色譜分析是以假定給定組分的保留值在分離條件不變時保留值恒定為基礎(chǔ)的。對標(biāo)準(zhǔn)的液相色譜程序而言,每個峰都對應(yīng)于一個組分,以標(biāo)準(zhǔn)品與樣品中組分的保留時間相對應(yīng)進(jìn)行鑒別。恒定的保留時間對分析設(shè)計排列的樣品很重要?! ≡谝合?font color="#0268CA">色譜儀分析中常涉及到組分的保留值。保留值發(fā)生改變可使已建立的方法不能繼續(xù)進(jìn)行下去,或引起分析周期太長,或者峰分不開。應(yīng)該找出引起保留值變化的原因。 除上述條件之外,引起保留變化的原因主要包括下列3種: 1.柱-柱之間; 2.日-日或日內(nèi):保留時間可能隨時間而變化,如溫度、柱溫、pH值等對柱性能有影響,通常是所有的峰提前或延遲?! ?.樣品-樣品間:偶爾也有樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間不同,可能是樣品介質(zhì)的影響?! ∫韵轮攸c(diǎn)討論造成日-日間和日內(nèi)保留時間變化的影響因素,它們主要是: a.分離條件控制差 除了色譜柱外,保留是溫度、流動相組成和流速的綜合體現(xiàn),如果有一個條件變化,保留時間也會隨之發(fā)生變化?! .柱平衡慢 流動相組成或溫度變化時,柱在新條件下再平衡需要一定的時間,在柱達(dá)到完全平衡錢不應(yīng)進(jìn)樣?! .柱鈍化 長時間進(jìn)樣,柱會退化,強(qiáng)保留組分被柱不可逆的保留,導(dǎo)致所有組分保留減少。鍵合相層從填料微粒上剝落下來,會導(dǎo)致某些組分的保留增加,而另一組分的保留減少。 d.柱過載和樣品介質(zhì)相互作用 過大的樣品量超出柱的線性范圍,使保留減少。也可能是樣品本身過載,從其它方面影響保留。
高壓輸液泵是液相色譜儀的關(guān)鍵部件,其作用是將流動相以穩(wěn)定的流速或壓力輸送到色譜系統(tǒng)。對于帶在線脫氣裝置的色譜儀,流動相先經(jīng)過脫氣裝置再輸送到色譜柱。輸液泵的穩(wěn)定性直接關(guān)系到分析結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性。
高壓液相色譜儀對高壓輸液泵的基本要求如下:
1、流量準(zhǔn)確可調(diào)
對一般的分析工作而言,流動相的流速在0.5~2mL/min,輸液泵的最大流量一般為5~10mL/min。輸液泵的流量控制精度通常要求小于±0.5%。輸液泵必須能精確地調(diào)節(jié)流動相流量,這樣可以通過電子線路調(diào)節(jié)電極轉(zhuǎn)速或沖程長短來實(shí)現(xiàn)。流量的測定通常采用熱脈沖流量計。
2、耐高壓
高效液相色譜柱是將很細(xì)顆粒的填料,在高壓下填充到柱管中,為了保證流動相以足夠大的流速通過色譜柱,需要足夠高的柱前壓。通常要求泵的輸出壓力達(dá)到30~60MPa的高壓。
3、液流穩(wěn)定
輸液泵輸出的液流應(yīng)無脈動,或配套脈沖抑制器。
4、泵的死體積小
為了快速更換溶劑和適于梯度洗脫,泵的死體積通常要求小于0.5mL。泵的結(jié)構(gòu)材料應(yīng)耐化學(xué)腐蝕。