高效液相色譜儀的結構及功能介紹！
高效液相色譜儀（high performance liquid chromatography,HPLC）也叫高壓液相色譜（high pressure liquid chromatography）、高速液相色譜（high speed liquid chromatography）、高分離度液相色譜（high resolution liquid chromatography）等或Efficient liquid chromatographyspectrometry。是在經典液相色譜法的基礎上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。它與經典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜。又因分析速度快而稱為高速液相色譜。
高效液相色譜是應用較多的色譜分析方法，高效液相色譜系統由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對其流動相為液體的特點作出很多調整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn)；進樣系統要求進樣便利切換嚴密；由于液體流動相粘度遠遠高于氣體，為了減低柱壓高效液相色譜的色譜柱一般比較粗，長度也遠小于氣相色譜柱。HPLC應用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個領域。
使用高效液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由于被測物種不同物質與固定相的相互作用不同，不同的物質順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同的峰信號，最后通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質。高效液相色譜作為一種重要的分析方法，廣泛的應用于化學和生化分析中。高效液相色譜從原理上與經典的液相色譜沒有本質的差別，它的特點是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相，適于分析高沸點不易揮發(fā)、分子量大、不同極性的有機化合物。
高效液相色譜儀的結構及功能
HPLC儀一般由溶劑輸送系統、進樣系統、分離系統（色譜柱）、檢測系統和數據處理與記錄系統組成，具體包括儲液器、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀或數據工作站等幾部分。其中輸液泵、色譜柱和檢測器是HPLC儀的關鍵部分。
1. 溶劑輸送系統
儲液器：用來貯存數量足夠、符合要求的流動相。配有溶劑過濾器，以防止流動相中的顆粒進入泵內。
脫氣器：脫氣的目的是為了防止流動相從色譜柱內流出時釋放出氣泡進入檢測器，從而引起噪聲，不能正常檢測。
輸液泵：將儲液器中的流動相連續(xù)不斷地以高壓形式進入液路系統，使樣品在色譜柱中完成分離過程。
梯度洗脫裝置：是在分離過程中通過逐漸改變流動相的組成增加洗脫能力的一種裝置。
2. 進樣系統
進樣器：是將樣品送入色譜柱的裝置，進樣方式可以分為兩種：閥進樣或自動進樣。比較常用的是采用自動進樣器裝樣。
3. 分離系統
色譜柱：對樣品進行分離，是整個色譜系統的心臟，它的質量優(yōu)劣直接影響到分離的效果。
4. 檢測系統
檢測器：將色譜柱連續(xù)流出的樣品組分轉變成易于測量的電信號，被數據系統接收，得到樣品分離的色譜圖。
5. 數據處理和記錄系統
對色譜數據進行處理，并參與HPLC儀器的自動控制。
北京百歐博偉生物技術有限公司（biobw）是北京的一家專業(yè)于生物技術的研究與廣泛運用及推廣的高科技公司，位于北京企業(yè)林立的豐臺區(qū)造甲街，生物技術推廣及運用早于2011年開始，成立公司于2013年一月。本公司主要提供色譜耗材、色譜儀器、固相萃取裝置、化學試劑、樣品瓶、氘燈、標準品、微生物技術、菌種保藏服務以及ATCC產品代理等產品及服務。中國微生物菌種查詢網
氣相色譜儀或液相色譜儀操作中，當儀器的操作條件保持不變時，任一物質的色譜峰總是在色譜圖上固定的位置出現，即有一定的保留值。又包含：死時間，保留時間，校下保留時間，保留體積等等。
在液相色譜儀中保留值定性的方法主要是用直接與已知標準物對照的方法。當未知峰的保留值（t'R或V'R）與某一已知標準物完全相同時，則未知峰可能與此已知標準物是同一物質，特別是在改變色譜柱或改變洗脫液的組成時，未知峰的保留值與已知標準物的保留值仍能完全相同，則可以基本上認定未知峰與標準物是同一物質。
在利用保留值數據進行比對和定性分析時要特別注意到：由于液相色譜柱的填柱技術較復雜，液相色譜儀所使用的色譜柱的重現性目前還很不理想，即使是同一批號的柱子，重現性也不一致，這就使得使用保留值數據進行分析受到限制。因此，目前保留值數據只能作為定性分析的參考?？梢愿鶕@些數據和對樣品的了解來選用已知標準物，再用這些已知標準物與未知物在同一色譜條件下直接進行對比。
比較簡單的保留值定性方法是將已知標準物質加到樣品中去，若使某一峰增高，而且在改變色譜柱或洗脫液的組成后，仍能使這個峰增高，則可基本認定這個峰所代表的組分與已知標準物質為同一物質。
目前一些液相色譜儀儀器配備了三維圖譜檢測器，如二極管陣列檢測器，在進行未知組分與已知標準物質比對時，除了比較保留時間外，還可以比較兩個峰的立體圖形。如在使用二極管陣列檢測器時，除了比較未知組分與已知標準物質的保留時間外，還可比較兩者的紫外光譜圖，如果保留時間一樣，兩者的紫外光譜圖也完全一樣，則可基本上認定兩者是同一物質；若保留時間雖一樣，但兩者的紫外光譜圖有較大差別，則兩者不是同一物質。這種利用三維圖譜比較對照的方法大大提高了保留值比較定性方法的準確性。美國Bio-Rad公司的血藥分析儀（Remeeli）就是依靠三維圖譜的綜合數據的分析來鑒別未知藥物的。
1、分析對象的區(qū)別 GC：適于能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點較低的樣品；但對高沸點、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型及高聚物的樣品，尤其對大多數生化樣品不可檢測占有機物的20% HPLC：適于溶解后能制成溶液的樣品（包括有機介質溶液），不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，對分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差的生化樣品及高分子和離子型樣品均可檢測用途廣泛，占有機物的80% 2、流動相差別的區(qū)別 GC：流動相為惰性，氣體組分與流動相無親合作用力，只與固定相有相互作用?！ PLC：流動相為液體，流動相與組分間有親合作用力，能提高柱的選擇性、改善分離度，對分離起正向作用。且流動相種類較多，選擇余地廣，改變流動相極性和pH值也對分離起到調控作用，當選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相也可以增大分離選擇性。 3、操作條件區(qū)別 GC：加溫操作 HPLC：室溫；高壓（液體粘度大，峰展寬?。?/p>
449717568