②使用Pka等于流動相pH值的緩沖液
16.額外的峰
(1)樣品中有其他組分：正?，F(xiàn)象;
(2)前一次進樣的洗脫峰：①增加運行時間或梯度斜率②提高流速;
(3)空位或鬼峰：①檢查流動相是否純凈 ②使用流動相作為樣品溶劑 ③減少進樣體積。
在日常分析工作中，色譜柱的正確使用和維護十分重要，色譜柱使用是否得當，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。
1、柱子在裝卸、更換時，動作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動，以免柱床產(chǎn)生空隙。
2、如果儀器用來做常規(guī)分析，樣品種類不多，但分析次數(shù)比較多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長柱子的壽命。
3、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會對柱內(nèi)填料產(chǎn)生沖擊力，因此在調節(jié)流速時應該緩慢進行，手動進樣時，進樣閥的轉動不能過緩。
4、應逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/p>
5、使用柱溫箱時，應注意在流動相進入色譜柱后才能開啟柱溫箱升溫。
6、一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。
7、選擇使用適宜的流動相，以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一個預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質被溶解。
8、避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi)，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一個保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經(jīng)常更換。
9、經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質。在進行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右。
10、保存色譜柱時應將柱內(nèi)充滿色譜級的乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置一個晚上或更長時間。
11、色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時應更換濾片或將其取出進行清洗；另一種可能是大分子進人柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
12、在完成分離分析工作之后，不應立即停機，需及時對色譜分析系統(tǒng)進行沖洗，一般30分鐘以上，以除去色譜柱內(nèi)的雜質。
1、高效液相色譜儀的基本工作原理
高效液相色譜儀如圖1所示，是由溶液貯器、高壓泵、進樣系統(tǒng)、色譜分離柱、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)幾部分組成。
高壓泵從溶液貯器中抽走流動相，流經(jīng)整個儀器系統(tǒng)，形成密閉的液體流路。樣品通過進樣系統(tǒng)注入色譜分離柱，在柱內(nèi)進行分離。柱流出液進入檢測器，使已被分離的組分逐一被檢測器收集，并將響應值轉變?yōu)殡娦盘柡蠼?jīng)放大被數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜峰，通過數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對記錄的峰值進行存儲和計算[1]。
液相色譜儀是依靠色譜柱進行分離的。研究證明：物質的色譜過程是指物質分子在相對運動的兩相(液相和固相)中分配“平衡”的過程。液相色譜是以具有吸附性質的硅膠顆粒為固定相，各種洗脫液為流動相。當液體樣品在載體流動相的推動下，在液-固兩相間作相對運動時，由于各組分在兩相中的分配系數(shù)(K)不同，則使各自的移動速度不同，即產(chǎn)生差速遷移。各組分在兩相間經(jīng)過多次分配，從而達到使混合物分離的目的。
2、輸液泵的常見故障及對策：
輸液泵/高壓泵是保證HPLC系統(tǒng)流路暢通、流量精確和壓力穩(wěn)定的重要儀器部件，目前多用往復式恒流柱塞泵，主要由柱塞桿、密封墊圈和兩個單向閥組成，用馬達帶動凸輪驅動柱塞桿作吸液和排液的往復運動。常分為單柱塞泵、并聯(lián)柱塞泵、串聯(lián)柱塞泵和柱塞隔膜泵等類型。流動相混合方式分為低壓混合和高壓混合。常見泵的故障主要有以下幾種，并提供解決的辦法。
2.1單向閥故障 由于球與閥座密封不嚴，液體倒流，造成壓力不穩(wěn)，甚至球與閥座粘在一起阻死。密封不嚴主要是污染或氣泡引起，球與閥座粘連也是由于污染和磨損造成。
為避免單向閥中的寶石球和閥座被污染，流動相應使用HPLC級的溶劑，并且配好的流動相一定要用0.45u濾膜過濾和脫氣。如果泵被微粒污染，可分別用水、甲醇、異丙醇、二氯甲烷依次沖洗。沖洗時應打開泄液閥，最后再用所用的溶液沖洗整個系統(tǒng)。
氣泡進入閥中會緊貼在閥體的一側，使寶石球難返回到閥座，引起倒流，泵的壓力和流速會明顯改變。此時，應立即打開泄液閥，大流量(2ml/min)沖洗泵，直至排除液為直線型。因為甲醇可潤濕泵內(nèi)壁，擠出氣泡，故也可使用脫過氣的甲醇沖洗泵。長期不用的泵或新裝的泵頭應該用甲醇趕氣泡。泵進氣泡也可在泵頭上排氣泡，即用扳手固定住進氣泡的泵頭，擰開輸出管道的壓帽，手動泵送液，可見到氣泡從孔中擠壓出來，直至無氣泡排出將壓帽擰緊。
采取上述辦法仍不能使壓力穩(wěn)定，應考慮是否密封墊壞了？或單向閥磨損、球不光滑等，需更換部件。
2.2泵墊圈故障泵墊圈常見的故障是滲漏和墊圈受損污染系統(tǒng)。液相色譜系統(tǒng)一般情況下不要使用強酸強堿溶液，因為這會損壞密封墊和柱塞桿。密封墊圈與運動著的柱塞桿緊密接觸，可使柱塞在泵頭自由運動而流動相不漏出來，它是液相色譜系統(tǒng)中最易磨損的部件。有條件的實驗室可三個月更換一次墊圈，防止泵系統(tǒng)污染。如果用緩沖鹽作流動相則更會加速墊圈的磨損，應及時沖洗。當墊圈損壞時，表現(xiàn)為：泵壓力不穩(wěn)、泵頭漏液。一旦出現(xiàn)這個現(xiàn)象，應盡快更換新墊圈。
為避免上述故障的發(fā)生，我們在分析工作中應注意以下幾點：
?、?使用超純水(18MΩ.cm)、純度級別較高的試劑和色譜級溶劑配制流動相；
?、?配好的流動相一定要抽濾脫氣，即便儀器有在線脫氣裝置，也可以在上機前進行抽濾。真空抽濾既過濾顆粒也脫了氣泡，非常有效。
?、?泵在起動前一定要通過泄液閥抽凈泵里的空氣。
?、?用緩沖鹽洗脫時，分析結束后一定要用水沖洗泵和整個流路系統(tǒng)，不要讓腐蝕性溶液滯留泵中，最后用有機溶劑充滿系統(tǒng)。
3、色譜分離柱的使用與維護
在前述儀器工作原理部分，我們已經(jīng)指出，液相色譜儀的分離是在色譜分離柱中實現(xiàn)的。我們目前工作中多采用反相色譜柱，如何保護好分離柱減少柱的污染是延長柱壽命的關鍵。
3.1怎樣維護好色譜分離柱
加保護柱(預柱)是保護分離柱的有效辦法。保護柱是根內(nèi)裝填料與分離柱性質相近的短柱，接在分離柱之前，或代替流路過濾器。保護柱的作用是收集和阻塞分離柱口的化學垃圾，這些垃圾如果直接進入分離柱會逐漸堆積在柱頭，最終降低柱效能。保護柱是消耗品，如分析血漿樣品，一般分析50個樣品后需更換新柱芯。
避免高壓沖擊分離柱。一般色譜柱都能承受得起高壓，但經(jīng)不住突然變化的高壓沖擊，這將改變柱床體積，影響柱效。引起高壓沖擊的原因主要有：進樣器的樣品閥的緩慢轉動、泵啟動太快、柱切換等操作。用手動進樣閥時的壓力變化不大，自動進樣閥由于切換較慢，可能會造成壓力沖擊。
合理選擇分離柱。我們知道，選擇色譜分離柱主要根據(jù)兩點，一是根據(jù)待測組分的分子量的大小；二是根據(jù)流動相條件，包括PH值、離子強度和溶劑極性等。傳統(tǒng)硅膠基質的鍵合相柱要求流動相PH值在3-7之間，極端PH值(>8)的流動相能溶解硅膠，使鍵合相流失。而目前利用先進的雜化顆粒技術研制的高純硅膠顆粒填料(如Waters公司的XTerra色譜柱)，集硅膠和多孔聚合物填料的優(yōu)點為一體，使有機硅烷單元取代了相當一部分占據(jù)顆粒內(nèi)部和表面位置的硅羥基，使這種新型填料具有分辨率高、穩(wěn)定性強、PH范圍寬(1-12)的優(yōu)勢，其性能突破了傳統(tǒng)高效液相色譜柱的極限。所以一定要根據(jù)分析的對象、流動相的條件選擇合適的分離柱，茫然時可向公司的技術人員咨詢。
定期沖洗分離柱。每次分析工作結束時，沖洗完緩沖鹽后，最后要過度到用強溶劑沖洗柱子，如可用色譜純甲醇、乙腈沖洗反相C18柱，目的是沖去吸附在柱上的強保留組分。如果用甲醇/水為流動相也應這樣沖洗柱子，在一定程度上可恢復柱效。
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