色譜柱在使用中常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加，屬于正?，F(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外，可能的原因有如下幾點(diǎn)： 1、色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染； 2、色譜柱頭的填料被樣品污染； 3、色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑，形成結(jié)晶析出； 4、流動相ph值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解?！ 〗鉀Q辦法如下： 1、如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10%的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱?！ ?、如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內(nèi)前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細(xì)修復(fù)后，重新安裝上柱頭螺絲。 3、如確定定是鹽結(jié)晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解，再換高濃度甲醇?！ ?、如果因ph值使用不當(dāng)，很難恢復(fù)。
影響色譜柱壽命和其它問題的因素很多，而有些因素是操作者很難控制的，如果被分析的樣品(如分析生物樣品)，怎么凈化樣品也是“臟"的，對于色譜柱的影響是非常大的。然而采取下列措施后，在多數(shù)情況下總能夠人為地減少色譜柱上故障，達(dá)到延長壽命的目的。
色譜柱預(yù)防及維護(hù)—避免高壓沖擊
一般色譜柱都能經(jīng)得起高壓，但經(jīng)不起突然變化的高壓沖擊。引起高壓突然沖擊，主要是因樣品閥的緩慢轉(zhuǎn)動、泵起動快、柱切換操作等。轉(zhuǎn)動六通進(jìn)樣閥時從泵到柱的液流會瞬時切斷。在閥的泵側(cè)壓力升高，在閥的柱側(cè)壓力降低(變化超過20%)。閥轉(zhuǎn)到底后壓力突然沖擊一下恢復(fù)正常。手動進(jìn)樣閥的變化不大，自動進(jìn)樣閥比較慢，可能造成壓力沖擊，可用氦氣代替空氣驅(qū)動進(jìn)樣閥。因氮壓縮系數(shù)小。另外泵起動不應(yīng)過快，可分步操作。如用3mL/min流速，先從lmL/min到2mL/min，然后再3mL/min，每個間隔應(yīng)大于20s。柱切換技術(shù)的應(yīng)用也很廣泛，切換過程中在色譜柱的入口處壓力在零到很大數(shù)字之間變化，會很快使柱報(bào)廢。
色譜柱預(yù)防及維護(hù)—分離條件
多數(shù)色譜柱有很寬的試驗(yàn)條件范圍，但具體應(yīng)用又受到限制，主要是pH值、柱溫和流動相的選擇。硅膠為基質(zhì)的鍵合相要求PH在2.5～7之間，極端pH的流動相能“溶解"硅膠，使鍵合相流失。結(jié)果非堿性組分的保留不斷減少，堿性組分的保留增加，引起堿性組分峰變寬。如果一定要用高或低pH的流動相，可加預(yù)柱(飽和柱)。預(yù)柱裝在泵和進(jìn)樣閥之間，用分析柱相同的填料填裝，或者用普通硅膠。硅膠飽和了流動相，減少了分析柱填料的損失。預(yù)柱不要求柱效高，用價格低的一般硅膠疏松地填裝，按期檢查硅膠的溶解情況。用預(yù)柱也有不利的影響，即新流動相難以平衡，保留時間不穩(wěn)定或穩(wěn)定慢。使用了預(yù)柱一定要加流路過濾器，以防止硅膠微粒引起的麻煩。以硅膠為基質(zhì)的柱和陰離子交換柱超過60℃后，會增加對流動相中化學(xué)物質(zhì)的吸附。在高溫下用小顆粒柱引起柱床塌陷，降低柱效，改變峰形。在40℃以上使用3μm柱，70℃以上使用5μm柱，會使值降低50%。
色譜柱預(yù)防及維護(hù)—加流路過濾器和保護(hù)柱
流路過濾器緊靠進(jìn)樣閥后面，位于分析柱前。0.5μm燒結(jié)不銹鋼片夾在死體積很小的套子中，擋住來源于樣品和進(jìn)樣閥墊圈的微粒入柱。因?yàn)槊總€樣品都過濾既費(fèi)事又帶來誤差，樣品量少過濾更困難，因此流路上裝過濾器是比較省事的辦法。也可以在流路加上保護(hù)柱，放在流路過濾器和分析柱之間，或者代替流路過濾器。保護(hù)柱的使命是收集阻塞色譜柱進(jìn)口的來自樣品的化學(xué)“垃圾"。這種垃圾最終降低柱效能。保護(hù)柱是消耗品，分析50～100個比較臟的樣品之后就要調(diào)換新的。保護(hù)柱應(yīng)該是小體積，用分析柱的同種填料填裝。保護(hù)柱使用得當(dāng)，對分離無影響，好像未裝保護(hù)柱一樣。有些廠商的商品將保護(hù)柱和流路過濾器連在一個單元內(nèi)，使用起來非常方便。自己填裝保護(hù)柱都是用短柱、不超過3cm長，內(nèi)徑2～3mm，用較大粒度的填粒(15～20μm)干法填裝，會使分析柱效略微有所降低。
色譜柱預(yù)防及維護(hù)—用強(qiáng)溶劑定期沖洗色譜柱
每次工作結(jié)束，用強(qiáng)溶劑沖洗柱是良好的習(xí)慣。可用甲醇、乙腈沖反相柱，沖去留在柱上的強(qiáng)吸附組分。用甲醇水為流動相時也應(yīng)沖洗。沖洗的程序在以下章節(jié)中介紹。柱頭的燒結(jié)不銹鋼濾片，要求平整，死體積小，孔徑適當(dāng)(2～5μm)。過濾片選擇不好會改變色譜峰形，增加阻力或起不到阻擋污染物的作用(填料很快變色)。
色譜柱預(yù)防及維護(hù)—凈化樣品
用溶劑溶解的樣品，多數(shù)組分在一定的時間內(nèi)能完全從柱中流出來，不會造成危害。有些樣品可能含有微粒物質(zhì)，樣品中的某種組分(如蛋白質(zhì))在柱頭上沉積下來，組分在固定相上保留很強(qiáng)，溶劑帶走柱填料等，這些都會造成柱效能下降或?qū)χ鶋勖挠绊懀斜匾扇〈胧┓乐怪儔摹?/p>
如在光線照射下觀察樣品是渾濁的或帶有乳白色，進(jìn)樣前必須要過濾．雖然流路上裝有過濾器和保護(hù)柱，但不能代替樣品的前處理，樣品中過多的微粒會使過濾器和保護(hù)柱超載，很快阻塞，或者微粒進(jìn)入分析柱，所以在進(jìn)樣前必須過濾樣品。
若懷疑樣品與流動相混合有沉淀而對色譜柱有阻塞，應(yīng)先試驗(yàn)一下，看樣品溶液加入流動相中有無變渾或乳白色出現(xiàn)。如果進(jìn)樣后壓力突然增加而后又慢慢減小，表明樣品中有微?；虬l(fā)生沉淀。如有沉淀要設(shè)法改變分離條件，包括換樣品溶劑和流動相或處理樣品去掉不溶物質(zhì)。應(yīng)盡量用小體積的樣品。
有些樣品能很強(qiáng)地吸附在柱填料上，這樣會降低塔板數(shù)，改變樣品的保留物質(zhì)外，還要加保護(hù)柱，定期清洗色譜柱。有時因?yàn)槭韬觯脤χ泻Φ娜軇┤芙鈽悠?，比如?mol/L的氫氧化鈉溶解樣品，這樣的樣品只要進(jìn)50～100μL到硅膠基質(zhì)柱中，硅膠就很快溶解而使柱報(bào)廢。在這種情況下，應(yīng)立即中和樣品，或除去原溶劑中的有害成分。
綜上所述，如何保護(hù)良好的柱性能與柱壽命：
1.認(rèn)真閱讀色譜柱使用說明書；
2.使用填充良好的色譜柱；
3.盡量減少壓力波動，避免機(jī)械及熱沖擊；
4.使用保護(hù)柱及在線過濾器；
5.經(jīng)常以強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱；
6.充分過濾樣品及流動相，盡量避免雜質(zhì)微粒與強(qiáng)保留成分；
7.用穩(wěn)定的固定相(C18穩(wěn)定);
8.在中等pH值操作時(6～8)，用有機(jī)緩沖溶液；
9.色譜柱使用溫度可以小于40℃；
10.硅膠基質(zhì)的色譜柱，應(yīng)保持流動相的pH值范圍在3.0～8.0；
11.在水流動相與緩沖溶液中加200ppm的疊氮鈉；
12.流動相中含有緩沖溶液，應(yīng)注意用95：5的水及有機(jī)溶劑過濾，有機(jī)溶劑不能低于5%；
13.貯存時，沖洗掉鹽和緩沖液，用純有機(jī)溶劑流動相保存。
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