1、 色譜柱老化的目的：是徹底除去填充物中的殘留溶劑和某些揮發(fā)性的物質(zhì)；另一方面是促進固定液均勻牢固地分布在擔(dān)體的表面上。 而且新的氣相色譜柱必須老化。
2、 方法：在常溫下使用的色譜柱，可直接裝在色譜儀上，接通載氣，沖至基線平穩(wěn)即可使用；如果色譜柱在高溫操作條件下應(yīng)用，則在比操作溫度稍高的溫度下通載氣幾小時至幾十小時，徹底沖出固定液中易揮發(fā)的物質(zhì)，到基線平穩(wěn)后即可投入使用。不同的色譜柱老化方法也不同。具體方法如下：
色譜柱
一、毛細管柱
確保載氣流過毛細管柱 15-30分鐘。
緩慢程序升溫(5º/min)到老化溫度。
zui初老化溫度 ≥ 4 hours。
如果柱子受到污染, 可在推薦的zui高色譜柱溫度低20 ºC的條件下，老化柱子。
一般推薦的老化溫度為：
Tcond = Tmax/2 - Tapp/2 + Tapp
這里:
Tcond = 老化溫度
Tmax = 色譜柱推薦采用的zui高溫度
Tapp = 應(yīng)用中使用的zui高溫度
在老化柱子時，一定不要將毛細管接在檢測器上。應(yīng)將那一端放空，同時將檢測器用悶頭堵上。如果是FID,容許接在上面，但應(yīng)該將檢測器溫度升上去。
二、填充柱
將柱子接通載氣，流速5～10ml/min，在高于使用溫度5～10℃(但必須低于柱子使用限制溫度)下老化8～24小時，目的是去除裝柱時的殘留溶劑，使固定液分布均勻，提高柱效。老化時必須將柱子與檢測器的連接斷開以免污染檢測器
一般不需要買一個專門的色譜柱老化箱，色譜柱老化當(dāng)然放在色譜柱溫箱內(nèi)。
氮氣作為載氣，在色譜管路中是流動的，無論是老化色譜柱還是分析實驗中，氮氣都是放空到空氣中的，色譜檢測器比如FID的噴嘴，本來就是中空的，檢測過程 中燃燒的只是氫氣和助燃氣（空氣或氧氣），氮氣從噴嘴中出來就放空了，所以不存在柱溫箱內(nèi)聚集的問題。還有，在色譜柱老化時，因不需要點火，所以氫氣和空 氣都不用開。
但有另外一種情況，所使用的檢測器是TCD（熱導(dǎo)池檢測器）時，國內(nèi)一般使用氫氣做載氣，這時應(yīng)特別注意，如果柱溫箱內(nèi)載氣流路漏氣，將會在柱溫箱內(nèi)集聚 氫氣，其實氫氣在柱溫箱內(nèi)爆炸的事以前是常有的事。所以如果是這種情況，建議老化色譜柱時更換成氮氣或購買專門的老化箱進行老化。
色譜柱老化的目的：是徹底除去填充物中的殘留溶劑和某些揮發(fā)性的物質(zhì)；另一方面是促進固定液均勻牢固地分布在擔(dān)體的表面上。而且新的氣相色譜柱必須老化?！ ⊙b填好的色譜柱，連接于儀器上后，應(yīng)先試壓，試漏，而后在恒定的溫度下用載氣吹洗數(shù)小時后承受分析，一般稱此為柱子的老化過程。老化的目的是把固定相的殘存溶劑，低沸點雜質(zhì)，低分子量固定液等趕走，使記錄器基線平直，并在老化溫度下使固定液在擔(dān)體表面有一個再分布過程，從而涂得更加均勻牢固。裝填好的色譜柱，經(jīng)過老化一段時間后，柱效及性能均穩(wěn)定了，這樣才可使用?！ ±匣襟E： 1、打開氮氣、氫氣、空氣發(fā)生器的電源開關(guān)，輸出壓力穩(wěn)定在0.4Mpa左右?！ ?、打開色譜儀氣體凈化器的氮氣開關(guān)，當(dāng)色譜儀載氣B的柱前壓上升并穩(wěn)定大約5分鐘后，打開色譜儀的電源開關(guān)?！ ?、設(shè)置各工作部溫度，柱箱初始溫度50℃，)進樣器和檢測器都是250℃。 4、待檢測器溫度升到100℃以上后，打開凈化器上的氫氣、空氣開關(guān)，色譜儀的氫氣穩(wěn)定在0.1Mpa，空氣壓力為0.15Mpa左右，觀察基線在氫火焰點著后的電壓值應(yīng)高于點火之前?！ ?、顯示屏左下方應(yīng)有藍字顯示當(dāng)前的電壓值和時間，待基線穩(wěn)定后進樣品并同時點擊“啟動”按鈕或按一下色譜儀旁邊的快捷按鈕，進行色譜數(shù)據(jù)分析。分析結(jié)束時，點擊“停止”按鈕，數(shù)據(jù)即自動保存。 6、首先關(guān)閉氫氣和空氣氣源，使氫火焰檢測器滅火。
影響色譜柱壽命和其它問題的因素很多，而有些因素是操作者很難控制的，如果被分析的樣品(如分析生物樣品)，怎么凈化樣品也是“臟"的，對于色譜柱的影響是非常大的。然而采取下列措施后，在多數(shù)情況下總能夠人為地減少色譜柱上故障，達到延長壽命的目的。
色譜柱預(yù)防及維護—避免高壓沖擊
一般色譜柱都能經(jīng)得起高壓，但經(jīng)不起突然變化的高壓沖擊。引起高壓突然沖擊，主要是因樣品閥的緩慢轉(zhuǎn)動、泵起動快、柱切換操作等。轉(zhuǎn)動六通進樣閥時從泵到柱的液流會瞬時切斷。在閥的泵側(cè)壓力升高，在閥的柱側(cè)壓力降低(變化超過20%)。閥轉(zhuǎn)到底后壓力突然沖擊一下恢復(fù)正常。手動進樣閥的變化不大，自動進樣閥比較慢，可能造成壓力沖擊，可用氦氣代替空氣驅(qū)動進樣閥。因氮壓縮系數(shù)小。另外泵起動不應(yīng)過快，可分步操作。如用3mL/min流速，先從lmL/min到2mL/min，然后再3mL/min，每個間隔應(yīng)大于20s。柱切換技術(shù)的應(yīng)用也很廣泛，切換過程中在色譜柱的入口處壓力在零到很大數(shù)字之間變化，會很快使柱報廢。
色譜柱預(yù)防及維護—分離條件
多數(shù)色譜柱有很寬的試驗條件范圍，但具體應(yīng)用又受到限制，主要是pH值、柱溫和流動相的選擇。硅膠為基質(zhì)的鍵合相要求PH在2.5～7之間，極端pH的流動相能“溶解"硅膠，使鍵合相流失。結(jié)果非堿性組分的保留不斷減少，堿性組分的保留增加，引起堿性組分峰變寬。如果一定要用高或低pH的流動相，可加預(yù)柱(飽和柱)。預(yù)柱裝在泵和進樣閥之間，用分析柱相同的填料填裝，或者用普通硅膠。硅膠飽和了流動相，減少了分析柱填料的損失。預(yù)柱不要求柱效高，用價格低的一般硅膠疏松地填裝，按期檢查硅膠的溶解情況。用預(yù)柱也有不利的影響，即新流動相難以平衡，保留時間不穩(wěn)定或穩(wěn)定慢。使用了預(yù)柱一定要加流路過濾器，以防止硅膠微粒引起的麻煩。以硅膠為基質(zhì)的柱和陰離子交換柱超過60℃后，會增加對流動相中化學(xué)物質(zhì)的吸附。在高溫下用小顆粒柱引起柱床塌陷，降低柱效，改變峰形。在40℃以上使用3μm柱，70℃以上使用5μm柱，會使值降低50%。
色譜柱預(yù)防及維護—加流路過濾器和保護柱
流路過濾器緊靠進樣閥后面，位于分析柱前。0.5μm燒結(jié)不銹鋼片夾在死體積很小的套子中，擋住來源于樣品和進樣閥墊圈的微粒入柱。因為每個樣品都過濾既費事又帶來誤差，樣品量少過濾更困難，因此流路上裝過濾器是比較省事的辦法。也可以在流路加上保護柱，放在流路過濾器和分析柱之間，或者代替流路過濾器。保護柱的使命是收集阻塞色譜柱進口的來自樣品的化學(xué)“垃圾"。這種垃圾最終降低柱效能。保護柱是消耗品，分析50～100個比較臟的樣品之后就要調(diào)換新的。保護柱應(yīng)該是小體積，用分析柱的同種填料填裝。保護柱使用得當(dāng)，對分離無影響，好像未裝保護柱一樣。有些廠商的商品將保護柱和流路過濾器連在一個單元內(nèi)，使用起來非常方便。自己填裝保護柱都是用短柱、不超過3cm長，內(nèi)徑2～3mm，用較大粒度的填粒(15～20μm)干法填裝，會使分析柱效略微有所降低。
色譜柱預(yù)防及維護—用強溶劑定期沖洗色譜柱
每次工作結(jié)束，用強溶劑沖洗柱是良好的習(xí)慣。可用甲醇、乙腈沖反相柱，沖去留在柱上的強吸附組分。用甲醇水為流動相時也應(yīng)沖洗。沖洗的程序在以下章節(jié)中介紹。柱頭的燒結(jié)不銹鋼濾片，要求平整，死體積小，孔徑適當(dāng)(2～5μm)。過濾片選擇不好會改變色譜峰形，增加阻力或起不到阻擋污染物的作用(填料很快變色)。
色譜柱預(yù)防及維護—凈化樣品
用溶劑溶解的樣品，多數(shù)組分在一定的時間內(nèi)能完全從柱中流出來，不會造成危害。有些樣品可能含有微粒物質(zhì)，樣品中的某種組分(如蛋白質(zhì))在柱頭上沉積下來，組分在固定相上保留很強，溶劑帶走柱填料等，這些都會造成柱效能下降或?qū)χ鶋勖挠绊?，有必要采取措施防止柱變壞?/p>
如在光線照射下觀察樣品是渾濁的或帶有乳白色，進樣前必須要過濾．雖然流路上裝有過濾器和保護柱，但不能代替樣品的前處理，樣品中過多的微粒會使過濾器和保護柱超載，很快阻塞，或者微粒進入分析柱，所以在進樣前必須過濾樣品。
若懷疑樣品與流動相混合有沉淀而對色譜柱有阻塞，應(yīng)先試驗一下，看樣品溶液加入流動相中有無變渾或乳白色出現(xiàn)。如果進樣后壓力突然增加而后又慢慢減小，表明樣品中有微?；虬l(fā)生沉淀。如有沉淀要設(shè)法改變分離條件，包括換樣品溶劑和流動相或處理樣品去掉不溶物質(zhì)。應(yīng)盡量用小體積的樣品。
有些樣品能很強地吸附在柱填料上，這樣會降低塔板數(shù)，改變樣品的保留物質(zhì)外，還要加保護柱，定期清洗色譜柱。有時因為疏忽，用對柱有害的溶劑溶解樣品，比如用6mol/L的氫氧化鈉溶解樣品，這樣的樣品只要進50～100μL到硅膠基質(zhì)柱中，硅膠就很快溶解而使柱報廢。在這種情況下，應(yīng)立即中和樣品，或除去原溶劑中的有害成分。
綜上所述，如何保護良好的柱性能與柱壽命：
1.認(rèn)真閱讀色譜柱使用說明書；
2.使用填充良好的色譜柱；
3.盡量減少壓力波動，避免機械及熱沖擊；
4.使用保護柱及在線過濾器；
5.經(jīng)常以強溶劑沖洗色譜柱；
6.充分過濾樣品及流動相，盡量避免雜質(zhì)微粒與強保留成分；
7.用穩(wěn)定的固定相(C18穩(wěn)定);
8.在中等pH值操作時(6～8)，用有機緩沖溶液；
9.色譜柱使用溫度可以小于40℃；
10.硅膠基質(zhì)的色譜柱，應(yīng)保持流動相的pH值范圍在3.0～8.0；
11.在水流動相與緩沖溶液中加200ppm的疊氮鈉；
12.流動相中含有緩沖溶液，應(yīng)注意用95：5的水及有機溶劑過濾，有機溶劑不能低于5%；
13.貯存時，沖洗掉鹽和緩沖液，用純有機溶劑流動相保存。
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