如果載氣流量、分流比和柱溫等有變動時,保留時間、峰高和峰面積一定會發(fā)生變化。
一、出鈍峰:
出鈍峰指所出的樣品峰不尖,所有峰或一部分峰的頂部呈不規(guī)則形狀(平頭或圓形)。
1、進樣量太大使色譜柱或檢測器形成飽和。減少進樣量或降低樣品濃度。
2、進樣器是否漏氣,玻璃襯管是否破損。
3、采用分流進樣時,檢查分流比和分析條件的設置是否正確。
4、采用不分流進樣時,檢查分析條件的設置是否正確。
5、提高進樣器溫度和檢測器溫度,改善峰形。
二、峰高和峰面積重現(xiàn)性差:
峰高和峰面積重現(xiàn)性差指GC工作條件和樣品分析條件等均沒有變化的情況下,峰高和峰面積變化較大、重現(xiàn)性較差。
1、注射器性能是否正常,進樣是否存在操作失誤。
2、樣品濃度(特別是揮發(fā)性樣品)是否因放置時間過長而發(fā)生變化。
3、各種氣體的輸入壓力是否正常。
4、各種氣體的流量是否正?;虬l(fā)生變化。
5、進樣器、柱箱和檢測器等溫度是否穩(wěn)定。
6、如果峰高、峰面積和保留時間的重現(xiàn)性同時變差,上述檢查完成后再參照“保留時間重現(xiàn)性差”中各項進行檢查。
如果載氣流量、分流比和柱溫等有變動時,保留時間、峰高和峰面積一定會起變化。
三、出刀形峰:
出刀形峰指樣品出峰時上升緩慢而下降迅速,形如刀狀。
1、減少樣品進樣量。
2、提高柱箱溫度。
3、改用較大內徑的色譜柱。
4、增加固定液涂層厚度。
5、選用樣品溶解度較高的固定液。
6、提高進樣器溫度,改善峰形狀。
四、保留時間重現(xiàn)性差:
保留時間重現(xiàn)性差指GC工作條件和樣品分析條件等均沒有變化的情況下,保留時間變化較大、重現(xiàn)性較差。
1、色譜柱的一部分是否與柱箱內壁的金屬面接觸。
2、進樣墊、色譜柱和過渡襯管的安裝連接處是否漏氣。
3、載氣的輸入壓力是否正常。
4、載氣流量是否正?;虺霈F(xiàn)變化。
5、進樣器、柱箱和檢測器等溫度是否穩(wěn)定。
6、如果保留時間、峰高和峰面積的重現(xiàn)性同時變差,上述檢查完成后再參照“峰高和峰面積重現(xiàn)性差”中各項進行檢查。
五、出開叉峰:
出開叉峰指單一成分的樣品所出的峰上部有開叉現(xiàn)象。
1、進樣操作是否存在問題。
2、減少進樣量。
3、適當提高進樣器溫度,保證樣品充分氣化。
4、色譜柱的一部分是否與柱箱內壁的金屬面接觸。
5、將色譜柱入口端一側切除1~2mm或更換色譜柱。
6、采用不分流進樣時,如果需要較大進樣量,可在分析柱前加接數米長的緩沖色譜柱或把樣品溶劑換成與色譜柱固定相有較大親和力的溶劑。緩沖色譜柱指經過不活性處理的合金型二氧化硅毛細管或涂有極薄的與樣品溶劑有較大親和力的固定相的毛細管柱。
六、出拖尾峰:
出拖尾峰指樣品出峰結束回基線時有拖尾現(xiàn)象。
1、減少樣品進樣量。
2、進樣器玻璃襯管是否破損或污染。
3、載氣流量和隔膜清洗流量的設置是否正確。
4、進樣器溫度是否能保證樣品充分氣化。
5、尾吹氣流量的設置是否正確。
6、適當提高檢測器溫度。
7、檢測器是否被污染,必要時進行清洗。
8、色譜柱的安裝方法是否正確。
9、適當提高柱箱溫度。
10、將色譜柱入口端一側切除1~2mm或更換色譜柱。
七、出怪峰:
出怪峰指所出的峰與樣品成分不符,出現(xiàn)不應有的怪峰。
1、溶劑中是否混入雜質。
2、注射器或放置樣品的容器是否被污染。
3、隔膜清洗流量是否正常。
4、載氣是否被污染,氣體過濾器是否保養(yǎng)過。
5、如果怪峰是由于高沸點物質的溶出引起的,提高分析溫度或延長分析時間。
6、如果怪峰是由于樣品分解引起的,降低進樣口溫度。
7、如果怪峰是由于進樣墊的質量不好引起的,選用質量較好的進樣墊或將進樣墊老化。
八、只出溶劑峰:
只出溶劑峰指溶劑出峰正常,但樣品主成分(溶質)不出峰或出峰很小。
1、增加進樣量。分流進樣時降低分流比。
2、提高量程范圍或降低衰減倍數,設置較高靈敏度檔。
3、重新配制樣品,把樣品濃度控制在0.02%~10%之間。
4、可能溶質與溶劑的沸點差太小,降低柱箱溫度。
5、改用與溶質沸點差較大的溶劑。
6、可能色譜柱對樣品主成分(溶質)的保持力太強,提高柱箱溫,確認溶質從色譜柱溶出。
7、樣品沸點太高不能直接分析時,用其它化學方法進行前處理。
8、換用合適的色譜柱。
9、如果樣品的熱穩(wěn)定性較差,可能會在進樣器內分解或化合,降低進樣器溫度避免出現(xiàn)這種情況。
九、垂直回峰:
垂直回峰指樣品出峰的開始和結束相對基線呈垂直狀態(tài),幾乎沒有曲線部分,而正常的出峰形狀應為高斯分布。
1、通常是由于GC調零不適當,零點偏離色譜工作站的工作范圍。
2、色譜工作站在負方向的輸入電壓范圍較小。
3、如果GC零點與色譜工作站自身的零點負向偏離太大,會出現(xiàn)垂直回峰。重新調零后再進行分析。
十、色譜柱性能迅速退化:
色譜柱性能迅速退化指色譜柱性能迅速退化,導致樣品分離效果變差。
1、排除載氣被污染和泄漏等,檢查各種氣體的流量設置是否正確。
2、檢查是否由于樣品中的有害物質引起色譜柱性能退化。
3、某些色譜柱(如PLOT)在較大壓力變化下可能引起性能退化。
4、快速加熱、冷卻或較大進樣量可能引起某些沒有經過化學結合的色譜柱性能退化。
5、檢查是否在色譜柱允許的最高使用溫度以上操作。
首先從常規(guī)的幾個部件做個簡單的分析。
(一)輸液泵應具備如下性能:
?、賀SD(流量穩(wěn)定性)<0.3%;
②流量范圍寬,0.1~5.0ml/min內連續(xù)可調,有的實驗則需要更大流量;
?、圯敵鰤阂话銘苓_到150~400kg/cm2,流量越大,最高壓力越低;
④液缸容積小,有助于減少流動相死體積,利于清洗。
?、菝芊庑阅芎茫透g。
(二)檢測器
?、僮贤鈾z測器,分為可變單波長檢測器VWD和二極管陣列檢測器DAD,可以檢測有紫外吸收的物質
?、?font color="#0268CA">熒光檢測器,檢測有熒光的物質
③視差折光檢測器,通用型檢測器,但對環(huán)境要求極為苛刻,而且靈敏度低
?、蹺LSD,蒸發(fā)光散射檢測器
?、軲SD,質譜檢測器
常用的是紫外檢測,然后是MSD和ELSD
(三)色譜柱
要求柱效高、選擇性好,分析速度快等。目前市場上銷售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質的鍵合相、有機聚合物微球(包括離子交換樹脂)、氧化鋁、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,柱效理論值可達5~16萬/米。
一般的分析只需5000塔板數的柱效;同系物分析500即可;難分離物則可用2萬的柱子。
因此一般10~30cm左右的柱長基本能滿足復雜混合物分析的需要。所以要根據自己實際情況來選擇合適的柱子。
柱效受柱內外因素影響,為使色譜柱達到較佳效率,除柱外死體積要小外,還要有合理的柱結構(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術。即使可以的裝填技術,在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,靠近管壁的部位比較疏松,易產生溝流,流速較快,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬,這就是管壁效應。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中,柱外效應對柱效的影響遠遠大于管壁效應。
此外,溫度在色譜分析中是個不容忽視的環(huán)境條件,環(huán)境溫度對溶劑的溶解能力、色譜柱的性能、流動相的粘度都有影響。而且不同的檢測器對溫度的敏感度不一樣。保持恒定的溫度對實驗而言是個絕對不容忽視的條件,因此也要留意注溫箱的選擇。以保證實驗結果的準確性。
(四)進樣器
進樣裝置要求:密封性好,重復性好,死體積小,保證中心進樣,進樣時對色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。而且進樣方式多種多樣,可分為隔膜進樣、停流進樣、閥進樣、自動進樣。自動進樣器則是市場發(fā)展的趨勢。
(五)數據處理系統(tǒng)
一般專業(yè)的液相色譜儀生產廠家都有自己配套的液相色譜儀控制軟件。但有不少液相色譜儀可以使用通用型的色譜數據工作站進行數據計算處理。進口軟件價格比較高,這個自己得根據資金選擇了。
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