原子吸收分光光度計的維護與保養(yǎng)可以從光源、原子化系統(tǒng)、光學系統(tǒng)、氣路系統(tǒng)等方面進行。
1、原子吸收分光光度計光源:空心陰極燈應在大允許工作電流以下范圍內使用。不用時不要點燈,否則會縮短燈的使用壽命;但長期不用的元素燈則需每隔一兩個月在額定工作電流下點燃15~60min,以免性能下降。光源調整機構的運動部件要定期加油潤滑,防止銹蝕甚至卡死,以保持運動靈活自如。
2、原子吸收分光光度計原子化系統(tǒng):每次分析操作完畢,特別是分析過高濃度或強酸樣品后,要立即噴約數(shù)分鐘的蒸餾水,以防止霧化筒和燃燒頭被沾污或銹蝕。點火后,燃燒器的整個縫隙上方應是一片燃燒均勻呈帶狀的藍色火焰。若帶狀火焰中間出現(xiàn)缺口,呈鋸齒狀,說明燃燒頭縫隙上方有污物或滴液,這時需要清洗,清洗的方法是接通空氣,關閉乙炔的條件下,用濾紙插入燃燒縫隙中仔細擦試;如效果不佳可取下燃燒頭用軟毛刷刷洗;如已形成熔珠,可用細的金相砂紙或刀片輕輕磨刮以去除沉積物.應注意不能將縫隙刮毛.霧化器就經(jīng)常清洗,以避免霧化器的毛細管發(fā)生局部堵塞.若堵塞一旦發(fā)生,會造成溶液提升量下降,吸光度值減小.若儀器暫時不用,應用硬紙片遮蓋住燃燒器縫口,以免積灰.對原子化系統(tǒng)的相關運動部件要進行經(jīng)常潤滑,以保證升降靈活.空氣壓縮機一定要經(jīng)常放水、放油,分水器要經(jīng)常清洗。
3、原子吸收分光光度計光學系統(tǒng):外光路的光學元件就經(jīng)常保持干凈,一般每年至少清洗一次。如果光學元件上有灰塵沉積、可用擦鏡紙擦凈;如果光學元件上沾有油污或在測定樣品溶液時濺上污物,可用預先浸在乙醇與的混合液(1:1)中洗滌過并干燥了的紗布去擦試,然后有蒸餾水沖掉皂液,再用洗耳球吹去水珠。清潔過程中,禁用手去擦及金屬硬物或觸及鏡面。色器應始終保持干燥。
4、原子吸收分光光度計氣路系統(tǒng):由于氣體通路采用聚乙烯塑料管,時間長了容易老化,所以要經(jīng)常對氣體進行檢漏,特別是乙炔氣滲漏可能造成事故。嚴禁在乙炔氣路管道中使用紫銅、H62銅及銀制零件,并要禁油,測試高濃度銅或銀溶液時,應經(jīng)常用去離子水中噴洗。當儀器測定完畢后,應先關乙炔鋼瓶輸出閥門,等燃燒器上火焰熄滅后再關儀器上的燃氣閥,后再關空氣壓縮機,以確保安全。
分光光度計屬于精密儀器,應當妥善保管和精心維護,這樣才能保證分光光度計長期使用、長期的穩(wěn)定可靠、測量精度高。
分光光度計使用注意事項
1. 使用儀器前,使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理,以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前,應該對儀器的安全性能進行檢查。
2. 指針式儀器尚未接通電源時,電表指針必須位于零刻度上,若不是這種情況,則可以用電表上的校正螺絲進行調零。
3. 儀器在制造廠原包裝條件下,應儲存在環(huán)境溫度為5℃~35℃,濕度不超過85%的室內,且在空氣中不應有足以引起腐蝕的有害物質。
4. 儀器工作環(huán)境應在在干燥的房間內,使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上,室內照明不宜太強。
5. 比色皿使用完畢后,請立即用蒸餾水沖洗干凈,并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,以防止表面光潔度被破壞,影響比色皿的透光率。
6. 比色杯的配套性問題。比色杯必須配套使用,否則將使測試結果失去意義。
7. 鑒于儀器在出廠之前已經(jīng)調試到較佳狀態(tài),所以用戶不能擅自調整,更不能擅自打開機殼拆卸其中的零件(更換光源燈除外),尤其是拆卸單色器、不能碰傷或擦拭光學原件鏡面。
8. 如有故障急需自修,應在廠方技術人員同意指導下,請具有相應資質的專業(yè)人員進行檢查、調整和維修,建議返修。
微量分光光度計能夠快速準確的定量檢測核酸、蛋白質等溶液。具有使用方便、消耗樣品少(僅2μl)、不用預熱、能迅速清理殘留樣品、不需要比色皿或其它樣品定位裝置、樣品不需要稀釋等特點,常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量,目前已成為眾多實驗室的常規(guī)儀器。
工作原理
超微量分光光度計進行濃度測定的原理是根據(jù)朗伯-比爾(Lamber-Beer)定律,A=K·C·L 式中,A為吸光度;K為吸(消)光系數(shù);C為溶液的濃度;L為液層厚度。此公式說明:在入射光一定時,溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度成正比。此式就是光的吸收定律的數(shù)學表達式,又叫朗伯-比爾定律。
核酸定量
核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率最大的功能??梢远繙y定溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA以及RNA含量。這是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵,具有紫外吸收的特性,最大的吸收波長在260nm,吸收波谷在230nm。
除了核酸濃度,分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
蛋白質直接定量
這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。蛋白質直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受到平行物質的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。
比色法蛋白質定量
蛋白質通常是多種蛋白質的化合物,比色法測定的基礎是蛋白質構成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產(chǎn)生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數(shù)目直接相關,從而反應蛋白質濃度。
比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry 等幾種方法。
與傳統(tǒng)分光光度計相比,超微量分光光度計要求的樣品體積小,不需要比色皿,比色杯清洗方便,只需用干凈的吸水紙將樣品從檢測平臺上擦拭干凈即可。除此之外,實驗過程也更為簡單,不需預熱,可隨時檢測,檢測結果顯示吸光度值的同時,程序直接給出濃度值。超微量分光光度計與傳統(tǒng)相比,體積更小,更方便使用。