氣相色譜儀是指將分析樣品在進(jìn)樣口中氣化后,由載氣帶入色譜柱,通過(guò)對(duì)欲檢測(cè)混合物中組分有不同保留性能的色譜柱,使各組分分離,依次導(dǎo)入檢測(cè)器,以得到各組分的檢測(cè)信號(hào)的儀器。
氣相色譜儀除一般用于對(duì)樣品定量和定性分析外,還能測(cè)定樣品在固定相上的分配系數(shù)、活度系數(shù)、分子量和比表面積等物理化學(xué)常數(shù)。
氣相色譜儀在使用中應(yīng)注意三個(gè)重要方面的因素:
1、氣相色譜儀氣體純度的因素:
氣相色譜儀使用氣源的純度要求必須在99.99%以上,但是許多操作者對(duì)于不同氣相色譜儀檢測(cè)器要求不同氣源純度的情況沒有足夠的重視。在使用中,有可能因氣源純度不夠而導(dǎo)致氣相色譜儀檢測(cè)器檢測(cè)基線和限高不穩(wěn)定。例如使用純度為98%的氫氣作為氣相色譜儀檢測(cè)器的燃?xì)鈿庠?,在檢測(cè)器的104MΩ靈敏度擋位上使用時(shí),可能由于氫氣純度不夠而導(dǎo)致測(cè)器檢基線嚴(yán)重不穩(wěn),就好像有永遠(yuǎn)顯示不完的波峰。載氣純度不高含有微量氧時(shí)就會(huì)影響到毛細(xì)管柱的使用壽命。
2、氣相色譜儀氣流比例的選擇的因素:
在使用氣相色譜儀FID氫火焰離子檢測(cè)器對(duì)樣品進(jìn)行分析時(shí),需要N2-H2-Air火焰被點(diǎn)燃后轉(zhuǎn)化為富氧焰,即空氣應(yīng)該過(guò)量以確保氫氣完全燃燒,三種氣體的較佳比例為Air:H2=6~8、:1,N2:H2=1:0.85~1、或空氣量應(yīng)該更大。在此條件下的檢測(cè)器穩(wěn)定性和靈敏度高,能夠保證作出的定量校正因子可靠。
3、環(huán)境條件的因素:
氣相色譜儀對(duì)溫度環(huán)境的要求并不特殊,一般在5~35℃的室溫條件下即可滿足操作要求,對(duì)于濕度環(huán)境一般要求在20%~85%為宜。在高濕度的地區(qū),使用某些型號(hào)的氣相色譜儀價(jià)格時(shí),會(huì)因?yàn)榄h(huán)境濕度大而導(dǎo)致儀器的絕緣性能下降,若在高靈敏度擋位操作響應(yīng)值則會(huì)下降。工作人員在使用儀器時(shí)遇到上述現(xiàn)象應(yīng)該采取必要的措施。
高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支,以液體為流動(dòng)相,采用高壓輸液系統(tǒng),將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內(nèi)各成分被分離后,進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。
高效液相色譜法:
特指一種用液體為流動(dòng)相的色譜分離分析方法。它在經(jīng)典色譜理論的基礎(chǔ)上,采用了高壓泵、化學(xué)鍵合固定相高效分離柱、高靈敏專用檢測(cè)器等新實(shí)驗(yàn)技術(shù)建立的一種液相色譜分析法。
高壓:150-350*105Pa
高效:大于30000塔板/米
高靈敏:10-9g(紫外檢測(cè))、10-11g(熒光檢測(cè))
液相與氣相色譜儀的區(qū)別:
1、分析對(duì)象的區(qū)別
GC:適于能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品;但對(duì)高沸點(diǎn)、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型及高聚物的樣品,尤其對(duì)大多數(shù)生化樣品不可檢測(cè)占有機(jī)物的20%
HPLC:適于溶解后能制成溶液的樣品(包括有機(jī)介質(zhì)溶液),不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制,對(duì)分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差的生化樣品及高分子和離子型樣品均可檢測(cè)用途廣泛,占有機(jī)物的80%
2、流動(dòng)相差別的區(qū)別
GC:流動(dòng)相為惰性,氣體組分與流動(dòng)相無(wú)親合作用力,只與固定相有相互作用。
HPLC:流動(dòng)相為液體,流動(dòng)相與組分間有親合作用力,能提高柱的選擇性、改善分離度,對(duì)分離起正向作用。且流動(dòng)相種類較多,選擇余地廣,改變流動(dòng)相極性和pH值也對(duì)分離起到調(diào)控作用,當(dāng)選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動(dòng)相也可以增大分離選擇性。
3、操作條件差別
GC:加溫操作
HPLC:室溫;高壓(液體粘度大,峰展寬小)