每天用足夠的時間來維護色譜柱，您將節(jié)省更多用于處理色譜柱故障的時間，同時您的色譜柱的壽命也會變得更長！色譜柱的使用壽命，除了與所分析的樣品和流動相及使用頻率有關(guān)外，主要的是與日常的維護密切相關(guān)。色譜柱的使用壽命主要是根據(jù)柱效和柱壓兩個指標來衡量，如果一支色譜柱柱效太低或柱壓太高，通常被認為該色譜柱的使用壽命已經(jīng)結(jié)束。因此，延長色譜柱使用壽命的關(guān)鍵是，消除引起柱效下降和柱壓升高的因素。通過以下幾點幫助您完成色譜柱的日常維護工作。
流動相的pH 值
由于硅膠基質(zhì)的填料中存在Si-C和Si-O鍵，流動相超過其pH范圍將會導(dǎo)致硅膠基質(zhì)溶解和鍵合相碳鏈斷裂，使柱效下降，壽命變短。由于流動相的pH控制不當而對色譜柱造成的損害，通常很難使色譜柱恢復(fù)，因此必須認真對待，嚴格控制流動相的pH值。。
去除樣品和流動相中的固體顆粒
樣品和流動相中含有的固體顆粒物質(zhì)會堵塞色譜柱篩板，篩板被堵不僅會引起柱壓升高，而且也會引起柱效下降，因為篩板的堵塞會引起液流不均，導(dǎo)致色譜峰形拖尾、變寬，甚至出現(xiàn)雙峰，從而使柱效下降。因此，建議使用超純水和色譜純試劑，在分析前對樣品進行超聲、針筒過濾，流動相過0.45µm 濾膜，尤其是流動相加入了緩沖鹽（如NaH2PO4等），必須過濾。
博納艾杰爾為您提供了一系列高質(zhì)量的過濾產(chǎn)品，外殼采用聚丙烯材料，濾膜為意大利進口。種類有：混合纖維素（MCM）、尼龍（Nylon）、聚四氟乙烯（PTFE）、聚偏氟乙烯（PVDF）、 聚醚砜（PES）、增強型纖維素膜（Reg. Cellulose）、玻璃纖維、PP等，常用規(guī)格為：直徑13mm、25mm、33mm；孔徑：0.45µm、0.22µm等。
使用保護柱或在線過濾器
樣品和流動相經(jīng)過濾后并不能完全消除固體顆粒物質(zhì)，因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會產(chǎn)生固體顆粒物，這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱，堵塞篩板，導(dǎo)致柱壓升高、柱效下降。保護柱和在線過濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱篩板孔徑相同，因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例，因此，除對樣品和流動相進行過濾外，建議您在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器。
正確使用緩沖鹽
緩沖液可以提供離子平衡的反離子，并使流動相保持一定的離子強度和p H 值，減少拖尾。緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機溶劑，因此緩沖鹽使用不當會致其析出，堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙，使填料板結(jié)，柱壓上升；同時阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低。緩沖鹽析出后，去除非常困難，因此，正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。
正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出，因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話：使用前要過渡，使用后要沖洗。
具體方法如下：
a . 等度條件：使用緩沖鹽前用過渡流動相以1.0mL/min 流速沖洗20-30倍柱體積，然后再使用含有緩沖鹽的流動相；使用后去除緩沖鹽的方法是用過度流動相以1.0mL/min流速沖洗30倍柱體積，然后以純有機溶液沖洗30倍柱體積保存。
b .梯度條件：用含有緩沖鹽的流動相進行梯度洗脫之前，用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0mL/min流速沖洗30倍柱體積，再開始梯度的運行；分析完成后，再用過渡流動相以1.0mL/min沖洗色譜柱30倍柱體積，然后以純有機溶液沖洗30倍柱體積保存。
另外，在使用緩沖液的過程中還要注意以下幾點：
a .避免使用鹽酸鹽，鹽酸鹽對鋼質(zhì)有腐蝕作用；
b .緩沖液需現(xiàn)配現(xiàn)用，往往緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液，隔天或放置長時間實驗時會發(fā)生很多怪現(xiàn)象；
c .使用緩沖液要及時掌握pH范圍，做到胸中有數(shù)；
d .清洗液路和柱子時，有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗；
e.長時間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無析出，若有白色鹽類析出，定期用10%硝酸沖洗液路（拆下柱子，沖洗30mL10%硝酸溶液，再用5倍水沖洗）可以避免液路的堵塞；
f.選擇緩沖液要用可靠的試劑，避免不純的鹽類造成不必要的麻煩；
過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同，但是不含緩沖鹽的溶液。
防止強保留物質(zhì)在色譜柱中存留
強保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為，不僅引起峰形變寬、拖尾，使柱效下降，同時也會引起保留時間的變化，累積到一定程度時還會導(dǎo)致柱壓升高。由于強保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應(yīng)，需要一定的時間才會體現(xiàn)出來，但對許多樣品特別是復(fù)雜樣品而言，很難判斷其是否含有強保留物質(zhì)，因此要防止強保留物質(zhì)的累積，需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙腈30倍柱體積清洗色譜柱。
色譜柱的再生
a、反相柱
以下列溶劑順序沖洗30倍柱體積
乙腈－水（5:95） → THF → 乙腈－水（5:95）
b、正相柱
以下列溶劑順序沖洗30倍柱體積
正己烷 → 二氯甲烷 → 異丙醇 → 二氯甲烷 → 流動相
c、硅膠柱（Si）除水
30mL 2.5% 2,2 二甲氧基丙烷和2.5%冰醋酸正己烷溶液沖洗柱子
制備液相色譜中，有三個可以觀察到的狀態(tài)：柱壓、檢測器基線、譜圖。通過觀察和記錄這三個狀態(tài)可以監(jiān)測儀器是否正常。若某個狀態(tài)出現(xiàn)異常，故障排查和解決方案如下。
1、柱壓波動
1）吸液管路進氣泡
?、偃軇┎蛔?，吸濾頭吸入空氣，添加溶劑并排氣泡。
?、谖鼮V頭臟了或堵塞，用異丙醇（或5%稀硝酸）清洗。
?、廴軇┲杏袣馀荩ㄓ绕鋬煞N以上溶劑混合），超聲（或抽濾）脫氣。
2）泵流量不穩(wěn)
①單向閥堵塞，大流速purge，若不能解決，則需拆下單向閥（異丙醇）超聲清洗清洗或更換單向閥。
?、谥芊馊δp，更換密封圈。
?、郾妙^污染，柱塞桿往復(fù)活動受阻，清洗泵頭。
3）柱床塌陷，維修或更換色譜柱。
4）流動相混合后吸放熱導(dǎo)致溫度變化，以致柱壓波動，如乙腈和水混合吸熱，甲醇和水混合放熱。若影響實驗結(jié)果，則增加柱溫箱或流動相預(yù)混。
2、柱壓升高或超壓。
逐段排查堵塞的位置：
1）先拆下色譜柱，接上兩通運行，若是色譜柱堵塞：
?、龠M樣后樣品析出，用合適的溶劑反沖色譜柱。
②緩沖鹽析出，用大比例水相的流動相沖洗色譜柱。
?、蹤C械雜質(zhì)堵塞篩板，異丙醇小流速反沖色譜柱。
?、苌V柱污染嚴重，需維修或充填。
2）混合器堵塞，維修或更換。
3）六通閥堵塞，將泵液管路接到連接色譜柱的閥口處，將閥扳至load狀態(tài)，用易溶樣品的溶劑小流速沖洗。
4）壓力傳感器故障，維修或更換。
3、檢測器基線波動
1）基線有規(guī)律波動，且幅度較大，則可能有氣泡持續(xù)進入流通池。排查氣泡來源并用異丙醇沖洗檢測器或色譜柱。
2）基線小幅度規(guī)律波動，可能是檢測器燈能量不足（能量下降后，低波長下靈敏度先下降。
3）基線漂移。
?、倭鲃酉嘣诖藱z測波長下有吸收。更換流動相或改變波長。
②色譜柱或檢測池污染。以異丙醇沖洗色譜柱或檢測池，或?qū)z測池中透鏡玻片取出清洗。
4、譜圖重現(xiàn)性差
1）檢查方法設(shè)置，包括流速、梯度、波長。
2）檢查流動相配置是否有誤，A、B兩相是否放反。
3）檢查柱壓與之前是否有差異，若有變化，則前面1和2進行排查。
4）進樣前色譜柱是否完全平衡好。
5）樣品溶解方法。
1、反相柱
分別用甲醇:水=90:10，純甲醇（HPLC級），異丙醇（HPLC級），二氯甲烷（HPLC級）等溶劑作為流動相，依次沖洗，每種流動相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。
2、正相柱
分別用正己烷（HPLC級），異丙醇（HPLC級），二氯甲烷（HPLC級），甲醇（HPLC級）等溶劑做流動相，順次沖洗，每種流動相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大，可降低流速，避免壓力過高).注意使用溶劑的次序不要顛倒，用甲醇沖洗完后，再以相反的次序沖洗至正己烷，所有的流動相必須嚴格脫水。
3、離子交換柱
長時間在緩沖溶液中使用和進樣，將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降，用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生，反之，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。
另外，還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的.如果柱子裝反了，可以調(diào)回來，但可能會造成柱內(nèi)擔(dān)體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。
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